简介：摘要目的探讨母系表达基因3（maternally expressed gene 3，MEG3）及Rac1/Limk1/Cofilin信号通路在先天性巨结肠（Hirschsprung disease，HD）中的作用机制。方法应用qRT-PCR、Westernblot方法检测2018年1月至2021年1月在遵义医科大学附属医院治疗并确诊为HD的30例患儿HD狭窄段、30例移行段组织和14例正常肠管组织中MEG3和Rac1/Limk1/Cofilin表达情况，并通过建立MEG3过表达组、溶剂组、对照组及Rac1、Limk1、Cofilin抑制组细胞模型，观察Rac1、Limk1及Cofilin蛋白表达情况及细胞迁移和增殖能力。结果狭窄段、移行段MEG3、Limk1和Cofilin的RNA相对表达量较正常肠管组织低（P<0.05），而移行段与狭窄段比较，差异无统计学意义（P>0.05）；Rac1的相对表达量比较：正常肠管>移行段>狭窄段，差异有统计学意义（P<0.05）。狭窄段、移行段Rac1、Limk1和Cofilin蛋白表达水平与正常肠管组织比较均明显降低（P<0.05），而移行段与狭窄段比较，差异无统计学意义（P>0.05）。MEG3过表达组MEG3的表达量明显高于对照组及溶剂组（P<0.05）；MEG3过表达组Rac1、Limk1的相对表达量均明显高于对照组及溶剂组（P<0.05）；MEG3过表达组Cofilin相对表达量与对照组、溶剂组比较无明显差异（P>0.05）。MEG3过表达组Rac1和Cofilin蛋白的相对表达量明显高于溶剂组和对照组（P<0.05），MEG3过表达组Limk1的表达量与对照组比较无明显差异（P>0.025）；MEG3过表达组细胞的迁移数量明显高于对照组和溶剂组（P<0.05）。对照组Rac1、Limk1、Cofilin的蛋白表达量明显高于Rac1、Limk1和Cofilin抑制组（P<0.05），对照组细胞的迁移数量明显高于Rac1、Limk1、Cofilin抑制组（P<0.05）。结论MEG3可通过促进Rac1、Limk1和Cofilin基因表达影响神经嵴细胞的迁移，进而与先天性巨结肠发病有关。

简介：摘要目的探讨LncRNA-MEG3及Rac1/Cdc42/PAK1信号通路在先天性巨结肠(Hirschsprung disease，HSCR)发病机制中的作用及机制。方法收集2016年1月至2018年12月在遵义医科大学附属医院病理确诊HSCR并手术治疗的患儿结肠组织标本30例为实验组(HSCR组)，其中男23例，女7例；年龄为(18.86±1.78)个月；体重为(4.56±0.19)kg。收集非先天性消化道畸形、非肠神经相关疾病手术切除肠管患儿14例组织标本为对照组(Normal组)，包括坏死性小肠结肠炎、嵌顿疝和肠套叠造瘘患儿在闭瘘手术时吻合处正常肠管，其中男10例，女4例；年龄为(16.73±1.03)个月，体重为(5.01±0.20)kg。采用qRT-PCR和Western blot检测HSCR组与Normal组中MEG3和Rac1/Cdc42/PAK1信号通路各蛋白的表达水平。在SH-SY5Y细胞中通过转染MEG3过表达质粒以及加入通路抑制剂AZA1构建细胞模型，并分为4组：①空白对照组(Control组)，仅有SH-SY5Y细胞；②空载体组(pcDNA3.1组)，SH-SY5Y细胞+pcDNA3.1质粒；③MEG3过表达组(MEG3组)，SH-SY5Y细胞+pcDNA3.1-MEG3质粒；④抑制剂组(MEG3+AZA1组)，SH-SY5Y细胞+pcDNA3.1-MEG3+AZA1抑制剂。采用Western blot、CCK-8和Transwell方法检测各组细胞中Rac1、Cdc42、PAK1及P-PAK1蛋白表达量以及细胞增殖和迁移能力。两组间数据在进行方差同质性检验后采用两独立样本t检验比较，多组数据之间的比较采用单因素方差分析。若总体方差不齐，采用修正的界限值或Tamhane's T2检验；非正态分布的计量资料，采用多独立样本比较的秩和检验。结果HSCR患儿狭窄段肠管组织中MEG3、Rac1、Cdc42、PAK1和P-PAK1蛋白表达量均较Normal组低(Rac1：0.20±0.05比0.78±0.05，t＝8.37；Cdc42：0.38±0.08比1.03±0.08，t＝5.68；PAK1：0.27±0.02比1.10±0.06，t＝13.52；P-PAK1：0.24±0.03比1.07±0.06，t＝12.99；P均<0.01)；在细胞模型中，MEG3组细胞中Rac1、Cdc42、PAK1和P-PAK1蛋白相对表达量均高于Control组和MEG3+AZA1组(Rac1：0.96±0.05比0.36±0.11比0.75±0.20，F＝3.46，P<0.05；Cdc42：1.12±0.08比0.53±0.19比0.68±0.10，F＝5.37，P<0.01；PAK1：1.02±0.09比0.55±0.14比0.47±0.14，F＝5.60，P<0.05；P-PAK1：0.97±0.07比0.66±0.08比0.47±0.03，F＝15.66，P<0.05)，MEG3组细胞中MEG3表达量明显高于Control组和pcDNA3.1组(1.00±0.20比0.14±0.04比0.02±0.01，F＝20.56，P<0.01)，Control组和pcDNA3.1组中MEG3相对表达量差异无统计学意义(P>0.05)。MEG3组细胞增殖能力高于Control组及MEG3+AZA1组(12 h：0.19±0.00比0.19±0.00比0.18±0.00，P>0.05；24 h：0.21±0.00比0.19±0.01比0.17±0.00，F＝12.00，P<0.01；48 h：0.30±0.02比0.26±0.00比0.22±0.01，F＝9.60，P<0.05)。MEG3组细胞迁徙数量明显高于Control组(141.67±11.93比96.33±8.02，t＝3.15，P<0.05)，MEG3+AZA1组细胞迁徙数量低于MEG3组和Control组(71.00±7.00比141.67±11.93比96.33±8.02，F＝15.04，P<0.01)。结论低表达的MEG3可能通过调控Rac1/Cdc42/PAK1信号通路抑制神经嵴细胞增殖和迁移能力，可能与HSCR发生有关。

简介：

简介：摘要：目前，国内高原铁路机车的发展已经取得了一定进展，中国铁路部门和相关企业积极研发适用于高原地区的铁路机车和相关设备，以满足高原地区铁路运输的需求。这些高原铁路机车在设计上通常考虑了高海拔、低氧等因素，采用了特殊的控制系统、动力系统、空气制动系统等技术，以确保在高原地区具有良好的性能和安全性。

简介：摘要目的探讨母系表达基因3(MEG3)启动子甲基化对p53/p21信号通路的调控及其在先天性巨结肠(HSCR)发病机制中的作用。方法检测30例HSCR患儿有神经节细胞段、无神经节细胞段p53 mRNA、蛋白表达和MEG3基因启动子甲基化情况。应用MEG3过表达和沉默质粒转染人神经母细胞瘤SK-N-BE(2)细胞株，建立MEG3过表达(MEG3-OE)组、MEG3抑制(MEG3-KD)组及空白对照(NC)组，使用氮杂胞苷(5-aza-CdR)调控各组后检测细胞株的增殖、凋亡情况及其p21 mRNA和蛋白的表达情况。结果①无神经节细胞段与有神经节细胞段肠管组织p53 mRNA的相对表达量分别为10.56±0.37和2.24±0.3，p53蛋白的相对表达量分别为1 058.5±106.9和583.6±87.6，MEG3启动子甲基化率分别为(58.3±4.5)%和(33.3±1.3)%，两组比较，差异均有统计学意义(t＝95.67，P<0.05；t＝18.82，P<0.05；χ2＝6.25，P<0.05)。②加入氮杂胞苷共培养72 h时：MEG3-OE组较MEG3-KD组、NC组增殖能力明显增高(吸光度值分别为0.52±0.06、0.51±0.01、0.47±0.05)、凋亡率降低[共培养72 h时细胞凋亡率分别为(2.22±1.12)%、(4.08±0.57)%、(7.59±3.87)%]，且p21 mRNA及蛋白的相对表达量4.54±2.13和7.09±0.95均较另两组0.83±0.16、0.06±0.04和6.21±0.34、3.24±1.40显著升高，以上结果，各组间差异均具有统计学意义(P均<0.05)。结论HSCR中存在MEG3启动子高度甲基化，可能通过上调p53/p21信号通路介导神经嵴细胞增殖和凋亡，参与HSCR的发病。