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  • 简介:摘要目的探讨应用RNAi技术降低神经纤毛蛋白-2(NRP-2)表达后对结肠癌细胞HCT-8增殖和凋亡的影响。方法通过脂质体lip2000分别将NRP2-siRNA和NControl-siRNA转染入HCT-8中作为转染组和阴性对照组,加入磷酸盐缓冲液作为空白对照组,通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western印迹法验证转染效果,采用细胞计数试剂盒(CCK)法、平板克隆实验和Ki-67蛋白染色实验检测3组细胞的增殖情况,吖啶橙/碘化丙啶(AO/PI)荧光染色实验检测3组细胞的凋亡情况。结果RT-qPCR和Western印迹法结果表明转染组细胞NRP-2 mRNA相对表达量和NRP-2蛋白含量降低(0.46±0.05比0.99±0.05和1.00±0.06,1.04±0.06比1.73±0.09和1.65±0.11)(均P<0.05),CCK法表明,转染组各时段的增殖能力较阴性对照组和空白对照组显著降低(24 h为0.53±0.04比0.82±0.07和0.87±0.07,48 h为0.54±0.05比1.00±0.09和1.17±0.05,72 h为0.75±0.05比1.31±0.13和1.50±0.03,96 h为1.05±0.04比1.46±0.09和1.86±0.06)(均P<0.05);平板克隆实验显示转染组细胞较其他两组克隆形成能力显著下降(134.67±8.74比245.33±19.14和300.33±14.01,P<0.05);Ki-67蛋白检测显示与对照组相比,转染组的细胞Ki-67含量显著下降(5.93±0.22比8.36±0.09和8.70±0.21,P<0.05);AO/PI实验显示转染组较对照组相比凋亡细胞/活细胞比例显著上升(0.43±0.07比0.14±0.04和0.11±0.04,P<0.05)。结论降低NRP-2表达可使结肠癌细胞HCT-8的增殖能力下降,凋亡能力上升。

  • 标签: 结肠肿瘤 Neuropilin-2 细胞增殖 细胞凋亡