简介:以pBRTM/HCV-3011模板,通过PCR法扩增ns5a、LISDR(左端序列)和RISDR(右端序列),分别经XhoⅠ/EcoRⅠ、XhoⅠ/HindⅢ和EcoRⅠ/HindⅢ双酶切,连入穿梭质粒pEGFP-N3中,构建重组质粒pEGFP-N3-ns5a和pEGFP-N3-ns5a-△ISDR.对重组质粒进行酶切分析和序列测定.将这2种重组质粒通过电穿孔法转染HeLa细胞,然后在G418选择压力下进行有限稀释法筛选,用RT-PCR和荧光显微镜鉴定.经酶切鉴定和基因测序证实,重组穿梭质粒已插入目的片段ns5a、LISDR和RISDR.RT-PCR和荧光显微镜检测到目的基因的表达.以上结果说明成功构建了真核表达载体pEGFP-N3-ns5a和pEGFP-N3-ns5a-△ISDR,目的基因在HeLa细胞中得到表达,为研究HCVNS5A中是否存在抗干扰素治疗的功能蛋白提供了实验材料.
简介:Thebindingofnuclearproteinspreparedfrommouseerythroidtissueindifferentdevelopmentalstagestothe5'-flankingregulatoryelementsofhumanβ-globingene,twonegativecontrolregions(NCR1,-610to-490bp;NCR2,-338,to-233bp),wasidentified.TwostagespecificproteinfactorscorrespondingtoembryonicandfetalstageswerefoundtobecapableofbindingtoNCR2.Thesedataprovidedevidencethatthecisactingelementsofthe5'-flankingregionmightbeinvolvedinthedevelopmentalcontrolofβ-globingeneandNCR2mightberesponsibleinartforthesilenceofβ-glolbingeneintheembryonicandfetalstages.
简介:MicroRNAs(miRNA)指导在基因表示的一个重要角色在植物为到环境条件的发展进程和回答要求了的顺序特定的posttranscriptional基因silencing玩。然而,很少对transcriptional和miRNA表示的posttranscriptional规定被知道。Histoneacetylation在染色质改变起一个重要作用并且为基因激活被要求。由在Arabidopsis的异种分析miRNAs和相应主要miRNAs的子集的累积,我们显示出那histoneacetyltransferaseGCN5(一般控制非镇压的protein5)在miRNA上有一般压抑的效果生产,当它为一个子集的表示被要求时(例如压力可诱导)MIRNA基因。在miRNA生产的GCN5的一般否定功能多半通过象DICERLIKE1(DCL1)那样的miRNA机械基因的间接压抑被完成,有锯齿(SE),偏下性的LEAVES1(HYL1)和ARGONAUTE1(AGO1)。染色质immunoprecipitation试金表明GCN5指向到MIRNA基因的一个子集并且为在这些loci的histoneH3离氨酸14的acetylation被要求。而且,由trichostatin的histonedeacetylation的抑制一个处理或在histonedeacetylase,基因异种损害了某些miRNAs的累积。这些数据一起建议ArabidopsisGCN5在transcriptional和posttranscriptional层次防碍miRNA小径,histoneacetylation/deacetylation是涉及miRNA的规定的epigenetic机制生产。
简介:TheconditionofourEarthischanging,anditischangingduetohumandominance.Werealisedthatourinfluenceonbiotaisoverwhelming,buildinguptoamassextinction,thesixthinthehistoryoflifeonEarth.Thelaterthisrealisationisturnedintoactiontodecreaseourfatalinfluence,theworsearethechancesofthesurvivalofthehumanrace.Howcanwefail?Oneplausiblescenarioisthatthiscanhappenviathelossofecologicalservices
简介:Xenopusorganizerspecificgenenogginpossessesnearlyallthecharacteresticpropertiesoftheactionoforganizertospecifytheembryonicbodyacis.Toanalyzehowthematernalinheritedfactorscontrolitsexpressionpattern,weclonedthe5'regulatoryregionofnoggingene.The1.5kbupstreamsequensecoulddirectreportergenetoexpressinvivoanddatafromdeletionanalysisindicatedthata229basepairfragmetisessentialforactivatingnogginexpression.WefurtherdemonstratedthattheresponseelementswithinthisregulatoryregionwereindeedunderthecontrolofgrowthfactoractivinandWntsignalingpathwaycomponents.
简介:流行性感冒的所有已知的子类型A病毒在野水鸟被维持,这些病毒的自然水库。流行性感冒A病毒被孤立从许多有改变病态和死亡率的动物种类。更重要地,流行性感冒A病毒与潜在地致命的结果在人引起呼吸疾病。在人的本地或全球的爆发被过量住院和死亡典型地描绘。在1997,H5N1子类型的高度病原的鸟的流行性感冒病毒在传给人的香港出现了,导致由鸟的流行性感冒病毒感染的人的死亡的首先记录的盒子。在越南,印度尼西亚,和泰国在家禽在2003年7月开始的新爆发,和高度病原的鸟的H5N1流行性感冒病毒后来在整个亚洲并且进欧洲和非洲传播了。这些病毒继续与高死亡率感染人并且引起隐约可见的世界范围的担心流行。而且,H5N1病毒爆发在整个亚洲在家禽工业上有破坏效果。因为H5N1病毒爆发看起来从南部的中国发源,我们这里在中国检验H5N1流行性感冒病毒,与他们的生物性质上的一个重音。
简介:
简介:Thesurfaceglycoproteinhemagglutinin(HA)helpstheinfluenzaAvirustoevadethehostimmunesystembyantigenicvariationandisamajordrivingforceforviralevolution.Inthisstudy,theselectionpressureonHAofH5N1influenzaAviruswasanalyzedusingbioinformaticsalgorithms.Mostoftheidentifiedpositiveselection(PS)siteswerefoundtobewithinoradjacenttoepitopesites.SomeoftheidentifiedPSsitesareconsistentwithpreviousexperimentalstudies,providingfurthersupporttothebiologicalsignificanceofourfindings.ThehighestfrequencyofPSsiteswasobservedinrecentstrainsisolatedduring2005–2007.PhylogeneticanalysiswasalsoconductedonHAsequencesfromvarioushosts.Viraldriftisalmostsimilarinbothavianandhumanspecieswithaprogressivetrendovertheyears.OurstudyreportsnewmutationsinfunctionalregionsofHAthatmightprovidemarkersforvaccinedesignorcanbeusedtopredictisolatesofpandemicpotential.
简介:Hybridoma房间在抗体生产率追随者暴露显示增加到张力亢进的条件。然而,内在的机制很好没被理解。在现在的学习,我们假设激活的T房间的原子因素5(NFAT5)/tonicityenhancer绑定蛋白质(TonEBP)工作增加hybridomacells的抗体生产率。NFAT5是osmosensitive哺乳动物的抄写因素。然而,它在没在张力亢进的周围被洗的各种各样的器官的无所不在的表示建议NFAT5可以也在等渗的条件下面调整细胞生长和功能。在这研究,我们由西方的污点分析在hybridoma房间检验了表示ofNFAT5,并且发现它在张力亢进的媒介显著地增加了。为了推进,在hybridoma房间定义NFAT5的功能,RNA干扰技术习惯于down在SGB-8房间(一根hybridoma房间线)调整NFAT5的表示。在等渗的媒介,hybridoma房间的抗体生产率被NFAT5while的down规定减少细胞增殖没被影响。这里介绍的结果表明那NFAT5不仅在hybridoma房间在渗透的压力反应小径起一个重要作用而且为最佳的抗体生产率是必要的。
简介:昆虫chitinases从皮骨骼或midgut的peritrophicmetrix涉及几丁质的降级。在草之小穗migratoria,二复制Cht5s(LmCht5-1和LmCht5-2)被显示了有不同分子的特征和生物角色。探索二LmCht5s的蛋白质性质,我们heterologously在SF9房间用baculovirus表示系统表示了两酶,并且描绘运动并且净化的酶的糖类绑定性质。LmCht5-1和LmCht5-2展出了类似的pH和温度最佳。LmCht5-1有更低的K为oligomeric底层的m价值(4MU-(GlcNAc)3),和更高的K为更长的底层(CM-Chitin-RBV)的m价值与LmCht5-2相比。催化领域当模特儿的氨基酸和相同的比较介绍了类似的提姆桶结构并且区分了在二蛋白质之间的氨基酸。LmCht5-1有几丁质绑定域(CBD)紧,到胶体的几丁质的界限,而是LmCht5-2没为绑定有CBD到胶体的几丁质。我们的结果建议LmCht5-1和LmCht5-2,在催化领域的区域II有批评glutamate残余,展出了chitinolytic活动劈开聚合并且oligomeric底层。LmCht5-1对oligomeric底层举办了相对更高的活动,4MU-(GlcNAc)3,而LmCht5-2向更长的底层展出了更高的活动,CM-Chitin-RBV。这些调查结果是有用的让进一步的研究在昆虫生长和开发澄清他们的不同角色。
简介:为了研究干旱胁迫下内生真菌对玉米幼苗生长的影响和筛选具有提高玉米抗旱潜能的优良菌种,在温室盆栽条件下,将分离自新疆荒漠盐生植物根系的5种内生真菌Curvulariainaequalis、Fusariumavenaceum、Neocamarosporiumsp.AS65231、PleosporalesAS29261和Ulocladiumsp.AS91282分别接种到玉米幼苗根系,进行干旱胁迫培养6周,测定苗期玉米的株高、生物量、可溶性糖含量、过氧化物酶(POD)活性和丙二醛(MDA)含量。研究结果表明:干旱胁迫下,与不接菌对照相比,接种C.inaequalis、F.avenaceum、PleosporalesAS29261和Ulocladiumsp.AS91282可显著提高玉米幼苗地下生物量(P〈0.05),而接种Neocamarosporiumsp.AS65231对其影响不显著;接种F.avenaceum和Ulocladiumsp.AS91282可极显著提高玉米根系可溶性糖含量(P〈0.01);接种C.inaequalis、PleosporalesAS29261和Ulocladiumsp.AS91282对根系POD活性影响不显著,而F.avenaceum和Neocamarosporiumsp.AS65231显著降低了根系POD活性;接种Neocamarosporiumsp.AS65231和Ulocladiumsp.AS91282显著降低根系的MDA含量(P〈0.01)。然而,与不接菌对照相比,接种5种内生真菌对玉米幼苗的株高、地上生物量和总生物量,以及叶片的可溶性糖含量、POD活性和MDA含量等均无显著影响。综合比较来看,干旱胁迫下接种内生真菌Ulocladiumsp.AS91282对促进玉米幼苗抗干旱能力优于其他4种菌。