简介：目的应用流式细胞技术探讨面神经损伤急性期T细胞功能状态及其病理生理意义，为揭示外伤性面瘫的神经免疫机制提供理论依据。方法制备面神经轴切损伤模型小鼠，分别于损伤后3天、2周分离小鼠肠系膜淋巴结（mesentericlymphnode，MLN）、术侧颈部引流淋巴结（cervicaldraininglymphnode，CDLN）细胞，进行双色免疫荧光标记。以流式细胞术分析T细胞上CD69分子的表达情况。结果手术后3天，面神经损伤组颈部引流淋巴结T细胞CD69表达的百分率与相应手术对照组相比较差异有显著性（P=0．0457）；而神经损伤组、手术对照组肠系膜淋巴结T细胞CD69表达的百分率与正常小鼠相比较差异无显著性（P值分别为0．2817、0．2724）。面神经轴切损伤后2周，神经损伤组CDLN的T细胞CD69表达的百分率仍然维持在较高水平，神经损伤组MLN的T细胞CD69表达的百分率出现上调，与相应对照组及术后3天时相比较差异均有显著性（P值分别为0．0082、0．0133）。结论面神经轴切损伤3天、2周时，颈部引流淋巴结存在T细胞活化并上调；在2周时。肠系膜淋巴结也出现低水平的T细胞活化。提示面神经损伤急性期。伴随着一个局部免疫应答向全身免疫应答转化的过程，在一定程度上有利于机体协调控制免疫应答的规模与方向。

简介：Recently,thehumancochleahasbeenshowntocontainnumerousresidentmacrophagesundersteady-state.Themacrophagesaccumulateinthestriavascularis,amongtheauditorynerves,andarealsospottedinthehumanorganofCorti.ThesemacrophagesmayprocessantigensreachingthecochleabyinvasionofpathogensandinsertionofCIelectrode.Thus,macrophagesexecuteaninnate,andpossiblyanadaptiveimmunity.Here,wedescribethemolecularmarkersCD4andCD8ofTcells,macrophagemarkersMHCⅡandCD11b,aswellasthemicroglialmarkersTEME119andP2Y12,inthehumancochlea.Immunohistochemistryandtheadvantageoussuper-resolutionstructuredilluminationmicroscopy(SR-SIM)wereusedinthestudy.CD4~+andCD8~+cellswerefoundinthehumancochleae.Theywereseeninthemodiolusinasubstantialnumberadjacenttothevessels,intheperipheralregionoftheRosenthal’scanal,andoccasionallyinthespiralligament.Whilethereareasurprisinglylargenumberofmacrophagesinthestriavascularisaswellasbetweentheauditoryneurons,CD4~+andCD8~+cellsarehardlyseenintheseareas,andneitherareseenintheorganofCorti.Inthemodiolus,macrophages,CD4~+andCD8~+cellsappearedofteninclusters.InteractionbetweenthesedifferentcellswaseasilyobservedwithSR-SIM,showingcloselyplacedcellbodies,andtheprocessesfrommacrophagesreachingoutandtouchingthelymphocytes.OtherwisetheCD4~+andCD8~+cellsinhumancochleartissuearediscretelyscattered.Thepossiblerolesoftheseimmunecellsarespeculated.

简介：目的构建含有小鼠Smad4基因和增强型绿色荧光蛋白基因（EGFP）的慢病毒病毒表达载体,为今后应用该重组慢病毒介导的内耳基因导入和相关的聋病基因治疗奠定实验基础.方法利用基因重组、限制性内切酶酶切及基因测序的方法,构建并鉴定pLenti6.3-Smad4-IRES2-EGFP真核表达质粒;利用脂质体介导转染的方法,将pLenti6.3-Smad4-IRES2-EGFP转染导入293T细胞,荧光显微镜下观察EGFP基因表达情况,利用实时荧光PCR的方法检测小鼠Smad4基因mRNA水平的表达情况.结果经PCR鉴定和基因测序证实了小鼠Smad4基因序列与基因bank中的序列相一致.pLenti6.3-Smad4-IRES2-EGFP质粒转入293T细胞后,荧光显微镜下可见有绿色荧光蛋白表达.293T细胞经慢病毒感染后,其小鼠Smad4基因mRNA表达量增加了66427倍.病毒滴度经测定为2.5×108TU/ml.结论成功地构建了含有小鼠Smad4基因的慢病毒表达载体,并能在293T细胞中表达.

简介：目的进一步探讨bFGF-Math1基因在前庭上皮细胞系(UEC-4)细胞中的表达及生物学作用.方法利用阳离子脂质体LipofectamineTM2000介导bFGF-Math1基因真核表达质粒(pCI-bFGF-Math1)转染UEC-4细胞,利用RT-PCR技术检测基因在细胞中的表达,并利用免疫组织化学方法观察细胞的分化及特异性抗体的表达.结果脂质体介导的基因可在细胞内获得良好的表达,转染后24h,相差显微镜下观察细胞形态发生变化,免疫组织化学显示转染后细胞可以表达毛细胞特异性蛋白Myosin7a.结论bFGF-Math1基因有良好的生物学特性,可以有效地诱导支持细胞向毛细胞样细胞转变.

简介：Objective:Toinvestigateimmune-relatedgeneticbackgroundinbilateralsuddensensorineuralhearingloss(SSNHL).Casereportandmethods:Thecaseisa45-year-oldmanpresentingwitha7-yearhistoryofbilateralprofoundSSNHL.Bloodbiochemicaltestingdemonstratedincreasedlevelsoftotalcholesterol(5.88mmol/L).TestsforhepatitisBshowedapositiveantibodyagainstthehepatitisBcoreantigen.ComplementC3wasbelowthenormalvalue,andcomplementC4andIgGwereinthelowerrangeofnormalvalues.CTimagesshowedanormalinnerearandvestibularaqueductbutroundwindowmembranousossificationonbothsides.Atotalnumberof232immuneassociatedgenesweresequencedusingthenextgenerationsequencingtechnique.Results:Mutationsweredetectedin5genes,includingthephosphoinositide3-kinasecatalyticsubunitdelta(PIK3CD),caspaserecruitmentdomain-containingprotein9(CARD9),complementfactorH-related(CFHR2),immunoglobulinlambda-likepolypeptide1Protein(IGLL1),andtransmembranechannel-likegenefamily8(TMC8).InthePIK3CDgene,aC896Tsubstituteinexon7wasdetected.Thismutationcausesprimaryimmunodeficiencyandisanautosomaldominantdisease.Conclusion:ThePIK3CDC896TmutationresponsibleforprimaryimmunodeficiencymaycontributetotheonsetofbilateralSSNHLwithsubsequentrapidprogression.

简介：目的比较腺病毒、脂质体、纳米材料三种不同类型的载体携带目的基因对293T细胞的转染效率及细胞毒性的大小,筛选理想的基因载体。方法用重组腺病毒、Lipofectamine^TM2000、Entranster^TM—D纳米材料为转染载体,携带含有增强型绿色荧光蛋白（EGFP）报告基因的Math1-EGFP基因及真核表达质粒pRK5-Math1—EGFP，按照转染试剂盒说明优化其转染条件，分别转染293T细胞。24小时后在共聚焦显微镜下观察转染结果并计数阳性细胞率，采用RT—PCR法检测转染细胞中Math1基因mRNA的表达，用MTT法检测不同转染条件下，不同转染载体对293T细胞的细胞毒性。结果经优化转染条件，重组腺病毒载体转导的细胞中荧光蛋白表达几乎为95％以上,Lipofectamine^TM2000、Entranste^TM-D纳米材料载体转染的细胞中荧光蛋白表达也分别达到70％和80％以上，而Entranste^rTM-D纳米材料载体在最高转染效率的剂量下仍然保持80％以上的细胞生存率。RT-PCR进一步证实，三种载体转染细胞均有Math1基因mRNA的表达。结论Entranster^TM—D纳米载体作为一种新型纳米聚合物转染试剂，能成功携带内耳基因治疗关键基因Math1基因转染293T细胞，并表现了低毒、高效性能。

简介：目的用细胞学方法,分析线粒体DNA12SrRNA基因中C1494T突变在氨基糖甙类抗生素聋发病机理中的作用.方法从携有线粒体DNAC1494T突变的母系遗传性氨基糖甙类抗生素性耳聋的中国大家系选择部分成员,另外从遗传背景相同的正常中国人群选择对照个体,分别建立淋巴细胞系;并通过细胞融合技术,将淋巴细胞系的线粒体分别融合到缺乏线粒体DNA的p0206细胞中,建立相应的转线粒体细胞系;家系成员与对照个体的淋巴细胞系和转线粒体细胞系,分别在不含/含有氨基糖甙类抗生素(巴龙霉素)的培养液中培养,以倍增时间(doublingtime,DT)作为细胞生长特性的评价标准,通过计算在正常和含有氨基糖甙类抗生素的培养液中倍增时间的比值,比较氨基糖甙类抗生素对细胞生长的影响.结果携有线粒体DNAC1494T突变家系成员较对照个体的淋巴细胞系的倍增时间比值平均增加了24%,但不同家系成员的细胞倍增时间比值的增加程度不同,自10%至50%不等;而当细胞核遗传背景相同后,家系成员较对照个体的转线粒体细胞系的倍增时间比值增长30%,并且来自不同表型的家系成员的细胞倍增时间比值基本相同.结论线粒体DNAC1494T突变可以造成细胞对氨基糖甙类抗生素的超敏性,但其效应要受到核基因的调控.

简介：摘要目的研究慢性特发性荨麻疹患者外周血单个核细胞分泌IFN-γ和IL-4水平检测及意义。方法选择我院2014年5月至2015年5月接收的慢性特发性荨麻疹患者41例作为研究对象，设为观察组，选择同期健康体检者40例作为对照组，对两组的IFN-γ和IL-4水平进行比较分析。结果观察组患者的IFN-γ水平比对照组降低，两组数据差异显著，有统计学意义（P<0.05）；观察组患者的IL-4水平比对照组高，两组数据差异显著，有统计学意义（P<0.05）。结论慢性特发性荨麻疹患者血清中的IFN-γ水平降低，IL-4水平升高，表明IFN-γ和IL-4参与慢性荨麻疹的发病过程。

简介：ObjectiveToinvestigateTcellactivationfollowingfacialnerveaxotomizationandlatentneuroimmunologicmechanismsintraumaticfacialparalysis.MethodsAmurinemodeloffacialnervetransactionwasused.LymphocytesfromcervicalandmesentericlymphnodesinBABL/cmiceatspecifictimeswerecollectedandexpressionratesofCD69onTcellswereassessedbyflowcytometry.ResultsInfiltratingTcellsweredetectedaroundthefacialneuronsinthefacialnervenucleusinmicewhosefacialnervewastransected.ImmunofluorescentstainingshowedrecruitmentofactivatedTcells.Threedayspost-facialnervetransection,theexpressionrateofCD69onTcellsfromcervicaldraininglymphoidnodes(CDLNs)wassignificantlydifferentfromthatonTcellsfrommesentericlymphnodes(MLNs)(P=0.0457),whereasthelatterwassimilartothatinanimalsundergoingshamsurgeriesandthatinblankcontrolanimals(p=0.2817and0.2724,respectively).Twoweekspost-nervetransection,theTcellCD69expressionratefromCDLNsremainedatahigherlevelandthanthatinthesham-operationanimals(p=0.0007).Attwoweeks,CD69expressionrateonTcellsfromMLNswasalsoup-regulatedanddifferentcomparedwiththesham-operationanimalsandwithitselfatthreedayspost-operation(p=0.0082and0.0133,respectively).ConclusionTcellsappeartobeactivatedandup-regulatedinCDLNsfollowingfacialnervetransection.ThereisevenevidenceofTcellactivationinMLNsat2weekspost-nervetransection.Thissuggestesanalterationofimmuneresponsefromlocaltogeneralimmunityintheacutestageoffacialnervetrauma,whichmayhelpcoordinatingandcontrollingthescalesandorientationoftheneuroimmuneresponseduringthepathogenesisandprogressionoffacialnervetrauma.

简介：［摘要］目的研究胃癌中基质金属蛋白酶-9和CD105表达的关系。方法选择49例经病理确诊的胃癌患者和20例正常胃组织为研究对象，采用免疫组织化学法检测MMP-9阳性表达率和CD105标记的微血管密度（MVD）。结果胃癌组织MMP-9阳性表达率、血管密度（MVD）明显高于正常胃组织（67.35%vs25.00%，37.69±9.27vs16.22±5.92）（P<0.05）；低度分化、浆膜层以外、有淋巴转移胃癌MMP-9、MVD明显高于高+中度分析、未及浆膜层、无淋巴转移胃癌（P<0.05）。结论MMP-9和CD105表达与胃癌的发生、进展密切相关，能预测胃癌的病理分化程度、浸润深度及淋巴结转移情况。

简介：目的探讨4～6岁听障儿童看图讲述的特点及与健听儿童的差异。方法参考听障儿童语言能力评估标准中看图讲述能力三级水平,编制4幅彩图，对44名听障儿童和14名健听儿童进行测验。结果听障儿童看图讲述的得分存在显著的年龄差异（F=4.173，P＜0.05）；听障儿童与同龄健听儿童的得分也存在显著差异（P＜0.01）。结论听障儿童看图讲述的能力与其认知发展存在密切关系；4岁听障儿童看图讲述能力落后于同龄健听儿童。

简介：摘要目的通过对28例行预防性T形肠造口术病人的观察及术后回访，总结了该新治疗方法的护理方法。方法回顾性分析2009年4月至2014年4月我科28例急性肠梗阻及超低位直肠癌行预防性T形肠造口术患者的临床资料。围手术期给予健康宣教、造口护理及出院指导。结果28例患者均康复出院，平均住院天数11.2天。1例回肠造口行临时性缝合闭合后粪便自造口漏出，经凡士林纱布覆盖压迫后痊愈。1例出现轻度造口周围皮炎，经造口治疗师及时对症处理后缓解。结论对急性肠梗阻及超低位直肠癌行预防性T形肠造口术的患者，术前做好心理护理及术前准备，术后密切观察病情变化，预防并发症发生，能使患者平稳度过围手术期，降低术后并发症的发生，可提高手术治疗效果。

简介：干细胞治疗耳聋是近些年耳科的研究热点之一,本文通过对干细胞耳聋治疗相关的文献进行综述,从干细胞用于内耳结构的替代或修复的基础、干细胞植入的方式、干细胞移植安全性方面,对干细胞治疗耳聋的可行性进行论述,认为干细胞的内耳移植治疗已具备一定的基础,在移植前需对细胞的分化进行更精准的控制,并且可以与传统的治疗方式（如人工耳蜗植入术）结合使用。

简介：ObjectiveToconstructaprokaryoticexpressionvectorbearingfusiongeneNT4-ADNF-9forfuturestudiesongenetictherapiesforsensorineuraldeafness.MethodsDoublestrandADNF-9cDNAwassynthesizedusingasymmetricalprimer/templatesandligatedtothe3'terminalofsignalandleaderpeptidesofneurotrophin4(NT4).ThefusiongeneNT4-ADNF-9,wassubclonedintoprokaryoticexpressionvectorpBV220,andnamedpBV220/NT4-ADNF-9.DNAsequenceofthefusiongenewasanalyzed.ThefusionproteinwasisolatedbySDS-PAGEanditsbioactivitywasevaluatedusingprimarycultureofday8chickenembryonicDRGcells.ResultsThecorrectsequenceoffusiongeneNT4-ADNF-9wassuccessfullysubclonedintothepBV220vector.TheexpressedADNF-9proteinshoweditseffectsinpromotingcellsurvivalandneuritegrowth.ConclusionProkaryoticexpressionvectorpBV220/NT4-ADNF-9wasconstructedsuccessfullyandtheexpressedfusionproteindemonstratedsatisfactorybioactivity.

简介：颈胸部各种创伤、气管切开或气管插管后造成的气管狭窄是后天性气管狭窄主要原因。近年来随着应用机械呼吸疗法,这种原因所引起的气管狭窄也日渐增多。气管狭窄为不可逆转的、进行性加重的病变,唯一有效的治疗方法是外科手术切除狭窄组织,恢复气管管腔通气。因为病程是进行性加重,也有骤然发生气管完全梗阻的危险，所以手术宜尽早进行。

简介：目的通过观察耳蜗基底膜毛细胞凋亡相关因子caspase-3、caspase-8和caspase-9表达的变化，揭示老年大鼠耳蜗毛细胞凋亡的信号通路。方法人选Fischer344大鼠27只．青年组12只，3-4月龄；老年组15只，20～27月龄。3种半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶荧光标记青年大鼠耳蜗各8个，老年大鼠耳蜗各10个。应用电位反应测听仪检测不同频率短纯音（5、10、20和d0kHz）诱发的青年和老年大鼠双侧听性脑干诱发电位反应阈值（ABR）。听觉功能测试后，用微量注射器分别将新鲜配制的3种半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶荧光染色液缓慢注入动物内耳，耳蜗内灌注后1h，动物断头处死。采用细胞核DNA荧光染料碘化丙锭（PI）染色耳蜗基底膜细胞，荧光显微镜下观察不同月龄大鼠耳蜗基底膜毛细胞3种半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶荧光染色的变化。结果老年大鼠的不同频率听性脑干反应阈值均高于青年对照组（P〈0．05）。青年大鼠耳蜗毛细胞核周围未见3种半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶阳性荧光标记物，老年大鼠耳蜗基底膜以核固缩为特征的凋亡外毛细胞核周围存在caspases-3和caspases-9绿色荧光标记物，未见caspases-8标记物。以核肿胀为特征的坏死外毛细胞核周围未见3种半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶阳性荧光标记物。结论老年大鼠耳蜗毛细胞凋亡可能通过caspases-9相关的线粒体信号转导通路而不是easpases～8相关的死亡受体通路启动完成。

简介：目的观察新生大鼠（P1、P7、P14、P21）耳蜗Corti器的形态结构及排列方式，以便了解听毛细胞纤毛发育的过程。方法取新乍SD大鼠四个阶段的耳蜗，采刖扫描电镜对出生后大鼠耳蜗Corti器形态结构进行系统观察。结果发现这四个阶段在体犬鼠耳蜗毛细胞从出生至毛细胞完全发育成熟，绝大部分都是以一排内毛细胞和三排外毛细胞的方式排列的，只有少部分在局部发现多出几个外毛细胞形成第四排。毛细胞的形态结构及排列方式随着时间的改变逐渐发育成熟。P14这个阶段是个重要的时期，Corti器表面柱细胞头板增宽，表面的微绒毛减少，Deiter细胞表面微绒毛也减少，动纤毛从底圄至顶圈逐渐退化已经基本结束，P14这个阶段Corti器各个部分发育已经完全成熟：结论出生后14天之内。大鼠听毛细胞静纤毛和动纤毛与听器其他细胞形态结构仍不同程度地处于由不成熟到成熟的逐渐发育过程，为研究大鼠出生后Corti器的发育、听觉功能的建立和完善提供了比较可靠的形态学证据。

简介：

简介：目的了解扁桃体滤泡树突细胞肉瘤的病史、症状、体征、诊断及治疗。方法对1例单侧扁桃体滤泡树突状细胞肉瘤患者进行研究,治疗上予以单侧扁桃体及新生物扩大切除术,总结病史和临床特点,明确其诊断和治疗方法。结果患者术后继续采取放化疗治疗,现无不适。结论扁桃体滤泡状细胞肉瘤比较少见,主要诊断依据为其临床特点及病理检查,主要治疗方法为手术,术后结合放化疗。

简介：目的对新生大鼠耳蜗前体细胞进行分离、培养和鉴定。方法从出生7天的大鼠耳蜗中分离、培养前体细胞，用免疫细胞化学的方法对前体细胞进行鉴定；血清诱导分化后鉴定分化潜能，进一步了解其多向分化特性。结果原代培养的细胞，培养1d后即可见“细胞球”。细胞球内大部分细胞呈nestin、musashil、pax2和BrdU阳性，表明其具有自我更新及有丝分裂的能力。细胞球经诱导分化14d后，对分化细胞行免疫细胞化学鉴定，发现分化细胞表达毛细胞标志物myosinVIIA和phalloidin，表达成熟神经元标志物NeuN，表达不成熟神经元标志物Tujl，表达星形胶质细胞标志物GFAP，表达少突胶质细胞标志物galactocerebroside，以及谷氨酸能神经元标志物GluR-1，证明其具有多向分化潜能。结论本实验证明耳蜗前体细胞具有神经干细胞的多向分化潜能，为研究通过基因治疗的方法促进耳蜗神经细胞增殖提供了一种体外模型。