简介：摘要目的优化金黄色葡萄球菌α-毒素(α-toxin，AT)溶血活性测定方法，用于无毒突变AT(non-toxic mutant AT，mAT)特异性血清抗体体外功能性评价和中和抗体滴度测定。方法使用AT裂解兔红细胞，释放血红蛋白，通过分光光度法检测溶血活性，并对该方法中的孵育时间、兔红细胞终浓度、Triton X-100浓度进行优化，同时验证方法重复性。对mAT特异性血清抗体进行体外功能性评价，绘制AT溶血曲线，计算AT溶血率50%时的浓度，检测血清半数中和抗体滴度。结果AT溶血活性最适检测条件为：孵育时间90 min，兔红细胞终浓度为2%(V/V)，Triton X-100浓度为0.25%。此条件下，分别加入mAT和含mAT的多价抗原血清抗体，对AT溶血活性均起到明显的抑制作用。AT溶血率50%时浓度为1.75 μg/ml，变异系数3.75%。mAT和含mAT的多价抗原血清抗体的半数中和抗体滴度初步结果均为1∶64。结论优化的AT溶血活性检测方法重复性良好，且检测时间较短，可用于特异性血清抗体体外功能性评价和中和抗体滴度测定。
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