简介:摘要目的观察人肝癌(HCC)细胞外泌体环状RNA(circRNA)-100338对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)血管形成能力的影响。方法提取、纯化和鉴定上海复旦大学肝癌研究所建立MHCC97H细胞来源外泌体,并共孵育中国科学院上海细胞所HUVEC细胞(37 ℃、5%CO2),外泌体示踪实验追踪外泌体能否被HUVEC细胞内化。采用Lipofectamine™ 2000转染试剂转染MHCC97H细胞,提取干扰circRNA-100338后的HCC细胞上清液外泌体(1 g/L);增殖实验用于检测HUVEC细胞增殖能力变化(测量波长450 nm);血管形成能力实验用于评估HUVEC细胞成管(×100)。统计分析采用独立样本t检验。结果透射电子显微镜观察到MHCC97H细胞来源的外泌体多数呈圆形或椭圆形,粒径分布峰值在120 nm,符合外泌体粒径特征,蛋白质印迹法(Western blot)检测到外泌体标志蛋白。MHCC97H细胞来源的外泌体被HUVEC细胞内化。肝癌circRNA-100338干扰组和对照组的外泌体分别共培养HUVEC细胞48、72、96 h后HUVEC细胞增殖[吸光度(A)值]分别为0.358±0.005和0.436±0.011,差异有统计学意义(t=-16.227, P<0.01)、0.661±0.052和0.888±0.031,差异有统计学意义(t=- 9.146, P<0.01)及1.191±0.084和1.542±0.038,差异有统计学意义(t=-9.296, P<0.01),干扰组血管内皮细胞增殖能力和对照组比较显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。干扰组HUVEC成管能力下降,成管结节细小。结论肝癌外泌体circRNA-100338增强HUVEC细胞增殖能力,进而促进内皮细胞血管新生。