简介：

简介：背景：辣椒素类物质，包括辣椒素及其类似物，是导致辣椒果实辛辣的原因。尽管辣椒素为人熟知并且每天都会用到．但是对于辣椒素合成途径中的相关基因并不是完全了解。已有研究表明，pAMT和Punl编码的蛋白分别催化辣椒素合成途径中的第二步和最后一步反应，并且Punl编码的蛋白具有辣椒素合酶活性。然而，并没有直接的证据证明Punl具有辣椒素合酶活性。结果：为了证明Punl蛋白在辣椒素合成中的作用，我们利用大肠杆菌合成了抗Punl蛋白抗体，利用该抗体拮抗内源的Punl活性。同时通过病毒介导的基因沉默技术靶定了Punl的mRNA，以确认抗Punl抗体的特异性。在Punl下调表达的胎座组织中，利用该抗体进行westernblot，检测到Punl蛋白的积累减少，同时辣椒素在胎座中的积累量也降低。从胎座组织中分离得到原生质体，在体外进行辣椒素的从头合成，加入抗Punl抗体之后，辣椒素的合成受到抑制。通过分析不同辣椒品种的pAMT和Punl的表达，我们发现辣椒素的高水平积累总是伴随着pAMT和Punl的高水平表达，也就是说这两个基因对辣椒素合成很重要。比较有辣味辣椒和无辣味辣椒的香草基胺（辣椒素合成的前体物质）和辣椒素的积累水平，结果表明：在辛辣味辣椒中香草基胺的含量很低，推测可能是香草基胺合成之后，Punl把香草基胺快速转化为辣椒素；而在无辣味辣椒中由于缺乏Punl，香草基胺的含量积累到很高的水平。结论：对辣椒素从头合成途径和抗Punl抗体进行原生质体试验，证明了Punl基因及其产物参与了辣椒素的合成。与辣椒素的积累相比较，分析香草基胺的积累过程，揭示了Punl是辣椒素和香草基胺积累水平的决定因素。