简介:应用DNA重组技术,构建了金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)的原核表达载体pET22b(+)-SEB,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达。经终浓度为0.4mmol/LIPTG的诱导作用,可获得分子量约为29KD的表达蛋白。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析结果表明,重组表达的SEB主要以可溶的形式存在于细胞周质中,表达SEB的量约占菌体总蛋白的30%左右。重组表达的SEB经HiTrap^TMchelatingHP柱纯化能达到SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳纯。ELISA试验表明纯化的重组SEB与抗天然野生型SEB单克隆抗体呈现明显的阳性免疫反应。
简介:用化学方法合成随机DNA库,应用SELEX技术筛选能与苏云金芽孢杆菌(Bt)结合的DNA适配子,经过12轮的筛选后,适配子与Bt结合的亲和力达到饱和。在克隆获得的18个适配子序列中,有3个适配子具有较高的亲和力,其中多数具有典型的三茎环结构。