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  • 简介:以pBRTM/HCV-3011模板,通过PCR法扩增ns5a、LISDR(左端序列)和RISDR(右端序列),分别经XhoⅠ/EcoRⅠ、XhoⅠ/HindⅢ和EcoRⅠ/HindⅢ双酶切,连入穿梭质粒pEGFP-N3中,构建重组质粒pEGFP-N3-ns5a和pEGFP-N3-ns5a-△ISDR.对重组质粒进行酶切分析和序列测定.将这2种重组质粒通过电穿孔法转染HeLa细胞,然后在G418选择压力下进行有限稀释法筛选,用RT-PCR和荧光显微镜鉴定.经酶切鉴定和基因测序证实,重组穿梭质粒已插入目的片段ns5a、LISDR和RISDR.RT-PCR和荧光显微镜检测到目的基因的表达.以上结果说明成功构建了真核表达载体pEGFP-N3-ns5a和pEGFP-N3-ns5a-△ISDR,目的基因在HeLa细胞中得到表达,为研究HCVNS5A中是否存在抗干扰素治疗的功能蛋白提供了实验材料.

  • 标签: 丙型肝炎病毒 干扰素敏感决定区 HELA细胞系 增强型绿色荧光蛋白 丙型肝炎 真核表达载体
  • 简介:在新一期美国《科学》杂志对“2008年值得关注的科研热点”的预测中,生命科学就占了5个席位,可以预见,2008年将又是一个生命科学研究热点年。

  • 标签: 生命科学 科学研究 《科学》杂志
  • 简介:比较HitrapG蛋白Sepharose亲和色谱系统对不同动物血清或腹水的纯化效果,为抗体纯化提供依据。结果显示,G蛋白对不同动物血清IgG吸附能力不同,体现在单位体积抗体回收量明显不同,这一特点与A蛋白亲和色谱系统相似。该方法简便快速,纯化抗体纯度高,免疫活性好,色谱柱可反复使用多次

  • 标签: G蛋白 A蛋白 亲和色谱法 抗体
  • 简介:目的:建立一种灵敏、特异、快速的ELISA方法,用于猕猴血清中抗死亡受体5(DR5)单克隆抗体的检测。方法:采用双抗夹心ELlSA法,用猴血清吸附的羊抗入IgG包被于96孔酶标板,加入待测样品,用HRP标记的猴血清吸附的羊抗人IgG进行检测,加底物显色,读取D450值。结果:建立了检测抗DR5单克隆抗体的ELISA方法并进行了确证,方法的线性范围为12.5-800ng/mL,定量下限为12.5ng/mL,板内和板间精密度均小于15%,准确度为-4-15%,冻融稳定性和稀释稳定性良好。结论:方法学确证结果表明,本研究建立的抗DR5单克隆抗体检测方法符合新生物制品临床前药代动力学研究指导原则要求,可用于抗DR5单克隆抗体的检测。

  • 标签: 死亡受体5 单克隆抗体 酶联免疫吸附试验法 药代动力学
  • 简介:目的:探究胃炎康方5号联合西医治疗慢性萎缩性胃炎的临床疗效。方法:选取在我院接受治疗的慢性萎缩性胃炎患者94例,分为对照组和实验组,对照组患者采用常规的胃三联治疗方法,实验组患者在对照组患者的治疗方法之上再加上胃炎康方5号治疗,观察分析和对比两组患者的治疗效果以及Hp根除率(幽门螺旋杆菌根除率)。结果:对照组患者治疗的总有效率为46.81%,Hp根除率为82.98%,实验组患者治疗的总有效率为80.85%,根除率为93.62%,两组结果相比较,差异显著,有统计学意义(P<0.05)。结论:胃炎康方5号联合西药治疗慢性萎缩性胃炎的临床疗效显著,值得临床推广。

  • 标签: 胃炎康方5号 慢性萎缩性胃炎 胃三联法
  • 简介:目的:克隆并分析抗β淀粉样肽单克隆抗体轻链与重链可变区基因。方法:从分泌抗β淀粉样肽单克隆抗体的杂交瘤细胞株A8中提取总RNA,根据恒定区序列设计基因特异性引物,通过5’RACE法扩增抗体的轻链和重链可变区基因,测定并分析可变区基因序列,并克隆入pMD18-T载体。结果:重链可变区基因序列全长450bp,编码150个氨基酸残基;轻链可变区基因序列全长429bp,编码143个氨基酸残基。在GeneBank中对氨基酸序列进行比对分析,二者均符合小鼠IgG可变区基因的特征。根据Kabat法则对A8抗体轻链和重链可变区氨基酸序列基因进行分析并确定了3个抗原互补决定区(CDR)、4个框架区(FR)和信号肽。结论:通过5’RACE法得到了抗β淀粉样肽单克隆抗体轻链与重链可变区基因,为进一步研究抗体三维结构,以及对该抗体进行人源化改造奠定了基础。

  • 标签: Β淀粉样肽 单克隆抗体 可变区序列 5’RACE
  • 简介:目的:观察Kozak序列(+4G)对稳定转染的人淀粉样前体蛋白(hAPP751)-EGFP融合真核表达载体在CHO细胞中表达的影响,为APP的水解代谢研究提供细胞模型。方法:分别将含Kozak序列(+4G)和不含Kozak序列的hAPP751全长基因片段亚克隆入pEGFP-N1表达载体,得到pEGFP-hAPP751(+4G)和pEGFP-hAPP751重组质粒,转染CHO细胞,通过G418筛选稳定转染细胞株,再用倒置荧光显微镜挑取绿色荧光强的细胞进行亚克隆,并观察融合蛋白的表达强度和细胞定位,最后用EGFP抗体通过Western印迹检测融合蛋白。结果:PCR、酶切和测序证明将含Kozak序列(+4G)和不含Kozak序列的hAPP751全长基因片段分别连入了真核表达载体pEGFP-N1中;荧光显微镜下观察pEGFP-hAPP751(+4G)稳定转染细胞的细胞膜和细胞质产生较强的绿色荧光,其中在细胞质中成不均匀颗粒状分布,Western印迹检测到相对分子质量约156000的融合表达蛋白,与预期相符;pEGFP-hAPP751转染细胞,其绿色荧光十分微弱且在整个细胞均匀分布,Western印迹检测到相对分子质量约26000的EGFP,但检测不到预期的hAPP751-EGFP融合表达蛋白。结论:Kozak序列(+4G)可以明显促进hAPP751的表达,获得稳定转染且高水平融合表达hAPP751-EGFP的细胞株。

  • 标签: Kozak序列(+4G) 人淀粉样前体蛋白751 增强型绿色荧光蛋白 阿尔茨海默病 真核表达
  • 简介:目的:应用重组杆状病毒表达系统制备由HA、NA、M1和M2蛋白组成的H5N1高致病性禽流感病毒样颗粒,为研究H5N1高致病性禽流感疫苗奠定基础。方法:构建能共表达A/chicken/Jilin/2003(H5N1)禽流感病毒血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)、A/PR/8/34(H1N1)流感病毒基质蛋白(M1)和离子通道蛋白(M2)的2个二元重组杆状病毒,共同感染HighFive细胞,同时表达HA、NA、M1和M2蛋白,使这4种蛋白在感染的细胞内自主组装成病毒样颗粒。经差速离心和蔗糖密度梯度超速离心收获病毒样颗粒,通过Western印迹鉴定病毒样颗粒的组成,透射电镜观察病毒样颗粒形态,血凝试验测定病毒样颗粒的活性。结果:HA、NA、M1、M2蛋白在昆虫细胞中共表达,并组装成病毒样颗粒;电镜观察到病毒样颗粒的形态与流感病毒一致,直径约80nm;血凝试验显示该病毒样颗粒具有凝集鸡红细胞的活性。结论:应用该方法可以制备流感病毒样颗粒,为H5N1流感疫苗研究提供了可行方案。

  • 标签: 流感病毒 病毒样颗粒 杆状病毒
  • 简介:森林是人们生产生活过程中的重要资源之一,加强林木育苗成为森林建设过程中的一个重要步骤.林木育苗指的是对各种林木从幼木时期开始管理,并且期间进行合理的管理,以提高森林覆盖率以及森林质量的重要措施.本文对林木育苗进行进行分析,旨在提高林木的存活率.

  • 标签: 林木育苗 技术要点 林木管理
  • 简介:锥栗在将乐县广泛分布,笔者经多年探索,整理了一套适合山地锥栗生产的锥栗育苗、定植、早期密植的高效栽培技术

  • 标签: 筐培 密植 高效栽培
  • 简介:草果是一种重要的药食同源植物,也是山区农民增加收入的重要途径之一.因此,对草果种植的关键技术进行分析,有着重要的意义.本文先对草果做一个概述,然后再具体对草果种植的关键技术进行阐述.

  • 标签: 草果 种植 关键技术
  • 简介:巴西地理条件优越,拥有巴西喜拉朵(Cerrado,巴西最有名的咖啡豆产地)、亚马孙雨林(Amazonrainfores)、潘塔纳尔湿地(Pantanalwetlands,世界最大的湿地)、卡汀珈区域(Caatingaregion)、南洋杉(Araucaria)森林和大西洋森林。得天独厚的自然资源和强大的科研实力使巴西生物技术得到迅速发展。巴西是全球生物多样性最丰富的国家,占全球生物种类的20%以上,其中植物达22%,动物达20%,在全球濒危和珍稀动植物中,巴西占有相当高的比例(图1,表1)。

  • 标签: 生物技术 巴西 珍稀动植物 生物多样性 地理条件 科研实力
  • 简介:《数字技术与应用》杂志是天津市电子仪表信息研究所主办.反映数字技术、应用研究的科技期刊。国际刊号ISSN1007-9416,国内刊号CN12-1369/TN,邮发代号:6-251,本刊为月刊。本刊被《中国核心期刊(遴选)数据库》《中国学术期刊(光盘版)》《万方数据数字化期刊群》《中文科技期刊数据库》等网络媒体全文收录,国内外深有影响。[办刊宗旨]《数字技术与应用》是面向数字科技、高端技术教育工作者的学术刊物。旨在推广数字新技术、科技新理念,为广大教育、科研工作者提供学术交流平台,推动数字科技教育事业发展,我刊愿与社会各界合作,携手共进。

  • 标签: 数字技术 专业科技期刊 征稿启示 数字化期刊 邮发代号 中国学术期刊
  • 简介:《生物技术通讯》由军事医学科学院主管,军事医学科学院生物工程研究所主办,是中国科技论文统计源期刊(中国科技核心期刊)。本刊刊载生物技术相关各学科的研究报告、研究简报、技术方法、综述、经验介绍、信息交流等类文章。

  • 标签: 生物技术 征稿简则 通讯 生物工程研究所 科技核心期刊 军事医学
  • 简介:基因芯片是近年来产生的一项生物高技术。它是利用原位合成或合成后交联法,将大量的核酸片段有规则地固定在固相支持物如载玻片、金属片、尼龙膜上,制成芯片,然后将要检测的样品用荧光素或同位素标记,再与做成的芯片充分杂交,通过对杂交信号的检测来分析样品中的信息。基因芯片技术已在基因表达水平的检测、基因点突变及多态性检测、DNA序列测定、寻找可能的致病基因和疾病相关基因、蛋白质作图、基因组文库作图等方面显示出了广阔的应用前景。

  • 标签: 基因芯片 DNA芯片 DNA微阵列 基因组研究
  • 简介:《生物技术世界》杂志以传播生物技术前沿科学,引领生物技术发展潮流为目标,是涉及生物工程、生物技术、微生物学及相关领域的专业性期刊,报道我国生物技术研究开发及生物学相关领域的重要成果和国内外生物技术产业进展。向中国生物及其相关行业的企业家、技术决策者、生命科学的技术人员、生物产业的投资人提供国内外全面及时的生物技术、产品、市场等方面的信息,促进生物研究成果市场化,生物技术产业化,成为学术界、企业界和商贸界沟通的桥梁。本刊的办刊方针是理论与实践相结合,提高与

  • 标签: 生物技术世界 生物研究 前沿科学 理论与实践 生命科学 技术产业化
  • 简介:《生物技术世界》杂志以传播生物技术前沿科学,引领生物技术发展潮撇为目标,是涉及生物工程、生物技术、微生物学及相关领域的专业性期刊,报道我国生物技术研究开发及生物学相关领域的重要成果和国内外生物技术产业进展。向中国生物及其相关行业的企业家、技术决策者、生命科学的技术人员、生物产业的投资人提供国内外全面及时的生物技术、产品、市场等方面的信息,促进生物研究成果市场化,

  • 标签: 生物技术世界 生物研究 前沿科学 生命科学 专业性期刊 技术人员
  • 简介:《生物技术通讯》由军事医学科学院主管,军事医学科学院生物工程研究所主办,是中国科技论文统计源期刊(中国科技核心期刊)。本刊刊载生物技术相关各学科的研究报告、技术方法、综述等文稿。1文稿写作要求文稿请用中文撰写,应具有科学性、创新性、实用性,论点明确,资料可靠,数据真实,文字精炼,层次清楚。文稿必须是没有在国内外公开出版物上发表过的原始著作,或只在学术会议上报告过而未全文发表过的著作。

  • 标签: 生物技术 征稿简则 通讯 生物工程研究所 科技核心期刊 军事医学