简介：摘要目的了解淡豆豉水煎液体外抗流感病毒作用，为抑制病毒的新型中药开发提供基础。方法以A/Puerto Rico/8/1934(H1N1)（以下简称PR8病毒）感染狗肾上皮细胞(MDCK)作为模型，应用噻唑兰(MTT)法评估淡豆豉水煎液的安全性。以血液凝集抑制实验和神经氨酸酶活性抑制实验检测淡豆豉水煎液对流感病毒吸附和释放的影响。设立PR8病毒+淡豆豉水煎液组和PR8病毒组，以实时荧光定量PCR、Western印迹试验、免疫荧光的方法检测淡豆豉水煎液对病毒基因转录水平和蛋白表达水平的影响。结果6.25 mg/mL的淡豆豉水煎液能够抑制1 HAU流感病毒的吸附。PR8+淡豆豉水煎液组的子代病毒血凝效价为PR8组的1/8。2 000 μg/mL的淡豆豉水煎液能够抑制大于80%的神经氨酸酶活性。在第24小时，PR8+淡豆豉水煎液组的NP和M1基因转录水平分别为3 444.52±378.35和98 737.80±1 643.00；NP、M1a和M2e蛋白表达水平分别为0.39±0.03、0.54±0.01和0.82±0.02，均低于PR8组(t=-16.03、-16.17、-39.26、-272.80和-220.00，P均<0.05)。结论淡豆豉水煎液通过影响流感病毒生命周期的吸附、基因转录和翻译、流感子代病毒释放多个阶段，在体外发挥直接抗流感病毒作用。

简介：摘要目的制备燕窝酶解液并初步了解其抗流感病毒的方式和效果。方法以唾液酸提取率为评价标准，选择最佳酶解时长和液料比，获取燕窝酶解液。通过实时荧光定量PCR和血凝试验分析并明确燕窝酶解液对流感病毒的抑制方式和单个复制周期中的作用环节。试验同时设立病毒对照组。采用实时荧光定量PCR和Western印迹法检测燕窝干预下NF-κB的表达情况和炎症细胞因子转录水平的变化。结果在液料比45∶1、酶解时长不低于3 h的条件下获得燕窝酶解液，唾液酸的提取率为（66.87±0.05）%。相比病毒对照组，燕窝酶解液通过直接抑制流感病毒的方式降低病毒基因NP和M的转录水平（t=2.81和3.34，P=0.023和0.010）。在病毒复制过程中燕窝酶解液在病毒感染初期和复制初期（0 h和2 h）发挥抑制效果，NP基因转录相比病毒对照组显著降低（t=13.79和21.84，P=0.005和0.002）。与燕窝液组相比，在燕窝酶解液干预下，炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ、NF-κB、NF-κBp65的表达也降低（t=15.12、21.31、4.85、7.40、13.77和29.39，P均<0.05）。结论通过酶解的方式可以提高燕窝的抗流感病毒效果，燕窝酶解液能够抑制流感病毒引起的炎症因子表达。

简介：摘要目的探索含有流感病毒血凝素茎部α螺旋区（HAα）和6个串联重复M2蛋白胞外区域（6M2e）的融合蛋白的表达和制备方法，并对其在小鼠体内的免疫效果进行评价。方法采用去除高变区的鞭毛蛋白序列，将HAα和6M2e插入到原高变区位点，构建重组质粒pET28a-FljBΔD2D3-HAα-6M2e。在大肠埃希菌中诱导表达后进行纯化和鉴定，并评估其细胞毒性。最后将制备的融合蛋白免疫BALB/c小鼠，采用ELISA方法检测小鼠血清特异性抗体效价，实时荧光PCR法检测小鼠IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ、TNF-ɑ的mRNA水平，CCK-8法检测脾细胞的增殖。结果成功构建重组质粒pET28a-FljBΔD2D3-HAα-6M2e，蛋白表达最适条件为1 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）37 ℃诱导10 h，通过镍柱纯化获得高纯度的无毒融合蛋白。免疫小鼠后抗M2e-IgG和抗HAα-IgG的抗体ELISA效价均达到1∶102 400，且与对照组相比差异有统计学意义(t=0.33，P=0.774；t=7.60，P=0.001)。各类细胞因子的mRNA水平升高，其中实验组IFN-γ转录水平为38.74±3.65，蛋白水平为（66.03±3.31）pg/mL，高于对照组（t=21.33，P=0.003；t=10.21，P<0.01）。结论成功制备了高纯度的融合蛋白FljBΔD2D3-HAα-6M2e，能有效刺激小鼠产生抗M2e-IgG和抗HAα-IgG，具有良好的免疫效果，为流感疫苗候选物研发奠定了基础。