摘要
摘要目的探讨内质网应激（ERS）在二氧化硅（SiO2）诱导的RAW264.7细胞自噬中的作用及对肿瘤坏死因子-α（TNF-α）分泌的影响。方法以200 μg/ml SiO2刺激的RAW264.7细胞为体外细胞模型，以SiO2不同处理时间分组，包括0 h组（对照组）、6、12、24和48 h组，通过吖啶橙及单丹（磺）酰戊二胺荧光（MDC）染色检测细胞自噬小体的形成。应用实时聚合酶链反应（实时PCR）检测自噬相关分子Beclin1 mRNA表达，蛋白免疫印迹（western blotting）检测自噬相关蛋白LC3Ⅰ、LC3Ⅱ与Beclin1的表达；应用实时PCR和western blotting检测ERS特异标记分子BiP的表达；酶联免疫吸附法（ELISA）检测RAW 264.7细胞转化生长因子-β1（TGF-β1）和TNF-α的分泌。以ERS抑制剂4-PBA进行干预试验，包括空白对照组、SiO2组、1 μmol/L 4-PBA+SiO2组、10 μmol/L 4-PBA+SiO2组、20 μmol/L 4-PBA+SiO2组，检测各组LC3Ⅰ、LC3Ⅱ与Beclin1蛋白的表达及TGF-β1、TNF-α的分泌变化。结果与对照组比较，SiO2诱导RAW264.7细胞各时间组荧光强度均明显增强，差异均有统计学意义（P<0.05）；与对照组比较，SiO2诱导RAW264.7细胞各时间组的Beclin1 mRNA表达均明显增加，LC3Ⅰ、LC3Ⅱ和Beclin1蛋白表达均明显增加，差异均有统计学意义（P<0.05）；与对照组比较，SiO2诱导RAW264.7细胞6、12、24 h组BiP mRNA和蛋白表达均明显增加，6 h达高峰，差异均有统计学意义（P<0.05）；与SiO2组比较，随着4-PBA浓度增加，RAW264.7细胞的LC3-II和Beclin 1蛋白水平逐渐下调，差异均有统计学意义（P<0.05）；与SiO2组比较，1、10、20 μmol/L 4-PBA+SiO2组RAW264.7细胞TNF-α分泌水平明显下降，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论SiO2诱导的ERS可能参与了RAW264.7细胞自噬以及TNF-α的分泌过程。
出版日期
2020年08月10日（中国期刊网平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
