摘要
摘要目的探讨干扰S期激酶相关蛋白1(S-phase kinase associated protein 1，SKP1)基因对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP+)诱导致帕金森病(Parkinson's disease，PD)细胞模型凋亡及泛素-蛋白酶体系统(ubiquitin-proteasome system，UPS)降解α-突触核蛋白(α-synuclein，α-syn)机制的影响。方法将SH-SY5Y细胞分为对照组、MPP+组、SKP1干扰组、SKP1干扰+ MG132(UPS抑制剂)组，对照组细胞正常培养，后三组细胞先用MPP+(0.5 mmol/L)孵育24 h作为PD模型细胞，SKP1干扰组转染慢病毒SKP1-siRNA，SKP1干扰+MG132组转染慢病毒SKP1- siRNA后加入MG132(0.5 μmol/L)干预24 h。采用RT-PCR和Western blot检测细胞中SKP1、微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein l light chain 3，LC3)、溶酶体相关膜蛋白2(lysosome-associated membrane protein，LAMP2)、α-syn、泛素激活酶E1(ubiquitin activating enzyme E1，UBE1)、parkin、p27的基因和蛋白表达水平；流式细胞仪检测细胞凋亡与细胞周期水平，CCK-8法检测细胞增殖水平；采用免疫共沉淀法探究SKP1与p27的相互作用。使用SPSS 23.0软件进行统计学分析，多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD检验。结果RT-PCR和Western blot结果显示，四组细胞的自噬相关蛋白及泛素相关蛋白LC3、LAMP2、α-syn、UBE1、parkin、p27的mRNA(F＝99.155，43.028，138.464，28.200，22.009，28.147，均P<0.05)和蛋白(F＝245.517，157.634，315.920，2 336.472，477.429，2 350.201，均P<0.05)表达水平均差异有统计学意义。SKP1干扰组LC3、LAMP2、α-syn、p27的mRNA和蛋白表达水平均低于MPP+组(均P<0.05)，UBE1、parkin的mRNA和蛋白表达水平均高于MPP+组(均P<0.05)；SKP1干扰+ MG132组LC3、α-syn、p27的mRNA和蛋白表达水平均高于SKP1干扰组(均P<0.05)，UBE1、parkin的mRNA和蛋白表达水平均低于SKP1干扰组(均P<0.05)。流式细胞术和CCK-8法检测结果显示，四组间细胞凋亡率和细胞抑制率均差异具有统计学意义(F＝2 749.420，171.508，均P<0.05)。SKP1干扰组细胞凋亡率低于MPP+组[(8.22±0.25)%，(15.30±0.21)%，P<0.05]，而细胞抑制率低于MPP+组[(26.31±3.73)%，(55.05±3.84)%，P<0.05]。SKP1干扰+ MG132组细胞凋亡率[(9.49±0.07)%]高于SKP1干扰组，细胞抑制率[(36.06±2.85)%]高于SKP1干扰组(均P<0.05)。免疫共沉淀法结果显示，SKP1免疫沉淀后，p27随之减少。结论干扰SKP1基因后，PD细胞自噬功能降低，可能与parkin促使α-syn发生泛素化，激活UBE1/parkin介导UPS通路降解α-syn，并介导P27抑制细胞凋亡有关。
出版日期
2022年12月13日（中国期刊网平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
