简介：摘要目的探讨腺性肥大乳房乳腺上皮细胞(hMEC-GAHB)的原代培养方法，观察该原代细胞的形态学及生物学特点。方法采用0.25%胰蛋白酶和Ⅰ型胶原酶混合液，结合长时间4 ℃和短时间37 ℃消化，配合低转速离心的方法，从2010年4月至2011年4月华中科技大学同济医学院附属协和医院整形外科手术治疗的10例腺性乳房肥大症患者(M组，实验组)和10例正常体积乳房患者(N组，对照组)的乳腺组织中消化获取乳腺上皮细胞并进行原代培养，评价获取原代细胞的效果，观察各组细胞的形态学特点，采用多抗体免疫细胞化学法(MICC)鉴定原代细胞种属，并采用碘化丙锭(PI)染色法、四甲基偶氮唑盐(MTT)法和流式细胞术等方法对各组细胞的细胞周期和体外增殖及凋亡等生物学特点等进行分析。结果腺性肥大乳房每克乳腺组织可获取细胞数为5×106个，细胞存活率为70%，接种后48 h细胞贴壁率为60%，贴壁细胞活性良好，接种后约72 h胞质展开，约120 h相互融合。细胞增殖明显，未见明显凋亡。hMEC-GAHB与正常体积乳房乳腺上皮细胞在细胞形态学上差异无统计学意义，且正常表达典型的上皮细胞骨架蛋白[CK8、CK14、CK18、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)等]。在含有相同浓度的17β-雌二醇的体外环境中，处于同一时期细胞对数生长期时，hMEC-GAHB组的群体倍增率(PDR)为0.548、1.634、2.062、3.946、5.210、8.700，正常体积乳房组的群体倍增率(PDR)为0.394、1.455、1.820、3.822、4.467、5.213，两者间差异有统计学意义(P<0.05)；hMEC-GAHB组和正常体积乳房组的G2/M期与G0/G1期细胞数比值分别为0.45±0.01和0.34±0.01，两者间差异有统计学意义(P<0.05)。结论采用改良的酶消化法可获得较满意的细胞数和细胞活性。hMEC-GAHB具有典型上皮细胞的形态学及生物学特点，在含有雌激素的体外环境中，hMEC-GAHB比较正常体积乳房乳腺上皮细胞具有更强的增殖活力，并具有正常的细胞衰退期。

简介：摘要目的观察雌激素受体α(ERα)在腺性肥大乳房乳腺组织和上皮细胞中的定位和表达，探讨其在腺性乳房肥大症病因学上的意义。方法对10例腺性乳房肥大症患者和正常体积乳房乳腺上皮细胞进行原代培养，采用免疫组织化学法(IHC)和免疫荧光组织化学法(IFHC)对乳腺组织的病理学特点进行观察，采用蛋白质印迹法(Western blot)检测组织及细胞中ERα蛋白的表达量。组间比较采用单因素方差分析。结果ERα表达于导管和小叶的腔上皮细胞内，在肌上皮细胞和间质细胞等细胞内几乎不表达，且腺性肥大乳房乳腺组织导管上皮处ERα阳性细胞数多于小叶，两者比例较为恒定(1.7∶1.0)。ERα阳性细胞在腺性肥大乳房和正常体积乳房乳腺组织中的阳性表达率(PER)分别为17.25%和6.13%。腺性肥大乳房组、正常体积乳房组细胞株中的ERα蛋白表达值(PEV)为1.965和1.002。腺性肥大乳房乳腺组织中ERα PER和ERα PEV与正常体积乳房组间差异有统计学意义(P<0.05)，且PER和ERα PEV与乳房肥大的严重程度呈正相关。结论ERα在乳腺组织内的表达定位具有特征性。与正常体积乳房乳腺上皮细胞比较，腺性肥大乳房乳腺上皮细胞的ERα PER和ERα PEV均明显增高，且ERα表达情况的高低与乳房肥大的严重程度成正相关。由此推测，腺性乳房肥大症的发生与乳腺组织内ERα的分布特点和上皮细胞内ERα表达增多有密切关。