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  • 简介:摘要目的探讨Toll样受体4(TLR4)特异性抑制剂TAK242对脓毒症大鼠模型肝脏的保护机制。方法将18只雄性SD大鼠按随机数字表法分为3组,每组6只,采用腹腔注射脂多糖(LPS)15 mg/kg制备脓毒症模型;TAK242干预组于制模前腹腔注射TAK242(5 mg/kg)进行预处理,脓毒症模型组和对照组则注射等量溶剂〔10%二甲基亚砜(DMSO)+ 90%玉米油〕。6 h后取大鼠腹主动脉血,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组大鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平;处死大鼠取肝组织,采用蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测各组大鼠肝组织TLR4、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)、核转录因子-κB p65及其磷酸化(NF-κB p65,p-NF-κB p65)的表达水平,采用免疫组织化学(免疫组化)染色观察肝组织NF-κB p65蛋白表达,采用苏木素-伊红(HE)染色评估肝细胞损伤情况。结果脓毒症模型组ALT和AST水平均较对照组显著升高〔ALT(μg/L):26.639±7.814比2.847±2.150,AST(μg/L):28.442±8.417比5.779±3.019,均P<0.01〕,TAK242干预组ALT和AST水平则较脓毒症模型组明显降低〔ALT(μg/L):7.269±3.398比26.639±7.814,AST(μg/L):3.580±3.115比28.442±8.417,均P<0.01〕。光镜下显示,脓毒症模型组肝细胞排列紊乱,细胞水肿明显,炎症细胞浸润增多;TAK242干预组肝细胞排列整齐,肝细胞水肿明显减轻,炎症细胞浸润减少。Western blotting结果显示,脓毒症模型组肝组织caspase-3蛋白表达较对照组明显升高(caspase-3/GAPDH:0.794±0.164比0.482±0.055,P<0.05),TAK242干预组caspase-3蛋白表达则较脓毒症模型组明显降低(caspase-3/GAPDH:0.482±0.056比0.794±0.164,P<0.05),说明TAK242可减轻脓毒症大鼠肝脏细胞凋亡。脓毒症模型组肝组织IL-6、TNF-α和TLR4蛋白表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65比值均明显高于对照组(IL-6/GAPDH:1.442±0.204比1.019±0.024,TNF-α/GAPDH:1.089±0.098比0.806±0.005,TLR4/GAPDH:1.292±0.085比0.941±0.087,p-NF-κB p65/NF-κB p65比值:1.936±0.081比1.579±0.183,均P<0.05),TAK242干预组肝组织IL-6、TNF-α和TLR4蛋白表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65比值均较脓毒症模型组明显降低(IL-6/GAPDH:1.035±0.042比1.442±0.204,TNF-α/GAPDH:0.572±0.096比1.089±0.098,TLR4/GAPDH:0.984±0.078比1.292±0.085,p-NF-κB p65/NF-κB p65比值:1.484±0.255比1.936±0.081,均P<0.05),说明LPS诱导的脓毒症可激活肝组织TLR4/NF-κB通路所介导的炎症反应,给予TAK242阻断TLR4通路后,TLR4/NF-κB通路的激活被抑制,从而减轻脓毒症大鼠肝组织的炎症反应。免疫组化染色显示,脓毒症模型组肝组织NF-κB p65阳性表达较对照组明显增加;TAK242干预组NF-κB p65阳性表达则较脓毒症模型组明显减少,细胞核内几乎无阳性表达。结论TAK242通过阻断肝脏TLR4/NF-κB通路可减轻脓毒症大鼠的肝功能损伤,起到保护肝脏的作用。

  • 标签: 脓毒症 肝损伤 Toll样受体4 核转录因子-κB Toll样受体4特异性抑制剂TAK242
  • 简介:摘要目的研究探讨吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(pyrrolidine dithiocarbamate, PDTC)能否通过抑制核转录因子-κB(nuclear transcription factor-κB, NF-κB)活化改善脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的脓毒症大鼠炎症反应、心肌损伤并改善心功能。方法采用随机数表法将33只健康SD大鼠随机分为对照组(n=6)、PDTC+LPS组(n=12)和LPS组(n=15)。心脏多普勒超声检测存活大鼠心功能;ELISA检测血清中白介素-6(interleukin, IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumour necrosis factor-α, TNF-α)及心肌钙蛋白I(cardiac troponin I, cTnI)水平。苏木精-伊红染色显微镜下观察大鼠心肌组织形态学改变;IHC检测各组心肌组织中NF-κB p65的表达及核转位情况;Western blotting检测心肌组织IL-6、TNF-α、NF-κB p65及其磷酸化(p-NF-κB p65)水平。结果实验雄性SD大鼠造模7 h后,对照组、LPS组、LPS+PDTC组分别存活6只、8只、9只。与对照组相比,LPS组心肌组织中NF-κB p65磷酸化水平增加(P<0.01),IL-6、TNF-α的蛋白表达增加(均P<0.01),心肌细胞核上NF-κB p65阳性表达增加(P<0.01),血清中IL-6、TNF-α、cTnI的水平增加(均P<0.01);心率、每搏输出量、射血分数、左室短轴缩短率、心输出量减少(均P<0.05);心肌组织出现不同程度水肿、出血、炎症细胞浸润甚至心肌纤维断裂等。与LPS组相比,PDTC+LPS组心肌组织中NF-κB p65磷酸化水平降低(P<0.01),IL-6、TNF-α的蛋白表达减少(均P<0.01),心肌细胞核上NF-κB p65阳性表达减少(P<0.01),血清中IL-6、TNF-α、cTnI的水平减低(均P<0.01);每搏输出量、心率、射血分数、左室短轴缩短率、心输出量增加(均P<0.05);心肌组织的水肿、出血、炎症细胞浸润及心肌纤维断裂改善。结论PDTC能通过抑制NF-κB的活化减轻脓毒症大鼠炎症反应与心肌损伤,并改善心功能。NF-κB可能成为脓毒症治疗中新的靶点,为降低脓毒症心肌损伤发生率及病死率提供新的方向。

  • 标签: 脓毒症 心肌损伤 吡咯烷二硫代氨基甲酸酯 核转录因子-κB
  • 简介:摘要:随着“爱种子”课程改革理念的不断推进和发展,在“爱种子”课堂模式的“以生为本,以学定教”的教学理念指导下,实验老师不断探索学生自主学习、互动探究的有效策略。“自主学习”课型作为新课习得的课型是最受老师们重视的,下面本人结合三年多的教学实践谈谈自己参加“爱种子”课堂教学模式改革实验中,开展自主学习的一些策略。

  • 标签: 自主学习 策略
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