简介：摘要目的建立同时检测疱疹病毒(human herpesvirus, HHV)-6A、B和核糖核酸酶P/MRP 30 kDa亚基(RPP30)的三重芯片式数字PCR(chip digital PCR，cdPCR)方法确定HHV-6A与HHV-6B感染的病毒载量，及高病毒载量的HHV-6是否由病毒整合到染色体导致。方法根据已建立的HHV-6A、HHV-6B实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR, RT-qPCR)方法，建立HHV-6三重cdPCR方法。分别使用HHV-6A、HHV-6B病毒培养物进行敏感性检测，并与其他疱疹病毒进行特异性检测。随后，使用127份全血样本进行三重cdPCR方法验证。结果HHV-6 cdPCR与RT-qPCR方法检测结果的相关性良好(R2>0.97)，且与其他疱疹病毒无交叉反应。对经RT-qPCR与cdPCR检测均为阳性的14份样本，经三重cdPCR方法检测，得到HHV-6A和HHV-6B的最低检测病毒载量分别为50拷贝/ml和105拷贝/ml。并且14份样本中HHV-6病毒载量与(RPP30拷贝数/2)的比值均小于1。结论建立的三重cdPCR具有较好的敏感性和特异性，且HHV-6三重cdPCR方法可以定量检测HHV-6A、HHV-6B的病毒载量以及RPP30的拷贝数。通过检测样本中HHV-6病毒载量与(RPP30拷贝数/2)的比值，可以确定高病毒载量的HHV-6是否存在染色体整合。

简介：摘要目的青岛地区2020年儿童肺炎住院患者人鼻病毒(human rhinovims，HRV)的分离与鉴定，为儿童肺炎的预防提供科学数据。方法收集2020年儿童肺炎住院患者的咽拭子样本，共计98份。应用荧光定量RT-PCR方法进行常见呼吸道病毒筛查，鉴定出HRV阳性的样本接种于H1-HeLa细胞，观察细胞病变。荧光定量RT-PCR鉴定后，扩增HRV-VP4/VP2基因并测序，使用MEGA软件构建系统进化树和同源性分析。结果98例肺炎住院患儿咽拭子样本中HRV阳性11例。接种H1-HeLa细胞，两份样本出现典型的细胞病变。经荧光定量RT-PCR鉴定为HRV病毒。VP4/VP2基因测序结果显示，分离的2株毒株的血清型分别为HRV-A28和HRV-A58。HRV-A28分离株与2011年新加坡参考株、2017年突尼斯参考株和2017年肯尼亚的参考株遗传距离较近，同属一个小分支。HRV-A58分离株与2009澳大利亚、2011年委内瑞拉、2011蒙古和2014年的美国的参考株的遗传距离较近，同属一个小分支。结论本研究首次在青岛地区的儿童肺炎患者咽拭子中分离出HRV-A28和HRV-A58毒株。

简介：摘要目的了解2019年秋冬季青岛地区手足口病住院患者柯萨奇病毒A组6型(coxsackievirus A6，CV-A6)流行情况及VP1区基因特征和种系进化关系。方法收集2019年秋冬季青岛地区手足口病住院患者104份咽拭子，使用肠道病毒通用RT-PCR筛选出阳性标本。再用肠道病毒VP1区的通用分型引物扩增阳性样本，扩增序列测序并进行BLAST比对。用CV-A6 VP1全长引物，扩增CV-A6阳性样本，扩增产物测序，通过DNAstar和MEGA软件进行核苷酸和氨基酸的同源性分析并构建系统发育树。结果104份咽拭子样本中，肠道病毒检测阳性60份，总体阳性率为57.7%，其中CV-A6阳性率26.9%(28/104)，柯萨奇病毒A组16型(CV-A16)阳性率30.8%(32/104)。对28份CV-A6阳性的样本进行VP1区全长扩增、测序并进行比对和同源性分析获得22株阳性序列，其核苷酸同源性为93.6%～99.9%，氨基酸同源性为98.0%～100%。系统进化分析表明22株CV-A6均属于D基因型中的D3亚型。结论引起2019年秋冬季青岛地区住院手足口病的病原体是CV-A6和CV-A16，CV-A6的流行株主要是D3亚型。

简介：摘要目的了解2020年冬季青岛地区上呼吸道感染患者的人鼻病毒(human rhinovirus，HRV)流行状况和基因分型特征。方法采集青岛地区101例上呼吸道感染患者的咽拭子样本，提取核酸，应用荧光定量PCR方法进行15种常见呼吸道病毒的检测。对检测出HRV阳性的样本，应用RT-PCR方法扩增HRV VP4/VP2区并测序，对测序所获得的序列进行系统进化树和同源性分析。结果101例上呼吸道感染患者样本中，涉及6种常见病毒。检出1种病毒感染的样本34例(34/101，33.66%)，检出混合病毒感染的样本2例(2/101，1.98%)。其中HRV的检出率最高，为21.78%(22/101)。扩增出20条HRV VP4/VP2区序列，分别为HRV-A组16株和HRV-C组4株，共涉及14种血清型。结论鼻病毒是2020年冬季青岛地区上呼吸道感染患者主要的病毒性病原之一，且以A组HRV感染为主。