简介:摘要目的观察骨肉瘤中环状RNA circ_0052012表达和沉默环状RNA circ_0052012表达对骨肉瘤细胞增殖和侵袭的影响。方法实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)方法检测2017年10月至2018年12月郑州大学第一附属医院确诊的31对骨肉瘤标本癌组织和癌旁正常组织circ_0052012表达水平。使用针对circ_0052012的小干扰RNA(siRNA)转染骨肉瘤细胞系MG63,将体外培养的MG63细胞分为空白组(未转染)、阴性对照组(转染阴性对照si-NC)和沉默组(转染si-circ)。采用细胞增殖实验和Transwell实验,检测沉默RNA circ_0052012表达对MG63细胞增殖和侵袭的影响。采用生物信息学方法预测circ_0052012与微小RNA(miRNA,miR)-7的结合位点,利用双荧光素酶报告实验、RT-qPCR技术和Pearson相关分析,验证circ_0052012对miR-7的靶向调控作用及其在骨肉瘤中表达水平的相关性。两组间数据比较采用t检验,多组间数据比较采用单因素方差分析(ANOVA)。结果骨肉瘤组织中circ_0052012的表达水平显著高于对应癌旁正常组织,差异有统计学意义(2.452±1.061比1.007±0.644,t=10.180,P<0.01),且circ_0052012表达水平与骨肉瘤TNM分期、远处转移呈明显正相关(P<0.05)。在骨肉瘤细胞系MG63中,培养24、48、72 h后,circ_0052012沉默组细胞的增殖(0.297±0.012、0.607±0.074、0.797±0.067)均明显低于空白对照组(0.407±0.035、0.820±0.070、1.287±0.050)和阴性对照组(0.383±0.012、0.853±0.064、1.240±0.092),差异有统计学意义(24 h,t=-5.154、-9.192,P<0.01;48 h,t=-3.635、-4.391,P<0.05;72 h,t=-10.170、-6.778,P<0.01)。沉默组细胞的侵袭能力(39.400±6.066)也明显低于空白对照组(132.600±8.620)和阴性对照组(126.000±10.950),差异有统计学意义(t=-19.770、-15.460,P<0.01)。双荧光素酶报告实验证实circ_0052012与miR-7靶向结合,且在骨肉瘤组织中的表达呈明显负相关(r=-0.661,P<0.05)。通过抑制miR-7,可部分逆转沉默circ_0052012对MG63细胞增殖和侵袭的抑制作用。结论在骨肉瘤细胞中,沉默circ_0052012可通过上调miR-7表达,抑制细胞的增殖和侵袭。