摘要
目的：建立实时定量RT—PCR检测人转化生长因子β1(transforminggrowthfactorβ1，TGF-β1)的方法，对慢性肝炎肝纤维化患者外周血单个核细胞(peripheralbloodmononuclearcell，PBMC)中TGF-β1mRNA进行定量检测。方法：在TGF-β1基因的外显子1和2之间设计一对引物和一条TaqMan—MGB探针；构建TGF-β1质粒克隆，以T7RNA聚合酶体外转录合成带有目的片断的cRNA作为标准品，根据10倍系列稀释cRNA标准浓度对数和其循环域值(Cyclethreshold，Ct)制作标准曲线，检测PBMC中TGF—β1mRNA含量；并对本方法进行方法学评价。结果：重组质粒测序显示插入的片断为TGF—β1mRNA特异性片断，成功的建立了实时定量RT—PCR检测TGF-β1mRNA方法，灵敏度达6．81拷贝，线性范围为6．81～6．81×10^8拷贝，且重复性好，批内、批间变异系数分别为1．28％-2．27％和2．56％-2．61％，临床应用显示，27例肝纤维化病人PBMC中TGF-β1表达量为1．20×10^8(1．80×10^7～9．80×10^7)拷贝数／10^5细胞，显著高于正常对照组3．30×10^7(7．24×10^6～5．00×10^7)拷贝数／10^5细胞(P<0．05)。结论：实时定量RT-PCR检测TGF-β1mRNA具有敏感、特异、快速、高效等特点，为TGF—β1mRNA作为肝纤维化的诊断指标提供方法学依据。
出版日期
2004年03月13日（中国期刊网平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
