摘要
摘要目的观察激素性股骨头坏死(SONFH)患者来源的骨髓间充质干细胞(BMSCs)分泌的细胞外囊泡(SONFH-BMSCs-EVs)对正常BMSCs成骨分化的影响。方法骨髓来源于郑州大学第一附属医院的10例需行髋关节置换术的患者(激素性股骨头坏死5例，非股骨头坏死5例)，提取其中的BMSCs进行培养。采用差速离心法分离SONFH-BMSCs-EVs。将正常BMSCs中加入SONFH-BMSCs-EVs共培养作为实验组，对照组加入等量磷酸盐缓冲液(PBS)，分别用噻唑蓝(MTT)法，半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3/7活性实验检测SONFH-BMSCs-EVs对BMSCs的增殖、凋亡的影响。取第3代BMSCs进行成骨诱导，诱导过程中实验组加入SONFH-BMSCs-EVs，再进行茜素红染色，检测其对BMSCs成骨分化的影响。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)，蛋白质印迹法(Western blot)检测Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路上成骨相关因子基因、蛋白表达。采用单因素方差分析和t检验进行统计学分析。结果SONFH-BMSCs-EVs为大小不均的圆形膜性囊泡，粒径范围在40~200 nm之间，且表达CD63、CD9标志蛋白。共聚焦显微镜下显示细胞外囊泡可以被BMSCs摄取。MTT法检测BMSCs增殖能力实验组(0.5±0.1)明显低于对照组(1.0，t＝11.160，P<0.01)。Caspase-3/7活性实验检测BMSCs凋亡，实验组(1.4±0.2)明显高于对照组(1.0)，(t＝3.458，P<0.01)。茜素红染色结果显示实验组的红染染色阳性率显著小于对照组。Western blot结果显示Wnt/β-catenin信号通路上关键因子蛋白表达分别为β-catenin(实验组为0.68±0.10，对照组为1.37±0.17，t＝6.960，P<0.01)、Runt相关基因2(Runx2，实验组为0.66±0.13，对照组为1.30±0.16，t＝6.240，P<0.01)，差异均有统计学意义。RT-PCR检测实验组β-catenin、Runx2相对基因表达分别为0.59±0.12、0.66±0.08，差异有统计学意义(t＝6.960、6.240，P均<0.01)。结论激素性股骨头坏死患者来源的BMSCs分泌的细胞外囊泡可以抑制正常BMSCs增殖及成骨分化。
出版日期
2022年12月13日（中国期刊网平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
