简介：作为一个模式植物,烟草在植物分子生物学研究中发挥着重要的作用。总RNA的提取质量,对于基因表达、基因克隆、cDNA文库建立、RNA原位杂交以及转基因材料鉴定等分子生物学基础研究至关重要。尤其在进行基因克隆及cDNA文库时,只有高质量的RNA,才能保证cDNA第一链合成的完整性。由于烟草中糖类、蛋白质及次生代谢物的含量较高,因此,在应用TRIzolRNA提取试剂盒进行烟草总RNA提取时,所提取的RNA产物中的蛋白质及多糖等杂质含量偏高。因此,针对这一问题,我们对TRIzol法进行了改进,并获得了高质量的烟草总RNA。经琼脂糖电泳检测,利用该方法提取的烟草总RNA,条带清晰、无拖尾现象,28S与18S的比例约为2:1。紫外吸收值的测定表明,所提取的烟草总RNA的A260/A280的值基本达到了1.9以上,说明所提取的RNA的质量较高,可广泛应用于基因的克隆及基因的表达研究。

简介：目前关于落叶木本果树DNA提取的材料多数为植物的叶片,叶片具有试材广泛、容易研磨、DNA产量高、质量好等优点,但也会受到季节、病虫害的影响且不耐贮藏。落叶果树枝条具有取材容易、DNA含量丰富的特点而适合在休眠季节用于提取DNA,进而加速果树分子生物学研究进程。本研究探讨了CTAB法、SDS法对休眠季节不同时期取材的葡萄、桃、樱桃、杏、苹果、银杏、柿子、枣8种落叶果树的一年生枝条DNA提取效果。结果表明:除葡萄外其他多数材料在整个休眠时期均能提出高质量的DNA,所提DNA电泳带纹清晰、亮度高,DNA产率高、质量优,可用于有关分子生物学的后续试验(RAPD分析);再DNA提取方法方面,从DNA产量和质量上来看,SDS法总体上要优于CTAB法。最后对提取中出现中存在过多的酚类、多糖和其他次生物质去除方法进行了讨论。

简介：随着不同转基因生物(GMO)制品的不断商业化,转基因成分检测技术也需不断更新。由于甘蔗红糖为甘蔗汁经高温熬煮浓缩而成,红糖中残留的DNA降解严重、含量低、片段短,且蛋白及糖分杂质含量高,所以甘蔗红糖DNA是比较难以收集并进行分子检测的。为了在转基因甘蔗红糖商业化前建立起转基因甘蔗红糖DNA的提取及分子鉴定技术,本研究以转基因甘蔗和非转基因甘蔗为材料,模仿传统的红糖制作工艺,分别获得了转基因甘蔗红糖与非转基因甘蔗红糖。通过对DNA提取方法进行改进,设计不同扩增片段长度的引物,并对传统PCR与荧光定量PCR进行比较,建立了稳定的甘蔗红糖DNA的提取方法及外源基因分子鉴定技术该技术对转基因甘蔗红糖与非转基因甘蔗红糖进行准确鉴别,为今后转基因甘蔗红糖的商业化所需的转基因食品鉴定提供技术支持,也为后面更为重要的转基因甘蔗白糖DNA的提取及分子鉴定提供借鉴。

简介：以卷丹、麝香百合品种富田和离体鲜切花的花蕾为材料，比较Trizol法、异硫氰酸胍法、CTAB改进法和SDS改进法提取总RNA的效果，结果表明，SDS改进法能有效去除多糖，提取的RNA中28SrRNA亮度约为18SrRNA的两倍，OD260/OD280值介于1．7-2．2之间，卷丹RNA得率为132．52μg／g，富田RNA得率为186．88μg／g。进一步用SDS改进法分别提取富田外轮花瓣、内轮花瓣、雄蕊、雌蕊、叶和茎的RNA，同样可以获得完整的纯度高的RNA，其中28SrRNA亮度约为18SrRNA的两倍，OD260／0D280值介于1．7～2．2之间，说明此方法适用于百合各个组织RNA的提取。经RT—PCR获得了花发育基因的特异性条带，说明用SDS改进法从百合中提取的RNA质量好、产率高、完整性强，完全适合于百合进一步的分子生物学研究。

简介：为探讨庙台槭不同组织DNA的高效提取方法,分别以叶片和果实为材料,以完全随机区组试验设计,设置不同浓度的β-巯基乙醇和不同浓度的PVP作为预处理,采用试剂盒法提取基因组DNA,提取后对基因组DNA进行浓度、分光光度值的测定以及PCR扩增,综合各项指标选择出效果最好的预处理方法,并进一步以CTAB法进行验证,之后应用于不同个体庙台槭的DNA提取中。结果发现:以庙台槭果实为材料,不需要预处理,提取的DNA即可满足下游实验需要;以叶片为材料,用0.5%β-巯基乙醇和1%PVP预处理能有效提高提取的DNA浓度和质量,经验证发现该预处理方法适用于CTAB法,且能够极显著地提高DNA提取的浓度和质量;进一步应用于所有132个庙台槭个体的总DNA提取,获得的DNA均能满足后续实验要求。本研究为进一步研究庙台槭遗传多样性等工作提供帮助,同时也能够为槭属其他植物的相关研究提供参考。

简介：模板DNA的质量直接影响PCR扩增的结果,而不同提取方法及其缓冲液的成份与浓度对提取DNA的质量有重要影响.本文以5个栽培大豆品种的叶片为材料,比较分析了SDS与CTAB两种提取方法以及不同浓度CTAB提取缓冲液对所提取的DNA质量的影响,并通过PCR进行检验.实验结果表明:用1%(W/V)、2%(W/V)浓度的CTAB提取缓冲液和1.25%(W/V)SDS提取缓冲液所提取的大豆叶片DNA的质量较好,均能满足PCR扩增模板的需求,其中以1.25%(W/V)SDS提取得到的大豆叶片DNA质量最好,以其为模板扩增的效果最佳,而4%浓度的CTAB不适宜提取大豆叶片DNA.

简介：植物叶片中含有的多糖、蛋白质和多酚等物质,很大程度会影响总DNA的提取质量。本研究以剑叶虾脊兰(Calanthedavidii)和银带虾脊兰(Calantheargenteo-striata)幼嫩叶片为材料,采用改良CTAB法提取总DNA,设置样品重量(0.05g,0.10g,0.20g)、清洗时间(10min,20min,30min)、水浴温度(25℃,60℃,45℃)、水浴时间(2h,1h,0.5h)4因素3水平正交试验,探究不同因素、不同处理对DNA得率和纯度的影响,以获取最佳提取条件。研究发现剑叶虾脊兰和银带虾脊兰DNA的最佳提取条件均为:样品重量0.2g、清洗时间30min、水浴温度60℃、水浴时间2h。该处理下剑叶虾脊兰DNA产率最高为490.5ng/μL,A260/A280均值为1.953;该处理下银带虾脊兰DNA产率最高为139.83ng/μL,A260/A280均值为1.967。各因素对剑叶虾脊兰DNA产率影响次序为:样品重量>清洗时间>水浴温度>水浴时间;各因素对银带虾脊兰DNA产率影响为:样品重量>水浴温度>清洗时间>水浴时间。本研究为虾脊兰属的分子生物学研究提供科学依据。

简介：本研究采用超声波辅助提取石榴皮多糖,响应面法优化了超声波辅助提取石榴皮多糖的最佳工艺条件。Box-Behnken设计用于评估四个独立变量(液料比,提取时间,提取温度,超声功率)对石榴皮多糖产量的影响。研究表明,液料比为23mL/g,提取时间62min,提取温度57℃,超声功率为145W,是石榴皮多糖的最佳提取条件。在最适条件下,石榴皮多糖产量为(13.64±0.21)%,预测收益率为13.81%。

简介：本试验采用甜叶菊组培苗叶片为材料,以RAPD分子标记检验水浴温度与时间、取样重量以及优化步骤等三个DNA提取影响因素,进而以SRAP和MSAP分子标记技术对RAPD结果进行验证,以提高甜叶菊组培苗DNA提取效率。结果表明,水浴温度、时间为70℃30min(A2),取样量为0.1g(B2)时,提取到常规步骤9的上清液V(C4)即可满足常规分子标记要求,且提取时间可减少1~1.5h。

简介：为了优化玉米苞叶多酚微波辅助提取工艺及研究其抗氧化性,本研究以多酚提取率为指标,在分别考察乙醇体积分数、料液比、微波功率和微波时间对玉米苞叶多酚提取影响的基础上,进行响应面设计实验,并以对·OH和DPPH·的半清除率（IC50）评价玉米苞叶多酚的抗氧化性。结果显示,玉米苞叶多酚微波辅助提取的最佳工艺条件为：乙醇体积分数50%、料液比1∶40（g/mL）、微波功率390W,微波时间60s。该工艺条件下,玉米苞叶多酚提取率为2.647mg/g,与模型理论预测值（2.673mg/g）的相对误差仅为0.98%,表明该工艺稳定、可靠。玉米苞叶多酚与BHT对·OH的IC50分别为4.28μg/mL和23.41μg/mL,对DPPH·的IC50分别为5.84μg/mL和27.57μg/mL,表明玉米苞叶多酚具有较强的抗氧化性。本研究为玉米苞叶多酚的提取及其抗氧化活性的深入研究提供了依据。

简介：为探索适于小麦籽粒蛋白质组学研究的样品制备最优方法,本研究以Rht10鲁麦15开花后第31天的籽粒为材料,采用4种不同蛋白质提取方法：TCA/丙酮法、尿素/硫脲法、酚提取法Ⅰ和酚提取法Ⅱ,对不同提取方法得到的蛋白量以及蛋白分离结果进行比较分析。结果显示：TCA/丙酮法和尿素/硫脲法获得的蛋白点较少,分别为484个和489个,蛋白质损失较大,蛋白质在碱性端（pH7附近）堆积严重;酚提取方法Ⅰ得到的蛋白点709个,部分蛋白点弥散,碱性端蛋白轻微堆积;酚提取方法Ⅱ得到的蛋白点866个,蛋白点清晰,无碱性蛋白堆积。研究结果表明,在小麦籽粒蛋白质组的研究中,酚提取方法更为适合小麦籽粒蛋白的提取,同时方法Ⅱ优于方法Ⅰ。

简介：针对多浆旱生植物霸王富含多酚和多糖类物质的特点，在常规异硫氰酸胍方法的基础上进行改进，摸索出一种霸王叶和根总RNA提取的方法。本方法主要通过在提取缓冲液中加入4％β-巯基乙醇以去除多酚物质的干扰；用2mol／L醋酸钠（pH4．0）、水饱和酚和氯仿：异戊醇（24：1）抽提以去除多糖和蛋白物质。采用该方法提取的霸王总RNA纯度高、完整性好，电泳条带清晰，OD260/OD280值在1．8～2．0之间，其质量完全可以满足进一步分子生物学研究的要求。

简介：本研究采用福林-酚法测定7种油茶饼提取物中的总多酚含量,并用高效液相色谱法（HPLC）对其多酚类物质的成分进行鉴定和定量分析,同时应用DPPH自由基清除法、ABTS自由基清除法、羟基自由基（OH·）清除法和FRAP法测定油茶饼提取物的抗氧化能力。结果表明,7种油茶饼中海南（炒）（6.10mg/g）的总多酚含量显著高于江西（蒸）（2.66mg/g）,且在所有样品中共鉴定出6个多酚组分,分别为没食子酸、儿茶素、表儿茶素、槲皮素、3,4-二羟基苯乙酸和山茶甙,其中海南（炒）油茶饼的山茶甙含量为18.444mg/g,是广西（蒸）中山茶甙含量的18倍,是广西（炒）的15倍;此外,海南（炒）中槲皮素含量是江西（蒸）中槲皮素含量的50倍,差异十分显著。7种油茶饼提取物均具有明显的抗氧化活性,且在一定范围内呈量效关系。因此,油茶饼有望作为一种潜在的天然抗氧化剂应用于食品、保健品、医药品及化妆品中,具有较高的开发利用价值。