简介：摘要目的观察Necrostatin-1对压力诱导的大鼠髓核细胞自噬及凋亡的影响。方法从3月龄大鼠腰段脊柱提取髓核细胞，选取第2代细胞进行实验，分为对照(生理盐水)组和Necrostatin-1组，1.0 Mpa压力条件下培养0、24、36 h。单丹黄酰尸胺(MDC)染色荧光显微镜观察自噬泡及细胞膜上MDC荧光表达情况，流式细胞仪检测MDC阳性率。膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/碘化丙锭(PI)染色流式细胞仪定量Annexin V阳性率；Hoechst 33258染色荧光显微镜观测细胞凋亡。反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测自噬相关基因Beclin1、LC3B和凋亡相关基因半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)的表达水平。组间比较采用t检验。结果压力作用24、36 h，荧光显微镜观察显示，与对照组比较，Necrostatin-1可明显下调细胞MDC及Hoechst 33258的荧光强度。流式检测显示，与对照组24、36 h的MDC阳性率(13.97±0.85、23.52±1.92)%及Annexin V阳性率(12.72±0.89、22.13±1.46)%比较，Necrostatin-1可明显下调MDC阳性率(t＝5.530、4.977，P<0.05)及Annexin V阳性率(t＝4.702、4.970，P<0.05)，差异有统计学意义。RT-PCR结果显示，与对照组24、36 h的Beclin1(2.76±0.13、2.65±0.14)、LC3B(3.62±0.18、4.54±0.65)及Caspase-3(2.04±0.15、3.28±0.39)、bax(3.56±0.42、4.82±0.66)基因表达比较，Necrostatin-1可明显抑制24、36 h压力诱导Beclin1(t＝8.192、2.836，P<0.05)、LC3B(t＝9.013、3.072，P<0.05)及Caspase-3(t＝3.048、3.277，P<0.05)、bax(t＝4.241、2.850，P<0.05)的基因表达，差异均有统计学意义。结论Necrostatin-1可明显抑制压力诱导的髓核细胞自噬及凋亡。

简介：摘要目的观察微小RNA(miR)-23a-3p通过调控Runx2基因对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的影响。方法绝经后骨质疏松症(PMOP)患者及正常的女性志愿者各30例，检测两组血清中miR-23a-3p表达水平。建立雌性小鼠骨质疏松模型后提取BMSCs，将miR-23a-3p inhibitor和miR-阴性对照(NC)分别转染入BMSCs，检测miR-23a-3p表达水平，同时检测成骨基因Runx2、骨钙素(OCN)、Ⅰ型胶原(Collagen Ⅰ)信使RNA(mRNA)，酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测细胞内碱性磷酸酶(ALP)含量。培养HEK293细胞，将miR-23a-3p模拟物和miR-NC分别于野生型Runx2 3’端非编码区(3’UTR)(WT)或突变型Runx2 3’UTR(Mut)重组质粒共转染，使用双荧光素酶报告系统检测荧光素酶活性。最后将miR-23a-3p inhibitor和miR-23a-3p inhibitor+siRunx2分别转染入BMSCs，检测Runx2蛋白、OCN、Collagen Ⅰ mRNA含量及ALP含量，两样本两组间比较采用t检验。结果PMOP患者血清中miR-23a-3p表达量高于对照组(0.872±0.307比0.382±0.183，t＝7.514，P<0.05)。转染miR-23a-3p inhibitor的BMSCs中miR-23a-3p表达量低于转染miR-NC组(0.480±0.045比1.361±0.113，t＝-16.213，P<0.05)，差异有统计学意义。转染miR-23a-3p inhibitor的BMSCs中Runx2蛋白、OCN、Collagen Ⅰ mRNA表达量及ALP含量高于转染miR-NC组[0.608±0.065比0.234±0.041，0.523±0.053比0.229±0.046，0.652±0.060比0.381±0.030，(5.569±0.377) U/L比(2.513±0.308) U/L，t＝9.409、9.036、10.846、14.036，P<0.05]，差异有统计学意义。生物信息学分析及双荧光素酶报告基因检测进一步证实了Runx2是miR-23a-3p的直接靶点。转染miR-23a-3p inhibitor+siRunx2的BMSCs中Runx2蛋白、OCN、Collagen Ⅰ mRNA表达量及ALP含量低于转染miR-23a-3p inhibitor组[0.373±0.051比0.600±0.083，0.321±0.015比0.645±0.030，0.417±0.027比0.617±0.065，(3.733±0.056) U/L比(6.751±0.091) U/L，t＝5.188、21.491、6.414、63.040，P<0.05]，差异有统计学意义。结论miR-23a-3p通过负调控Runx2基因的表达抑制BMSCs成骨分化。

简介：摘要目的观察骨肉瘤组织和细胞株中环状RNA circ_0000880表达，及其对骨肉瘤细胞增殖的影响。方法选取经病理确诊的骨肉瘤的标本共16例，采用circRNA高通量测序技术检测表达差异的circRNA。提取骨肉瘤及其癌旁组织总RNA，依据circ_0000880序列，设计divergent primer，扩增包含backsplice junction区域片段，随后连接入pGM-T载体进行测序鉴定。采用SYBR Green荧光定量PCR，分别检测骨肉瘤及其癌旁组织，骨肉瘤细胞MG63、SAOS-2、U2OS及正常人成骨细胞hFOB1.19中circ_0000880的表达水平。将circ_0000880小干扰RNA(siRNA)和circ_0000880 NC慢病毒转染至骨肉瘤细胞后检测细胞中circ_0000880的表达水平，并通过细胞计数试剂盒(CCK-8)及克隆形成实验检测对骨肉瘤细胞增殖的影响。两样本两组间比较用t检验。结果采用circRNA高通量测序技术检测结果显示骨肉瘤组织及细胞中circ_0000880的表达显著上调，并通过测序鉴定证实circ_0000880在骨肉瘤组织中存在、且为环状RNA。反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)结果显示circ_0000880在骨肉瘤组织中的表达量(2.032±0.165)显著高于其癌旁组织(1.105±0.155，t＝16.393，P<0.05)。circ_000088在骨肉瘤细胞系MG63(2.252±0.140)、SAOS-2(2.134±0.176)、U2OS(2.011±0.226)中表达量均显著高于正常人成骨细胞(1.000±0.092，F＝71.299，P<0.05)。转染circ_0000880 siRNA的MG63细胞中circ_0000880表达量明显下降(0.646±0.058)，转染circ_0000880 NC的MG63细胞中circ_0000880表达水平(1.005±0.121)与空白组(1.000±0.201)比较差异无统计学意义(F＝17.977，P<0.05)。CCK-8及克隆形成试验结果显示，与空白组和阴性对照组比较，转染circ_0000880 siRNA的骨肉瘤细胞增殖能力显著受到抑制。结论骨肉瘤组织及细胞中circ_0000880表达显著上调，敲低circ_0000880表达可显著抑制骨肉瘤细胞的增殖能力。

简介：摘要目的探讨吸烟男性患者围手术期静脉使用氨甲环酸的安全性。方法通过前瞻性的临床对照试验，根据纳入和排除标准，筛选2017年1月至2020年12月在郑州大学第一附属医院行膝关节置换术的患者120例，分为3组，吸烟患者术中静脉应用氨甲环酸；吸烟患者术中不应用氨甲环酸以及不吸烟患者术中静脉应用氨甲环酸。纳入标准为，中重度骨关节炎患者，年龄60～80岁男性；初次膝关节置换术；患者及家属同意参加试验并签署知情同意书；试验组术前1年以上吸烟史，未戒烟；对照组无吸烟史或戒烟1年以上。排除标准为，双侧同时行膝关节置换术；术前无严重并发症；术前无影响凝血疾病；术前无影响凝血药物应用史；无氨甲环酸过敏；无膝关节感染。所有患者由同一主任医师行膝关节置换术，应用氨甲环酸患者在切皮前及假体装入后给予1.0 g氨甲环酸静滴。分别统计患者手术时间、术中出血量、术后引流量、隐性失血量、输血量、术前术后凝血指标、术后静脉血栓事件及并发症。采用χ2检验、独立样本t检验进行数据分析。结果吸烟与不吸烟患者应用氨甲环酸后术后Hct水平较均显著高于不应用氨甲环酸组患者(吸烟+氨甲环酸0.36±0.05，单纯吸烟组0.30±0.08，单纯氨甲环酸组0.35±0.10，t1＝1.819，P1<0.01，t3＝2.469，P3<0.05)，且术后Hct变化值(吸烟+氨甲环酸0.12±0.02，单纯吸烟组0.18±0.05，单纯氨甲环酸组0.10±0.07，t1＝7.047，P1<0.01，t3＝5.882，P3<0.01)和Hb变化值[吸烟+氨甲环酸(45.5±12.0) g/dL，单纯吸烟组(55.0±8.4) g/dL，单纯氨甲环酸组(41.5±12.2) g/dL，t1＝4.102，P1<0.01，t3＝5.764，P3<0.01]差异有统计学意义，单纯吸烟组患者的术后引流量[(661.80±358.11) ml，t1＝2.319，P1<0.05，t3＝2.914，P3<0.01]、隐性失血量[(451.51±389.73) ml，t1＝2.782，P1<0.01，t3＝3.947，P3<0.01]及计算的总失血量[(1 113.31±729.33) ml，t1＝2.678，P1<0.01，t3＝3.518，P3>0.05]均显著高于吸烟+氨甲环酸[术后引流量(500.82±254.11) ml，隐性失血量(261.22±187.73) ml，总失血量(752.03±442.82) ml]和单纯氨甲环酸组[术后引流量(463.13±240.34) ml，隐性失血量(197.21±119.14) ml，总失血量(660.35±362.48) ml]，术后输血的概率也显著增高(吸烟+氨甲环酸7/33，单纯吸烟组18/22，单纯氨甲环酸组8/32，χ12＝0.704，P1<0.01，χ32＝5.698，P3<0.05)，差异有统计学意义。结论吸烟患者在关节置换术围手术期应用氨甲环酸可以显著的减少出血量和输血的概率，未显著增加患者深静脉血栓的发生率。