简介：无

简介：摘要目的探索微小RNA(miR)-340-5p在胰腺导管腺癌细胞(PDAC)中表达及影响其生物学行为的机制。方法实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测40例胰腺导管腺癌与正常细胞中miR-340-5p的表达，研究其表达水平与临床特征之间的联系。检测不同胰腺导管腺癌细胞及人胰腺导管上皮细胞中miR-340-5p水平。miR-340-5p模拟物转染PDAC细胞株PANC-1；甲基噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖活性；划痕实验、Transwell侵袭实验检测细胞侵袭迁移能力。RT-qPCR及蛋白质印迹法(Western blot)检测N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达。双荧光素酶报告基因分析实验检测miR-340-5p对RhoA的调控功能。结果PDAC组织中miR-340-5p水平低于正常胰腺组织(0.362 4±0.083 7、0.965 2±0.129 9，t＝21.272，P<0.01)；PDAC中miR-340-5p表达降低与胰腺癌淋巴结转移(χ2＝7.782，P<0.01)、肝转移(χ2＝17.109，P<0.01)有相关。双荧光素酶报告基因分析结果表明，野生型RhoA的荧光素酶活性在转染miR-340-5p模拟物后低于对照组(0.992 5±0.099 8比0.177 5±0.019 0，t＝18.496，P<0.01)。转染后，转染组细胞增殖活性降低(0.505 2±0.077 1比1.031 0±0.069 1、1.029 5±0.113 5，t＝38.012、7.637，P<0.01、迁移距离减少(0.753 3±0.050 1、0.725 0±0.071 5比0.338 3±0.087 7，t＝11.098、7.031，P<0.01)、迁移细胞数减少(57.000 0±4.290 0、52.666 7±5.785 0比19.833 3±2.994 0，P<0.01)。Western blot及RT-qPCR结果显示，与空白对照组(NC)及阴性对照组(Scramble)比较，miR-340-5p模拟物转染组N-cadherin(1.048 3±0.076 9、1.040 7±0.079 2比0.457 3±0.074 5，t＝11.800、11.585，P<0.01)、Vimentin(1.045 3±0.062 8、0.993 3±0.068 6比0.521 7±0.057 9，t＝10.982、9.585，P<0.05)、MMP-9(1.047 0±0.069 6、1.154 3±0.101 1比0.560 3±0.457 1，t＝32.803、18.559，P<0.01)表达显著降低，E-cadherin(1.053 3±0.100 3、0.987 7±0.083 4比1.976 0±0.154 2，t＝－29.502、－24.203，P<0.01)表达升高。结论胰腺导管腺癌中miR-340-5p表达降低，过表达miR-340-5p后能明显抑制PANC-1细胞的体外增殖和转移。其对RhoA信号通路介导的上皮-间充质转化(EMT)进程具有潜在抑制作用。