简介：目的：构建人snail基因真核表达载体并鉴定。方法：使用RT-PCR法获取人snail基因全长cDNA,经BamHI、EcoRI双酶切、连接,插入pcDNA3.1（＋）真核表达载体,转化TOP10感受态细胞,用含氨苄青霉素的LB培养基筛选阳性克隆,提取质粒双酶切电泳及测序鉴定,瞬时转染siha细胞Western-blot从蛋白水平鉴定重组质粒在真核细胞内的表达。结果：pcDNA3.1-snail重组质粒经酶切电泳符合预期片段,测序鉴定插入片段与NCBIGenBank文库中人snail序列一致,重组质粒瞬时转染后snail蛋白表达量明显增高。结论：成功构建pcDNA3.1-snail重组质粒载体,为进一步探讨snail基因生物学功能奠定了基础。

简介：目的：研究细菌内同源重组法构建靶向Survivin的腺病毒载体及其体外扩增表达。方法：将survivin基因克隆至穿梭质粒载体中,特异性酶切后回收、连接、转化,构建负载survivin片段的重组腺病毒载体。提取重组病毒基因酶切鉴定后,包装成病毒,并扩增到所需滴度。行Westernblotting鉴定,观察重组腺病毒载体在真核细胞的表达。结果：（1）重组穿梭质粒的MluI酶切鉴定结果显示,酶切结果均与相应的载体及目的片段的大小相符合,基因测序结果基本一致。（2）凝胶电泳产生了两条大约15kb和8.5kb的片段,由图2可知重组腺病毒质粒酶切充分完全,且回收率较高。（3）重组腺病毒载体转染AD293细胞24h后已出现细胞病变效应,病变细胞细胞核变大。（4）D260/OD280的值为1.92,表明重组腺病毒纯度较高。（5）AD293细胞病毒上清中有能与抗Survivin单抗反应的蛋白,其相对分子质量与理论值相吻合,阴性对照组无对应条带出现。结论：本方法成功构建表达了含Survivin的重组腺病毒载体,为进一步进行Survivin基因功能的研究提供了实验基础和理论支持。

简介：目的：探讨佛波酯（PMA）与乏氧诱导对小鼠黑色素瘤细胞B16-F10中血管内皮细胞生长因子（VEGF）表达量的影响,构建适合RNA干扰（RNAi）的体外细胞模型。方法：通过酶联免疫吸附试验（ELISA法）在蛋白质水平上检测细胞分泌的VEGF量,并用激光共聚焦显微镜观察小干扰RNA（siRNA）转染的细胞胞吞及细胞形态。结果：1MPMA处理细胞2h能明显上调B16-F10细胞中VEGF蛋白的合成及分泌,与常规培养相比,细胞可增加50%的VEGF水平。再经乏氧诱导48h,稳定释放到培养液里的VEGF浓度大幅提高200%,范围在55-65pg/mL/h。结论：经PMA和乏氧诱导后,B16-F10细胞稳定的VEGF分泌量与一定时间内分泌的稳定性均表明其适合作为RNAi的体外细胞模型。初步的RNAi结果表明,TKO/siRNA纳米粒与壳聚糖/siRNA纳米粒对于VEGF的沉默效率达40%。

简介：近日，来自美国纽约大学医学院的研究人员在国际学术期刊Nature上发表了一项最新研究进展。该研究或将推动胰腺癌免疫治疗方法的开发。之前认为癌化的胰腺上皮细胞通过caspase8依赖性细胞凋亡发生死亡，而化疗药物也被认为是通过促进肿瘤发生凋亡来发挥杀伤作用。

简介：目的：检测人胃癌细胞系中FHIT基因mRNA的表达状况及构建pcDNA3.1-FHIT真核表达载体。方法：RT-PCR法检测三种不同类型人胃癌细胞系中FHIT基因mRNA的表达，构建真核表达质粒pcDNA3.1-FHIT，通过酶切法、PCR扩增法和DNA序列分析鉴定重组质粒后，用脂质体转染至FHIT基因mRNA阴性表达人胃癌细胞系MKN-45，经G418筛选后RT-PCR鉴定。结果：FHIT基因在人胃癌细胞系BGC-823中呈阳性表达，在MGC-803、MKN-45细胞系中呈阴性表达。FHIT基因cDNA正确克隆到真核细胞表达载体pcDNA3.1中，并成功转染FHIT基因mRNA阴性表达人胃癌细胞系MKN-45。结论：FHIT基因在不同类型人胃癌细胞系中表达各异。成功构建pcDNA3.1-FHIT，并转染到FHIT基因mRNA阴性表达人胃癌细胞系MKN-45，使其FHIT基因阳性表达。

简介：目的：构建含Ubc9的逆转录病毒表达载体,筛选建立携带该基因的高滴度产毒细胞系,深入研究SUMO化修饰的作用。方法：聚合酶链反应（PCR）扩增获取目的基因Ubc9,定向插入逆转录病毒表达载体pMSCVneo,形成重组质粒pMSCV-Ubc9;脂质体法将pMSCV-Ubc9转染逆转录病毒包装细胞PT67;G418筛选产毒细胞克隆,扩大培养产毒细胞克隆,收获病毒感染NIH3T3细胞。结果：限制性酶切和测序鉴定证实Ubc9正确插入逆转录病毒表达载体。G418筛选获得稳定产毒的抗性细胞克隆,收获病毒能有效感染NIH3T3细胞。结论：携带Ubc9基因的重组逆转录病毒表达载体pMSCV-Ubc9构建成功,转染PT67细胞后包装出重组逆转录病毒,进而筛选获得了能转录表达Ubc9的产毒细胞系PT67-Ubc9。

简介：目的：探讨医学模拟教学结合以问题为导向（PBL）的教学模式在重症医学教学中的应用价值。方法：选取2015年1月-2017年1月在我院重症医学科轮转实习的五年制医学生64人作为研究对象。按随机数字表法将64名医学生分为PBL组（n=32）和结合教学组（n=32）。PBL组采用PBL教学，结合教学组采用医学模拟结合PBL教学。分别在入科时和轮转实习结束时对两组学员进行理论考试和技能操作考核，记录成绩并比较。理论考试和技能操作考核后采取发放问卷进行调查的形式获得学员对教学效果的主观评价。结果：轮转实习结束时，两组理论考试分数差异无统计学意义（P〉0．05）；而结合教学组技能操作考核成分数显著高于PBL组，差异具有统计学意义（P〈0．05）。两组学员在教学方法接受度高、学习兴趣提升、自学能力提升和临床诊疗水平提高所占比例差异无统计学意义（P〉O．05）；结合教学组学员在团队协作能力提高、沟通能力与人文关怀提高和技能操作水平提高所占比例高于PBL组，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：与单独PBL教学相比较，医学模拟教学结合PBL的教学模式应用于重症医学教学对学员技能操作的掌握有更好的效果，同时能提高学员团队协作能力、沟通能力以及对患者的人文关怀，且受到学员的认同与喜爱，应在重症医学的教学实践中逐步完善并进一步推广应用。

简介：建立健全高素质高水平临床医疗队伍是提高医疗卫生服务水平、改善医疗质量的关键。医院医学教学是医学理论与临床实践的充分结合,是培养高质量医学人才的重要环节。当前医院医学教学正面临着国际化发展趋势的巨大挑战,加快医学教育模式改革进程,从医学认知教育培养理念、教学模式和教学质量标准等方面进行全面改革,进一步接近国际化标准,以培养具备国际竞争能力的高素质、高层次医学人才是当前医院医学教学的重大目标。本文就当前医院医学教育利弊进行了评价,并提出了完善医学教学模式的设想,以期为医院医学教学提供参考。

简介：医学救援实战演练教学贴近实战,并综合各学科而设,是培养应急性医学救援人才的必备课程。以往演练暴露诸多问题,例如学员不能全面参与训练,学员对突发状况应对能力较弱,训练内容设置不合理以及考核方式不能反映学员训练的真实情况等问题。我们进行高原医学救援演练教学方法改革,采用多用途学习模块,学员全面参与演练科目的方式,整合课堂、临床相关方面知识技能,组织教学训练单元,建立规范化、标准化救治流程,删减调整不相关内容,可在短期内完成培训。最后,通过考核方式改革,采用全程考查并及时对参训人员进行反馈保证训练质量。

简介：目的：基于问题的学习（PBL）结合询证医学（EMB）模式在普通外科临床教学中的应用。方法：选择2015年9月到2016年1月在我院学习的普通外科专业学生74例纳入本次研究,根据简单数字随机表法将其划分为观察组（PBL结合EBM教学模式）以及对照组（传统教学模式）各37例,对比两组考试成绩,课程相关指标,以及评优情况。结果：观察组的基础知识得分、主观题考试得分、个案分析得分以及总分均分别明显高于对照组,差异均有统计学意义（均P〈0.05）。观察组的课前准备时间、课堂发言次数及授课满意度均明显大于对照组,差异均有统计学意义（均P〈0.05）。观察组药物选择合理、患者状态评估准确以及符合临床实际上的评优率均明显高于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：PBL结合EBM模式应用在普通外科的临床教学过程中,效果明显,能较好地激发学生学习兴趣并提高其学习成绩,还可提升学生的评优率,值得给予推广。

简介：目的：探究标准化患者模拟结合案例情景对普外科见习教学的运用。方法：选取我科2012年本科见习生120例进行随机分组，模拟组、案例组及联合组各40例，分别采用标准化患者模拟、案例情景及标准化患者模拟结合案例情景进行教学，对比三组见习生的学习效果，分析联合教学的运用方法。结果：联合组学生见习结束后学习兴趣、知识掌握情况及讲师满意度均显著高于其他两组，其课堂气氛活跃情况明显优于案例组（P〈0．05）；三组学生传统试题错题数无明显统计学差异（P〉0．05），联合组学生病例分析错题数明显低于案例组及模拟组（P〈0．05）；见习结束时，联合组知识掌握程度及病历书写能力均显著优于模拟组及案例组，三组数据对比存在统计学差异（P〈0．05）。结论：标准化患者模拟结合案例情景能够有效弥补传统见习教学的不足，提高学生学习积极性、课堂活跃度及学习效果，使其知识掌握情况和病历书写能力得到大幅提升，是一种效果优秀的教学方式，值得广泛推广。