简介：摘要目的建立武乡病毒(wuxiang virus, WUXV)的实时荧光定量TaqMan反转录聚合酶链式反应(real-time RT-PCR)检测方法。方法从GenBank中下载WUXV的全部基因序列，使用MEGA-X完成多序列比对分析，选择针对S段基因高保守区设计的引物和探针，分别对检测反应的特异性、灵敏性和稳定性进行评价。结果建立的方法可以特异性地检测WUXV，并且与多种虫媒病毒无交叉反应；反应的灵敏度较高，最低检测下限为1 pfu/ml；同一样品重复检测循环阈值(Ct)的批间变异系数均小于1.00%；用本研究建立的TaqMan RT-PCR检测30批白蛉核酸样本，其中7批出现WUXV阳性扩增曲线。结论本研究建立了灵敏度高、特异性强、重复性好的TaqMan RT-PCR方法可用于WUXV的大批量样本筛查。

简介：摘要目的建立一种灵敏且特异的实时荧光定量RT-PCR方法，用于快速检测盖塔病毒(getah virus, GETV)。方法从GenBank数据库下载GETV基因序列，使用Clustal X完成序列比对，针对高保守区段设计特异性引物和探针；以GETV核酸为标准品建立标准曲线，分别对检测反应的灵敏度、特异性和稳定性进行评价。结果本方法能特异地检测GETV，与多种虫媒病毒无交叉反应；灵敏度为1.0×10 pfu/ml，批内和批间变异系数均小于1%。从湖南、河北、福建、重庆采集的196批蚊虫中检出1批GETV阳性。结论建立了灵敏度高，特异性强的TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR方法用于GETV筛查。