简介：摘要目的探讨RA-成纤维样滑膜细胞（FLS）中双特异性磷酸酶8（DUSP8）DUSP8与促分裂原活化蛋白激酶（MAPK）1之间的相互作用，及其对RA-FLSs增殖、凋亡的影响。方法培养RA-FLS和正常FLS，采用实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）、蛋白质印迹法检测两组细胞DUSP8 mRNA表达水平。采用细胞转染技术及RNA干扰技术，构建DUSP8过表达细胞系及DUSP8沉默细胞系。CCK-8法检测各组细胞增殖，流式细胞术检测各组细胞凋亡。蛋白质印迹法检测各组细胞DUSP8、MAPK1、p-MAPK1、ki-67、Bax蛋白表达水平。间接免疫荧光实验分析DUSP8与MAPK1的空间共定位，免疫共沉淀实验分析DUSP8与MAPK1蛋白之间是否存在相互作用。计量资料两组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD-t检验。结果DUSP8在RA-FLS mRNA[（2.4±0.6）和（11.2±0.8），t=21.63，P<0.001]和蛋白表达[（0.24±0.04）和（0.74±0.08），t=9.45，P<0.001]水平均显著低于FLS。与空白对照组和过表达对照组相比，在RA-FLS细胞转染pcDNA3.1-Myc-DUSP8可显著抑制RA-FLS细胞的增殖[（90.5±5.6），（92.5±1.8），（56.4±4.4），F=138.60，P<0.001]，增加细胞凋亡率[（12.7±1.4）%和（12.6±1.3）%和（27.5±3.0）%，F=16.98，P<0.001]，上调细胞的DUSP8'[（0.49±0.05），（0.45±0.04）和（0.73±0.07）]、Bax[（0.39±0.06），（0.36±0.05）和（0.89±0.10）]蛋白表达水平，下调ki-67[（1.07±0.12）和（1.11±0.16）和（0.70±0.08）]、p-MAPK1/MAPK1[（0.59±0.06）和（0.65±0.07）和（0.39±0.03）]蛋白表达水平（均P<0.001）；与空白对照组和沉默对照组相比，在RA-FLS细胞转染siRNA-DUSP8可显著促进RA-FLS细胞的增殖[（90.5±5.6）和（91.1±2.9）和（128.3±4.6），F=137.50，P<0.001]，降低细胞凋亡率[（12.7±1.4）%和（13.2±1.2）%和（5.4±0.7）%，F=16.98，P<0.001]，下调细胞中的DUSP8[（0.492±0.048）和（0.432±0.051）和（0.102±0.024）]、Bax[（0.391±0.062）和（0.411±0.058）和（0.090±0.011）]蛋白表达水平，上调ki-67[（1.07±0.12）和（1.11±0.15）和（1.93±0.22）]、p-MAPK1/MAPK1[（0.59±0.06）和（0.68±0.06）和（0.93±0.11）]蛋白表达水平（均P<0.05）。间接免疫荧光实验结果表明DUSP8与MAPK1均可在RA-FLS细胞质和细胞核中表达，免疫共沉淀实验验证DUSP8与MAPK1蛋白具有相互作用。结论DUSP8通过与MAPK1相互作用调节MAPK1磷酸化，抑制类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖，并促进凋亡。

简介：摘要目的探讨C-Fos与丝裂原活化蛋白激酶14（MAPK14）相互作用参与调控类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞（RA-FLS）增殖、凋亡的机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链式反应PCR（RT-qPCR）、蛋白质印迹法检测RA-FLS和正常成纤维样滑膜细胞（FLS）细胞C-Fos mRNA和蛋白表达水平。将RA-FLS细胞分为C-Fos过表达组（转染pcDNA3.1-Myc-C-Fos质粒）、过表达对照组（转染pcDNA3.1-Myc空质粒）、C-Fos沉默组（转染siRNA-C-Fos）、沉默对照组（转染siRNA-NC）和空白对照组（未加任何处理）。细胞计数试剂（CCK-8）检测各组细胞增殖能力，流式细胞实验检测各组细胞凋亡的变化，蛋白质印迹法检测各组细胞C-Fos、MAPK14、p-MAPK14、ki-67、Bax蛋白表达水平。间接免疫荧光实验检测C-Fos和MAPK14在细胞中的定位关系。免疫共沉淀方法检测C-Fos-MAPK14的相互作用关系。采用GraphPad Prism 5统计学软件进行数据分析，正态分布的数据以±s表示，2组间比较采用独立样本t检验；多组比较采用应采用方差分析，进一步两两比较采用LSD-t检验。结果RA-FLS细胞中C-Fos mRNA（5.37±0.91）相对表达量明显高于FLS细胞（1.46±0.32）（t=9.94，P<0.001）。C-Fos在RA-FLS蛋白水平（1.12±0.15）均显著高于FLS（0.81±0.07）（t=3.18，P=0.017）。与空白对照组和过表达对照组相比，过表达C-Fos可显著促进RA-FLS细胞增殖，抑制细胞凋亡率，上调细胞p-MAPK14、ki-67蛋白水平，下调细胞Bax蛋白水平（均P<0.05）；与空白对照组和沉默对照组相比，沉默C-Fos可显著抑制RA-FLS细胞的增殖，增加细胞凋亡率，下调细胞p-MAPK14、ki-67蛋白水平，上调细胞Bax蛋白表达水平（均P<0.05）。间接免疫荧光实验结果表明C-Fos与MAPK14均可在RA-FLS细胞核中表达，免疫共沉淀实验验证C-Fos与MAPK14蛋白具有相互作用。结论C-Fos与MAPK14相互作用促进磷酸化MAPK14蛋白表达，从而促进RA-FLS增殖，并抑制凋亡。