简介：摘要目的研究新生儿下呼吸道流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae，Hi)分离株β-内酰胺类抗生素耐药趋势变化与分子耐药机制。方法对19株新生儿Hi分离株进行再鉴定，通过PCR法测菌株P6、fucK和Cap基因进行血清学分型，用肉汤微量稀释法检测氨苄西林、阿莫西林克拉维酸和头孢呋辛最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration，MIC)；对TEM-1、ROB-1和ftsI基因进行测序和变异分析。结果(1)19株Hi经P6、fucK和Cap基因检测证实均为无荚膜型，即不可分型流感嗜血杆菌(non-typeable Haemophilus influenzae，NTHi )。(2)与2003至2004年比较，2013至2014年新生儿下呼吸道NTHi分离株氨苄西林、阿莫西林克拉维酸和头孢呋辛的MIC值明显增高，差异有统计学意义(P<0.05)。(3)2003至2004年(n＝9)和2013至2014年(n＝10)产β-内酰胺酶菌株均为3株，10年间比较差异无统计学意义(P>0.05)；BLA基因检测显示6株产β-内酰胺酶均为TEM-1型，未检测出ROB-1型菌株。(4)2003至2004年仅出现1株基因型β-内酰胺酶阳性氨苄西林耐药(gBLPAR)，2013至2014年出现基因型β-内酰胺酶阴性氨苄西林耐药(gBLNAR)1株、基因型β-内酰胺酶阴性氨苄西林中介(gBLNAI)3株、gBLPAR 3株、基因型β-内酰胺酶阳性阿莫西林克拉维酸耐药(gBLPACR)1株。(5)2013至2014年ftsI基因出现了11个氨基酸替代模式，而2003至2004年仅出现5个氨基酸替代模式；10年间比较ftsI基因S357N、S385T、N526K、T532S变异率显著增加，差异有统计学意义(P<0.05)。1株2014年分离的耐氨苄西林、阿莫西林克拉维酸和头孢呋辛的gBLNAR/gBLNACR菌株同时出现D350N、S357N、M377I、S385T、L389F、A502T、N526K变异。结论新生儿下呼吸道NTHi感染患儿或将迅速面临β-内酰胺类抗生素多重耐药的严峻挑战。