简介：摘要目的探讨微小RNA miR-369-3p靶向调控α-辅肌动蛋白4(ACTN4)表达对肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blot法分别检测肝癌及癌旁组织中miR-369-3p、ACTN4的表达水平。采用脂质体法将miR-369-3p mimics、miR-NC、si-ACTN4、si-NC转染至肝癌MHCC97H细胞。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率，双荧光素酶报告实验验证miR-369-3p对ACTN4的靶向调控作用，Western blot法检测细胞周期蛋白1(cyclin D1)、p21、B淋巴细胞瘤2 (Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白(Bax)的表达。结果肝癌组织中miR-369-3p mRNA的表达水平为0.46±0.04，低于癌旁组织(1.00±0.08, P<0.001)；ACTN4 mRNA的表达水平为3.12±0.29，高于癌旁组织(1.01±0.09, P<0.001)；ACTN4蛋白的表达水平为0.61±0.06，高于癌旁组织(0.25±0.03，P<0.001)。与miR-NC组细胞比较，miR-369-3p过表达肝癌MHCC97H细胞增殖能力降低(细胞培养72 h吸光度分别为0.71±0.06和1.26±0.11，P<0.001)，G1期细胞比例升高[分别为(51.56±5.23)%和(31.14±3.36)%，P<0.001]，S期细胞比例降低[分别为(14.33±1.45)%和(32.44±3.56)%，P<0.001)]，细胞凋亡率升高[分别为(20.16±2.11)%和(6.25±0.64)% , P<0.001]，cyclin D1和Bcl-2蛋白相对表达量降低(均P<0.001)，p21和Bax蛋白相对表达量升高(均P<0.001)。与si-NC组比较，抑制ACTN4的表达后，肝癌MHCC97H细胞增殖能力降低(细胞培养72 h吸光度分别为0.78±0.07和1.24±0.12，P<0.001)，G1期细胞比例升高[分别为(48.69±4.21)%和(30.33±3.01)%，P<0.001]，S期细胞比例降低[(分别为18.54±1.61)%和(36.21±3.42)%，P<0.001]，细胞凋亡率升高[分别为(18.32±1.82)%和(6.58±0.66)%，P<0.001]，cyclin D1和Bcl-2蛋白水平降低(均P<0.001)，p21和Bax蛋白水平升高(均P<0.001)。与miR-369-3p+pcDNA组比较，过表达ACTN4后，肝癌MHCC97H细胞增殖能力提高(细胞培养72 h吸光度分别为1.12±0.11和0.68±0.06，P<0.001)，G1期细胞比例显著降低[(38.81±3.24)%和(51.80±4.57)%，P<0.001]，S期细胞比例显著升高[(31.65±3.11)%和(15.69±1.44)%，P<0.001]，细胞凋亡率降低[分别为(13.86±1.37)%和(22.69±2.24)%, P<0.001]，cyclin D1和Bcl-2蛋白相对表达量升高(均P<0.001)，p21和Bax蛋白相对表达量降低(均P<0.001)。结论miR-369-3p可通过靶向调控ACTN4的表达使肝癌细胞周期阻滞于G1期，抑制肝癌细胞增殖，促进肝癌细胞凋亡。

简介：摘要目的探讨微小RNA miR-369-3p靶向调控α-辅肌动蛋白4(ACTN4)表达对肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blot法分别检测肝癌及癌旁组织中miR-369-3p、ACTN4的表达水平。采用脂质体法将miR-369-3p mimics、miR-NC、si-ACTN4、si-NC转染至肝癌MHCC97H细胞。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率，双荧光素酶报告实验验证miR-369-3p对ACTN4的靶向调控作用，Western blot法检测细胞周期蛋白1(cyclin D1)、p21、B淋巴细胞瘤2 (Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白(Bax)的表达。结果肝癌组织中miR-369-3p mRNA的表达水平为0.46±0.04，低于癌旁组织(1.00±0.08, P<0.001)；ACTN4 mRNA的表达水平为3.12±0.29，高于癌旁组织(1.01±0.09, P<0.001)；ACTN4蛋白的表达水平为0.61±0.06，高于癌旁组织(0.25±0.03，P<0.001)。与miR-NC组细胞比较，miR-369-3p过表达肝癌MHCC97H细胞增殖能力降低(细胞培养72 h吸光度分别为0.71±0.06和1.26±0.11，P<0.001)，G1期细胞比例升高[分别为(51.56±5.23)%和(31.14±3.36)%，P<0.001]，S期细胞比例降低[分别为(14.33±1.45)%和(32.44±3.56)%，P<0.001)]，细胞凋亡率升高[分别为(20.16±2.11)%和(6.25±0.64)% , P<0.001]，cyclin D1和Bcl-2蛋白相对表达量降低(均P<0.001)，p21和Bax蛋白相对表达量升高(均P<0.001)。与si-NC组比较，抑制ACTN4的表达后，肝癌MHCC97H细胞增殖能力降低(细胞培养72 h吸光度分别为0.78±0.07和1.24±0.12，P<0.001)，G1期细胞比例升高[分别为(48.69±4.21)%和(30.33±3.01)%，P<0.001]，S期细胞比例降低[(分别为18.54±1.61)%和(36.21±3.42)%，P<0.001]，细胞凋亡率升高[分别为(18.32±1.82)%和(6.58±0.66)%，P<0.001]，cyclin D1和Bcl-2蛋白水平降低(均P<0.001)，p21和Bax蛋白水平升高(均P<0.001)。与miR-369-3p+pcDNA组比较，过表达ACTN4后，肝癌MHCC97H细胞增殖能力提高(细胞培养72 h吸光度分别为1.12±0.11和0.68±0.06，P<0.001)，G1期细胞比例显著降低[(38.81±3.24)%和(51.80±4.57)%，P<0.001]，S期细胞比例显著升高[(31.65±3.11)%和(15.69±1.44)%，P<0.001]，细胞凋亡率降低[分别为(13.86±1.37)%和(22.69±2.24)%, P<0.001]，cyclin D1和Bcl-2蛋白相对表达量升高(均P<0.001)，p21和Bax蛋白相对表达量降低(均P<0.001)。结论miR-369-3p可通过靶向调控ACTN4的表达使肝癌细胞周期阻滞于G1期，抑制肝癌细胞增殖，促进肝癌细胞凋亡。