简介:摘要:目的 探析两类不同核酸提取方式对新型冠状病毒核酸检测室间质评样本的成果,开展效果对比。方法 搜集2022年广东省临床检验中心发放的新型冠状病毒核酸检测室间质量评估样本15份,运用两类常规核酸提取方式(磁珠法、核酸释放剂法)开展质评物复孔核酸提取与扩增。结果 依据广东省临床检验中心回馈,15份质评样本内,囊括9份新型冠状病毒阳性样本,6份阴性样本,分别复孔进行核酸提取与扩增,遂共18份阳性样本检测,12份阴性样本检测。磁珠提取法检出率为100%,释放剂法检出率为83.33%。取复孔的平均Ct值进行分析,磁珠法的OR1ab基因和N基因的Ct值均显著优于核酸释放剂法,差异具备统计学意义(P<0.05)。另两种方法OR1ab基因相差Ct值为(5.64±1.45 ),N基因相差Ct值为(4.46±1.28)。结论 不同核酸提取法对质评样本检验成果不同,核酸释放剂法的核酸提取效果有待提升。
简介:DNA提取是进行DNA检测的第一步。也是最重要的环节之一。磁珠DNA自动提取系统的出现为DNA提取提供了更为有效的平台,使DNA的提取过程更加简易,操作更加便捷,避免了人为因素带来的误差和污染,在保证提取质量的同时缩短了实验的整体时间,同时使提取更加精确和均一。DNA自动提取工作站与磁珠提取法相结合设计而成的磁珠DNA自动提取系统正逐渐成为DNA提取步骤中被广泛普及和应用的主流方法之一。GA318-32A核酸自动提取仪即是基于磁珠提取法研制而成的一套高通量、高灵敏度的自动核酸纯化提取设备。它可在短时间内利用机器磁棒架上的磁棒,将吸附有核酸的磁珠移动至不同的试剂孔内,经过细胞裂解、核酸吸附、清洗与洗脱,最终得到高纯度核酸。从GA318—32A核酸自动提取仪的结构原理、主要特征、法医学应用等方面进行阐述,以期使该仪器在法医DNA检测中得到更广泛的应用。
简介:【摘要】 目的 通过比较三种核酸提取方法,了解不同新冠病毒核酸提取方法的性能。方法采用核酸释放剂法、磁珠法和离心吸附柱法对10份浓度为500copies/ml的新冠病毒阳性质控品和58例新冠病毒核酸检测双阳性的鼻咽拭子样本进行核酸提取,提取后的核酸在同一品牌的荧光定量PCR扩增仪上,使用同一品牌的新冠病毒核酸扩增试剂进行RT-PCR扩增,对三种新冠病毒核酸提取方法的效果进行比较。结果 试验结果显示,离心吸附柱法核酸提取效率最高,磁珠法次之,核酸释放剂法最低。 结论 离心吸附柱法提取核酸的效果最好,但操作繁琐、耗时,适合对阳性结果的复核。其次是磁珠法,既可以满足临床要求,又可以实现自动提取,适合于大样本的检测。核酸释放法虽然节省了核酸提取步骤和操作时间,但在三种方法中核酸提取的效率最低。
简介:摘要 目的 了解新型冠状病毒样品混合提取对核酸检测结果的影响,探讨在日常检测工作中进行样品混合提取核酸的可行性。 方 法 将第三方阳性质控品单份(1组)与新型冠状病毒咽拭子阴性样品单份进行两两加样混提即2组、3组,用实时荧光RT—PCR技术检测原液和混合ORF-1ab基因和N基因,对三组进行数据分析。结果 1组与2组、3组对ORF-1ab基因和N基因相比,P值均大于0.05,无统计学意义 结论 2份样本混合提取对西安天隆磁珠法核酸提取试剂盒检测2019-nCoV是可行的,适合在日常工作中应用。
简介:摘要目的通过比较6种新型冠状病毒(2019-nCoV)核酸检测试剂的最低检出限、扩增效率、特异性、准确度以及与6种核酸提取试剂匹配性分析,为选择核酸提取试剂、扩增试剂以及临床诊疗提供科学依据。方法将国家标准物质进行浓度梯度稀释得到6个浓度梯度,用广州达安、北京金豪、武汉明德、四川迈克、江苏硕世和上海之江6种2019-nCoV核酸检测试剂(分别简写为DA、JH、MD、MK、SS、ZJ)检测靶基因,评价其最低检出限、扩增效率、准确度、特异性等性能。阳性质控品水平1、2(低中浓度)分别用6种核酸提取试剂提取(编号a~f)搭配6种2019-nCoV核酸检测试剂检测靶基因,比较不同核酸提取试剂和不同核酸检测试剂之间匹配情况,采用双因素方差分析。结果DA、JH、MD、SS试剂核衣壳蛋白(N)基因最低检出限为7.0×102拷贝数/ml;JH、MD、SS、MK试剂开放阅读框架1ab(ORF1ab)基因最低检出限为9.39×102拷贝数/ml;MK、ZJ试剂包膜蛋白(E)基因最低检出限为5.03×102拷贝数/ml;SS试剂N基因扩增效率89%,ORF1ab基因扩增效率为90%,扩增效率最高。6种2019-nCoV核酸检测试剂特异性均100%;a、b、c、d提取试剂与6种核酸检测试剂匹配性好,但a提取试剂更适合搭配SS、MK和ZJ核酸检测试剂(P<0.05),d提取试剂更适合搭配MD、SS、DA、JH和MK核酸检测试剂(P<0.05),e提取试剂更适合搭配SS核酸检测试剂(P<0.05),f提取试剂更适合搭配DA、JH核酸检测试剂(P<0.05),e和f试剂不适合搭配MK和ZJ。结论6种核酸检测试剂性能良好,实验室根据实际情况选择合适的提取试剂和检测试剂搭配使用。
简介:摘要目的研究磁珠法、离心柱法及一步法对新型冠状病毒(2019-nCoV)核酸提取效率的差异。方法2021年3月5日,在南京大学医学院附属泰康仙林鼓楼医院核酸采样室采集本科室员工咽拭子标本10份,将阳性质控品混入其中,作为模拟阳性标本。用磁珠法、离心柱法及一步法分别提取模拟阳性样本及其稀释样本RNA、人源性标本及其稀释样本RNA,用微量紫外分光光度计测量核酸的纯度(A260/A280比值)及浓度,并进行荧光定量PCR扩增实验,比较其循环阈值(CT)和提取效率。用3种方法提取模拟弱阳性标本,比较其扩增后的CT值差异。服从正态分布的计量资料以x¯±s表示,组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果磁珠法、离心柱法、一步法提取的2019-nCoV核酸均能扩增出阳性结果。磁珠法与一步法提取的RNA扩增CT值差异无统计学意义(t=‒0.995,P=0.376)。离心柱法提取的RNA较另外2种方法提取的RNA扩增后CT值小,离心柱法、磁珠法、一步法提取的模拟阳性样本扩增后ORF1ab基因的CT值分别为29.28±0.06、30.82±0.14、29.79±0.01,差异有统计学意义(F=11.196,P=0.041);E基因的CT值分别为28.52±0.40、27.33±0.78、27.38±0.13,差异有统计学意义(F=3.407,P=0.169);N基因的CT值分别为28.61±1.02、27.24±0.20、27.25±0.47,差异有统计学意义(F=2.880,P=0.020);离心柱法、磁珠法、一步法提取的人源性标本扩增后人源基因CT值分别为19.68±0.36、20.14±0.06和20.58±0.49,差异有统计学意义(F=4.904,P=0.048)。人源性标本稀释2倍即对扩增人源基因CT值有影响,未稀释标本较稀释2倍标本CT值较小,相差2.95±0.22,差异有统计学意义(t=‒3.025,P=0.039)。一步法、磁珠法、离心柱法提取时间分别为(15.00±1.50)、(20.00±1.50)和(40.00±5.5)min,差异有统计学意义(F=688,P=0.027)。结论磁珠法、离心柱法及一步法均可用于2019-nCoV核酸提取,离心柱法提取效率较磁珠法及一步法高。
简介:【摘要】目的 探讨不同核酸提取方案对HCV-RNA检验结果影响。方法 60例丙肝患者为样本,时间2020年7月-2021年7月,随机分组,A组固相吸附法提取核酸,B组氯仿-异丙醇法提取核酸,对比检验灵敏度、阳性检出率。结果 A组稀释1X105倍,可完成荧光定量PCR检测,继续稀释无法检测,B组稀释1X104倍,可完成荧光定量PCR检测,继续稀释无法检测;A组阳性检出率较B组高,P<0.05;血红蛋白浓度5g/L,A组抗干扰能力与B组无差异,P>0.05;血红蛋白浓度50g/L时,A组抗干扰能力较B组高,P<0.05。结论 固相吸附法用于HCV-RNA检验中,阳性检出率高、抗干扰能力强,符合临床检验要求,且检测结果可作为丙肝治疗依据。
简介:摘要:自动移液臂作为核酸提取仪的核心部件,其作用是将混匀后的溶液移动到指定位置的一种自动化工具,直接决定了自动核酸提取的效率。目前市面上使用的小型核酸提取仪用的8通道自动移液臂大部分为国外进口,其维护费用高,如出现故障更换的价格也是极其的昂贵且所需时间周期长,因此我国对8通道自动移液臂的研发需求迫切。本文从目前8通道自动移液臂的技术特点对我国对8通道自动移液臂的研发进行了展望。