简介:造血干细胞是最重要的成体干细胞之一,通常认为其能够通过程序性的分裂完成自我更新,并具备向下分化为完整血细胞谱系的能力,因此,自体造血干细胞被认为是人类血液疾病的治疗手段之一,受到了较大的关注和重视。由于哺乳动物的造血干细胞能够在成体中被分离出来并实现体外培养,因此关于其分裂和分化的行为倾向和调节因子方面的研究也已相当成熟、然而。囿于哺乳动物营胎生造成胚胎期活体观察的诸多不便,造血干细胞在体内的产生方式一直以来都悬而未决。本研究中使用的斑马鱼是一种硬骨鱼类,其在进化水平上与哺乳动物具有很高的相似性,具备相对完善的血液系统,更重要的是,在受精后0~7天(f)~7dpfdayspostfertilization)的斑马鱼幼鱼的皮肤是通体透明的、本研究基于此项独特优势,使用荧光蛋白转基因斑马鱼品系,实现在体观察尾部动脉血管腹侧壁的造血干细胞产生过程。后又使用另一个可变色荧光蛋白转基因品系TgLL将既有研究中发现的背部动脉前段产生之造血干细胞和尾部产生之造血干细胞进行分别标记和追踪,得出这两批产生时间和产生位置均不相同的造血干细胞在分裂和分化上的异同,希望能为斑马鱼和哺乳动物造血系统的相关研究提供新的思路和依据。
简介:目的探究ripply1基因在斑马鱼早期背腹轴发生过程中的作用.方法利用斑马鱼整封原位杂交技术揭示ripply1基因在斑马鱼早期胚胎发育过程中的表达模式,通过显微注射技术在胚胎1细胞期注射ripply1的mRNA来高表达Ripply1蛋白并在后期观察胚胎背腹标记基因的变化及胚胎形态变化.利用Tol2转基因技术构建ripply1启动子驱动的GFP转基因鱼.结果原位杂交结果显示ripply1基因在斑马鱼原肠早期胚盾期特异表达在胚盾处,即预定的背部.高表达ripply1后,在胚盾期背部标记基因表达范围扩大,腹部标记基因表达减弱,受精后24小时胚胎表现出严重的背部化表型:头部增大,腹部卵黄延伸减弱,尾部躯干及尾部区域减少,有的甚至形成了第二个体轴.得到的转基因鱼揭示ripply1母源表达,并且转录起始位点上游1200个碱基驱动的GFP能模拟内源基因的表达图式.结论ripply1可能参与斑马鱼胚胎早期背腹轴的发生.
简介:目的探讨一种可溶性的外分泌因子midkine-a在斑马鱼胚胎心脏发育过程中的功能.方法在整体胚胎上做midkine-aRNA的原位杂交实验;利用原有的转基因斑马鱼系Tg(pmidkine-a:EGFP),动态观察胚胎从出生到心脏发育成形这一段时间心脏荧光表达情况;将原有的转基因斑马鱼体系Tg(phsp:midkine-a:EGFP)胚胎进行热休克而过表达midkine-a,观察胚胎心脏表型;利用Tg(pcmlc2:dsRed)鱼系胚胎的心肌细胞核带有红色荧光,能进行单个心脏心肌细胞计数这一特点,将杂合的Tg(phsp:midkine-a:EGFP)鱼系与纯合的Tg(pcmlc2:dsRed)鱼系交配,以得到Tg(phsp:midkine-a:EGFP/pcmlc2:dsRed)的杂合胚胎,对其进行热休克而过表达midkine-a,计算每个胚胎心脏内心肌细胞的总数;用吗啉寡聚核苷酸(morphonino,MO)阻碍新生胚胎内的midkine-amRNA表达,观察胚胎心脏表型.结果原位杂交试验证实midkine-a在胚胎48hpf(hourpostfertilization,受精后,用来标记斑马鱼胚胎年龄)大时表达于心脏;转基因Tg(pmidkine-a:EGFP)胚胎在72hpf时其EGFP表达于心脏;Tg(phsp:midkine-a:EGFP)胚胎在过表达midkine-a后心脏变小;吗啉寡聚核苷酸敲除midkine-a对胚胎心脏发育无影响;最后在Tg(phsp:midkine-a:EGFP/pcmlc2:dsRed)鱼系胚胎内过表达midkine-a导致其单个心脏内心肌细胞数目变少,与其小心脏外形吻合.结论midkine-a在斑马鱼胚胎发育过程中表达于胚胎心脏;过表达midkine-a导致胚胎心脏内心肌细胞总数减少及心脏变小;敲除midkine-a则对胚胎心脏发育无影响.
简介:摘要目的初步探讨以L-FABP10GFP肝组织特异性转基因斑马鱼建立放射性肝损伤模型的可能性。方法出生后5天的斑马鱼,给予“剂量爬坡梯度”放疗,连续观察5天,了解幼鱼放疗安全性及安全剂量;结合“剂量爬坡”试验的结果及临床实践,选择合适的剂量进行放疗,连续观察5天,了解放疗后斑马鱼肝脏荧光强度、面积和形态的变化。结果“剂量爬坡”试验显示0、2、6、10、20、30、40Gy/次条件下的放射处理对斑马鱼是安全的;接近临床实践剂量40Gy/次的放疗处理未见斑马鱼肝脏荧光强度、范围及形态的变化。结论L-FABPGFP转基因斑马鱼放疗后54h内无法通过监测肝GFP荧光变化了解放射性肝损伤情况,该模型的建立仍需要进一步探讨。
简介:目的鉴于目前对斑马鱼视锥细胞视蛋白运输机制并不明确,且缺乏相应的抗体,本实验拟构建一种可以在视锥细胞中特异表达荧光的转基因斑马鱼.方法利用编码紫外敏感型视蛋白基因(sws1)的启动子,构建了一种在紫外敏感型视锥细胞中特异表达红色荧光蛋白tdTomato的转基因斑马鱼.同时,将tdTomato荧光蛋白与非洲爪蟾rhodopsin蛋白末端44个氨基酸相融合,将该融合蛋白定位于紫外敏感型视锥细胞的外节段,进而可模拟内源性视蛋白的定位.结果共筛选出三种不同品系的转基因斑马鱼,经过免疫组化分析,确定其中一种转基因品系是正确的目标品系.结论该转基因斑马鱼的构建将会为进一步研究视锥细胞中视蛋白的运输机制提供帮助.