简介：摘要目的研究LIM激酶1（LIMK1）在肝癌组织及细胞中的表达情况，以及LIMK1对肝癌细胞增殖与转移的调控作用。方法通过在线数据库starBase v3.0和GEPIA分析LIMK1在肝癌组织和肝脏正常组织中的表达情况，并进行相关生存分析；蛋白质印迹（Western blot）技术分析LIMK1在肝癌细胞株中的表达情况；用小干扰RNA（siRNA）技术下调LIMK1的表达，瞬时转染肝癌细胞Hep3B和Huh7，通过四甲基偶氮唑盐实验及克隆形成实验观察其对肝癌细胞增殖的调控作用；Transwell实验检测LIMK1的表达下调后肝癌细胞转移能力的变化；下调LIMK1的表达后，Western blot技术检测上皮-间质转化进程中相关指标的改变。对数据进行单因素方差分析。结果LIMK1在肝癌组织中的表达水平明显高于正常肝组织，而且与预后相关（P值均< 0.01）；进一步研究表明，与永生化的肝细胞L02相比，LIMK1在肝癌细胞株中的表达明显升高（P值均< 0.05）。功能相关实验表明，在LIMK1表达下调后，肝癌细胞的增殖与转移能力明显受到抑制（P值均< 0.05）；同时发现LIMK1参与上皮-间质转化进程。结论LIMK1在肝癌组织及细胞中表达水平明显升高，可调控肝癌细胞的增殖与转移并且参与上皮-间质转化进程。

简介：摘要目的探讨多聚嘧啶区结合蛋白1(PTBP1)在胃癌组织和人胃癌细胞株中的表达，以及PTBP1对胃癌细胞增殖与转移的作用机制。方法收集2019年1至6月于西安交通大学第一附属医院行外科手术切除的胃癌患者的癌组织与对应的癌旁组织。运用Kaplan-Meier Plotter数据库分析胃癌患者的生存情况。选择PTBP1表达水平相对较高的人胃癌细胞株SGC7901和AGS进行小干扰RNA(siRNA)转染下调PTBP1表达，实验分为空白对照组、阴性对照组和PTBP1敲低组。分别运用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测胃癌细胞中PTBP1 mRNA和PTBP1的表达。通过MTT法转染24、48、72、96 h后，观察PTBP1对胃癌细胞增殖的作用；Transwell实验检测下调PTBP1后胃癌细胞侵袭和迁移的变化，蛋白质印迹法检测下调PTBP1后胃癌细胞上皮-间质转化(EMT)标志物E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白和波形蛋白的改变。采用独立样本t检验、方差分析和秩和检验进行统计学分析。结果Kaplan-Meier Plotter预后分析显示，高表达PTBP1胃癌患者总生存期短于低表达PTBP1胃癌患者[9.2个月(6.2个月，17.2个月)比19.0个月(14.5个月，28.4个月)]，差异有统计学意义(Z＝5.31，P<0.05)。实时荧光定量PCR检测结果显示，人胃癌细胞株SGC7901和AGS中，PTBP1敲低组PTBP1 mRNA表达水平均低于空白对照组和阴性对照组(SGC7901：0.78±0.11比3.10±0.19、2.99±0.23。AGS：0.80±0.09比3.55±0.24、3.50±0.18)，差异均有统计学意义(tSGC7901＝10.57、8.08，tAGS＝10.91、13.42；P均<0.01)。蛋白质印迹结果显示，人胃癌细胞株SGC7901和AGS中，PTBP1敲低组PTBP1表达水平均低于空白对照组和阴性对照组(SGC7901：0.38±0.04比1.42±0.05、1.35±0.09。AGS：0.17±0.02比1.52±0.08、1.38±0.45)，差异均有统计学意义(tSGC7901＝15.94、10.57，tAGS＝16.60、20.80；P均<0.01)。MTT结果显示，转染48、72、96 h后，PTBP1敲低组的吸光度值较阴性对照组分别下降了0.25±0.01、0.38±0.02、0.84±0.04，其中转染96 h后的差值最显著，差异有统计学意义(t＝10.21、14.32，P均<0.01)。Transwell实验结果显示，人胃癌细胞株SGC7901和AGS中，PTBP1敲低组发生侵袭和迁移的细胞数均少于空白对照组和阴性对照组(SGC7901：42.00±5.91比116.40±10.23、114.40±10.43；39.60±6.77比125.80±11.51、122.40±5.90。AGS：40.20±7.25比115.60±14.63、117.40±9.12；36.00±5.20比122.40±12.10、125.40±12.74)，差异均有统计学意义(tSGC7901＝14.07、13.50、14.43、20.62，tAGS＝10.27、14.75、14.68、16.76；P均<0.01)。蛋白质印迹结果显示，PTBP1敲低组E-钙黏蛋白表达水平均高于空白对照组和阴性对照组(SGC7901：1.42±0.05比0.53±0.05、0.57±0.03。AGS：1.34±0.04比0.54±0.03、0.61±0.01)，而N-钙黏蛋白和波形蛋白的表达水平均低于空白对照组和阴性对照组(SGC7901：0.50±0.03比1.64±0.05、1.46±0.07，0.32±0.07比1.42±0.07、1.33±0.07。AGS：0.37±0.06比1.47±0.04、1.36±0.04，0.41±0.04比1.53±0.06、1.37±0.04)，差异均有统计学意义(tSGC7901＝11.63、13.19、18.83、11.68、11.43、10.43，tAGS＝15.02、16.23、14.67、12.97、14.45、17.18；P均<0.01)。结论胃癌组织和细胞中PTBP1表达水平均升高，并且参与调控胃癌细胞的增殖、转移和EMT。

简介：摘要目的研究小核糖体核蛋白B（SNRPB）在肝癌组织及细胞中的表达情况，以及SNRPB对肝癌细胞增殖与转移的作用。方法通过生物信息数据库starBase v3.0和GEPIA分析SNRPB在肝癌组织和正常肝脏组织中的表达，并进行肝癌患者预后生存分析；qRT-PCR和蛋白质印迹法（Western blot）分析SNRPB mRNA和蛋白在肝癌细胞系中的表达；利用RNA干扰技术（siRNA）下调SNRPB蛋白的表达，通过MTT实验观察其对肝癌细胞增殖的作用；Transwell侵袭迁移实验检测下调SNRPB后肝癌细胞转移能力的变化；利用Western blot技术检测下调SNRPB表达后肝癌细胞上皮-间质转化（EMT）标志物的改变。数据两组间比较采用t检验，多组间比较采用方差分析。结果SNRPB在肝癌组织中的表达明显高于正常肝脏组织，且其表达水平并与肝癌患者预后相关。与永生化肝细胞LO2相比，SNRPB在肝癌细胞系中的表达显著升高（P值均< 0.01）。siRNA-SNRPB显著抑制肝癌细胞内SNRPB mRNA和蛋白表达。MTT结果显示SNRPB敲低组的吸光度值较阴性对照组降低，其中转染96 h的差值最显著（P值均< 0.01）。Transwell实验结果显示，与阴性对照组相比，SNRPB敲低组肝癌细胞的侵袭（MHCC-97H：121.27±8.12对比46.38±7.54；Huh7：126.50±6.98对比41.10±8.01）和迁移（MHCC-97H：125.20±4.77对比43.18±7.32；Huh7：132.22±8.21对比38.00±6.78）能力显著降低（P值均< 0.01）。Western blot显示下调SNRPB后上皮表型标志物E-钙黏蛋白表达水平下降，间质表型标志物N-钙黏蛋白和波形蛋白的表达水平上升,表明下调SNRPB抑制肝癌细胞EMT。结论SNRPB在肝癌组织及细胞中表达显著升高，并且参与调控肝癌细胞的增殖与转移及EMT。