简介:摘要目的探讨七氟醚通过炎症类受体蛋白-3(Nod-like receptor associated protein 3, NLRP3)介导的细胞焦亡途径对蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage, SAH)后早期脑损伤(early brain injury, EBI)的影响。方法108只10~12周雄性C57BL/6小鼠,按随机数字表法分为3组(每组36只),假手术组(A组)、模型组(B组)和模型+七氟醚组(C组)。B组和C组采用线穿法制作SAH模型,A组做相同的手术,但不刺破大脑中动脉。C组于SAH模型建立后1 h,持续吸入3%七氟醚和空气1 h。各组小鼠进行SAH分级和神经功能评分,测定脑水含量,伊文思蓝(evans blue, EB)染色法计算EB渗出量评判小鼠血脑屏障通透性;Western blot法检测与血脑屏障通透性密切相关的基质金属蛋白酶9(matrix metalloprotein 9, MMP-9)和紧密连接蛋白[闭合小环蛋白-1(zonula occludens-1, ZO-1)、咬合蛋白(occludin)、靠停蛋白-5(claudin-5)]及NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing CARD, ASC)、裂解半胱氨酸蛋白酶(caspase-1)、IL-18、IL-1β的表达;实时荧光定量PCR检测NLRP3 mRNA、caspase-1 mRNA的表达水平;caspase-1活性检测试剂盒检测caspase-1的活性;TUNEL和NeuN双重染色检测神经细胞焦亡情况。结果SAH分级和神经功能评分显示:与A组比较,B组的SAH分级明显增高(P<0.05);与B组比较,C组SAH分级明显降低(P<0.05);与C组比较,B组的神经系统评分明显降低(P<0.05)。脑水含量及EB渗出量检测显示:与A组比较,B组的脑含水量与EB渗出量明显增加(P<0.05);与B组比较,C组的脑含水量与EB渗出量明显减少(P<0.05)。Western blot检测结果显示:与A组比较,B组中ZO-1、occludin和claudin-5蛋白表达水平明显降低(P<0.05),NLRP3、ASC、裂解caspase-1、IL-1β和IL-18的蛋白表达水平明显增高(P<0.05);与B组比较,C组中ZO-1、occludin和claudin-5表达水平明显增高(P<0.05),NLRP3、ASC、裂解caspase-1、IL-1β和IL-18表达水平明显降低(P<0.05);与A组比较,B组中MMP-9表达水平明显增高;与B组比较,C组中MMP-9表达水平明显降低(P<0.05)。实时荧光定量PCR实验显示:与A组比较,B组中NLRP3和caspase-1的mRNA水平明显增加;与B组比较,C组中NLRP3和caspase-1的mRNA水平明显降低(P<0.05)。与A组比较,B组的caspase-1活性明显增加;与B组比较,C组的caspase-1的活性明显减少(P<0.05)。TUNEL染色检测显示:与A组比较,B组的TUNEL阳性神经元细胞数量明显升高(P<0.05);与B组比较,C组TUNEL神经元细胞阳性数量明显降低(P<0.05)。结论七氟醚能够抑制SAH后NLRP3炎症小体介导的细胞焦亡,改善SAH后的EBI情况。
简介:摘要目的探讨损伤控制性复苏对低温失血性休克大鼠海马神经元细胞凋亡的影响。方法选取32只健康成年雄性SD大鼠(体重450~500 g,12~15周龄),采用随机数表法将其分为低温假手术组(Sham组)、低温失血性休克组(HS组)、损伤控制性复苏组(DCR)组及损伤控制性复苏渥曼青霉素(DCR-W)组,每组8只。Sham组仅行穿刺操作,HS组、DCR组及DCR-W组建立低温失血性休克模型。HS组不复苏,DCR-W组腹腔注射15 μg/kg的渥曼青霉素。DCR组和DCR-W组在休克1 h后行全血复苏。术后5 h处死大鼠,取海马组织,采用氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测海马区神经元细胞凋亡情况,Western-blot检测海马组织中蛋白激酶B(Akt)、磷酸化的Akt的Ser473位点(p-AktSer473)、磷酸化的糖原合酶激酶3β亚型的Ser9位点(p-GSK3βSer9)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(Caspase-9)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)蛋白表达水平。结果DCR组平均积分光密度值(8.06±0.64)低于HS组(12.78±1.14)及DCR-W组(11.34±1.23),差异有统计学意义(P<0.05);HS组、DCR组、DCR-W组阳性细胞核的数目均多于Sham组,差异有统计学意义(P<0.05)。HS组p-AktSer473蛋白表达水平(0.12±0.02)低于Sham组(0.21±0.04);HS组p-GSK3βSer9蛋白表达水平(0.08±0.01)低于Sham组(0.15±0.02),差异有统计学意义(P<0.05);DCR组p-AktSer473蛋白表达水平(0.46±0.04)高于HS组(0.12±0.02)及DCR-W组(0.08±0.01),差异有统计学意义(P<0.05);DCR组p-GSK3βSer9蛋白表达水平(0.29±0.04)高于HS组(0.08±0.01),差异有统计学意义(P<0.05)。HS组的Caspase-9蛋白表达水平(0.81±0.08)高于Sham组(0.16±0.03),HS组的Caspase-3蛋白表达水平(0.72±0.08)高于Sham组(0.11±0.02),DCR组Caspase-9及Caspase-3的蛋白表达水平[(0.28±0.03)、(0.25±0.03)]低于HS组[(0.81±0.08)、(0.72±0.08)]及DCR-W组[(0.69±0.09)、(0.56±0.07)],差异有统计学意义(P<0.05)。结论损伤控制性复苏可抑制低温失血性休克大鼠海马神经元细胞凋亡,其机制与磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路通过磷酸化GSK3βSer9抑制Caspase-9与Caspase-3表达相关。
简介:摘要:目的:分析膝内翻骨关节炎合并前交叉韧带损伤患者接受关节镜联合胫骨高位截骨治疗的效果。方法:合并前交叉韧带损伤的膝内翻骨关节炎患者共取样72例,收治时间2021年06月至2022年06月,抽签分组,37例/组,对照组应用胫骨高位截骨治疗,试验组应用关节镜联合胫骨高位截骨治疗,对比HSS、VAS评分、 股骨胫骨角和总有效率。结果:治疗后,试验组HSS评分、总有效率比对照组高,VAS评分比对照组低,股骨胫骨角比对照组小,P<0.05。结论:膝内翻骨关节炎合并前交叉韧带损伤患者接受关节镜联合胫骨高位截骨治疗可取得确切疗效,减轻患者疼痛度,促进膝关节功能恢复。