简介:摘要目的探讨7型腺病毒肺炎患儿的临床特征。方法回顾性分析2019年1月至2019年9月厦门市儿童医院收治的20例7型腺病毒肺炎患儿的临床资料,对患儿的临床表现、实验室检查、肺部影像学资料、纤维支气管镜镜下表现、治疗方案及疗效等进行分析,并随访观察患儿预后情况。结果20例7型腺病毒肺炎患儿均伴有发热、咳嗽,易出现呼吸困难;易引发肝功能异常、心肌损伤等合并症。20例患儿均有不同程度的乳酸脱氢酶(LDH)升高,重症患儿常合并降钙素原(PCT)升高。易混合其他病原体感染,其中以肺炎支原体感染居多,其次是流感嗜血杆菌、肺炎链球菌、烟曲霉菌。胸部影像学检查可见肺实变不张,以左下肺、右下肺为主,合并患侧少量胸腔积液。部分患儿后期遗留支气管扩张或闭塞性细支气管炎;经纤维支气管镜检查主要表现为气道黏膜充血、水肿,部分出现黏液栓甚至塑型支气管炎形成。所有患儿经综合治疗后均病情好转出院。结论7型腺病毒肺炎发病急,病情重,合并症多,病程长,缺乏特异性治疗,且易出现混合感染,导致病情迁延、反复,加大治疗难度,后期遗留后遗症概率高。适时行纤维支气管镜及肺泡灌洗治疗,对于疾病的诊断及治疗均有非常重要的意义。
简介:摘要目的分析儿童重症7型腺病毒肺炎临床特点及治疗结果,探讨儿童重症7型腺病毒肺炎的治疗方法。方法回顾性分析2016年1月至2019年10月广州市妇女儿童医疗中心儿童重症监护病房收治的70例重症7型腺病毒肺炎患儿的临床资料,描述性分析重症7型腺病毒肺炎患儿的临床情况、治疗经过及结局。结果(1)70例重症7型腺病毒肺炎患儿,男43例(61.4%),女27例(38.6%);0~12个月30例(42.9%),13~36个月28例(40.0%),>36个月12例(17.1%)。(2)入PICU前发病时间(11.87±7.10)d;入PICU 6 h内序贯器官功能衰竭评分为6.80±3.13;Murray肺损伤评分为2.49±1.15;P/F值(150.57±86.25)mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)。X线胸片受累程度达2个象限及以上的有64例(91.4%);所有患儿诊断脓毒症。(3)实验室检查:白细胞计数(7.6±5.5)×109/L,血小板计数(238.8±164.2)×109/L,C反应蛋白(39.4±37.2)mg/L。(4)治疗方案和结局:65例(92.9%)使用静脉丙种球蛋白;45例(64.3%)使用过激素;43例(61.4%)进行了纤维支气管镜探查或冲洗;21例(30.0%)进行了血液净化治疗;63例(90.0%)进行了无创或有创呼吸机治疗,其中20例(28.6%)患儿使用了高频呼吸机辅助通气;6例(8.6%)使用了肺泡表面活性物质;19例(27.1%)使用体外膜肺氧合治疗。呼吸机平均治疗时间(13.10±11.58)d;PICU中体温降至正常时间为(4.69±4.01)d;平均入住PICU时间(15.76±12.20)d;平均住院天数(27.04±13.10)d。16例患儿死亡,病死率22.9%。结论儿童重症7型腺病毒肺炎病情危重、肺损伤显著,虽经体外膜肺氧合等积极治疗,仍具有较高的病死率。
简介:摘要目的探讨人腺病毒7型(human adenovirus type 7,HAdV-7)感染对于炎症小体激活的影响及作用机制。方法采用免疫荧光检测HAdV-7对于THP-1分化的巨噬细胞的感染;应用ELISA方法检测HAdV-7感染对于IL-1β的激活;实时荧光定量PCR检测病毒感染对于NLRP3、pro-IL-1β、caspase-1等mRNA表达的影响;蛋白质免疫印迹实验(western blot,WB)检测病毒感染后细胞内NLRP3、pro-IL-1β的表达及上清中caspase-1和IL-1β蛋白表达情况。结果免疫荧光检测显示HAdV-7可感染THP-1分化的巨噬细胞,WB显示HAdV-7感染诱导细胞内pro-IL-1β蛋白表达上调,ELISA检测表明HAdV-7感染可诱导IL-1β的分泌表达(MOI=0.5,P=0.0008)。使用Ac-YVDK-cmk抑制caspase-1表达后,HAdV-7感染上清中IL-1β的表达被明显抑制(P=0.0025);HAdV-7感染caspase-1缺陷的THP-1分化的巨噬细胞,IL-1β的表达同样被显著抑制(P=0.0191)。荧光定量PCR检测HAdV-7感染可以诱导细胞内pro-IL-1β和NLRP3 mRNA表达上调(NLRP3:P=0.0004;pro-IL-1β:P=0.0007),同时WB显示HAdV-7可以诱导细胞内pro-IL-1β和NLRP3蛋白表达上调;使用NLRP3特异性抑制剂MCC950处理细胞,可抑制HAdV-7感染的细胞上清中IL-1β的表达(P=0.0027); HAdV-7感染NLRP3缺陷的THP-1分化的巨噬细胞,IL-1β的表达被明显抑制(P=0.0189)。分别使用TLR2、TLR4、TLR7/9信号传导抑制剂,抑制HAdV-7感染THP-1分化的巨噬细胞,结果显示抑制TLR4信号传导,细胞上清中IL-1β的表达水平有明显下调(P=0.0122);使用ROS抑制剂、组织蛋白酶B抑制剂,或抑制K+外流,分别处理HAdV-7感染THP-1分化的巨噬细胞,结果显示抑制组织蛋白酶B(P=0.0292),或抑制K+外流时(KCl, P=0.0022;Glibenclamide, P=0.0275),细胞上清中IL-1β的表达水平有明显下调。结论HAdV-7感染THP-1细胞激活NLRP3炎症小体,NLRP3炎症小体激活的第一信号通过Toll样受体4(TLR4)信号传导,第二信号主要通过半通道模型介导K+外流的和溶酶体破坏模型释放组织蛋白酶B的激活NLRP3炎症小体。
简介:摘要报道1例通过呼吸道标本宏基因组二代测序检测出人类腺病毒7型阳性,且血清腺病毒IgA抗体阳性,同时应用咽拭子PCR法检测甲型H1N1流感病毒核酸阳性,确诊为重症社区获得性肺炎(腺病毒7型合并甲型H1N1病毒)患者的诊治过程,结合文献复习总结该病的临床特点及诊治方法,以提高临床医生对该病的认识,改善患者的预后。
简介:摘要目的原核表达人腺病毒(HAdV)7型DNA结合蛋白(DBP),制备DBP蛋白多克隆抗体。方法合成HAdV-7 DBP基因并克隆至pET30a载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导进行原核表达。经镍离子金属螯合层析纯化后免疫家兔制备多克隆抗体,使用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)测定该抗体效价;使用Western blotting方法与间接免疫荧光方法(IFA)检测抗体特异性。以rDBP包被ELISA反应板使用间接ELISA对HAdV感染儿童急性期血清中抗DBP蛋白IgM和IgG抗体进行检测。结果成功构建HAdV-7 DBP原核表达载体,表达的重组DBP蛋白经镍柱亲和层析纯化后纯度>95%,间接ELISA方法测得制备的多克隆抗血清的抗体效价为1∶1 024 000,Western blotting方法和IFA方法显示该抗体具有较高的特异性,间接ELISA方法检测HAdV感染儿童 急性期血清中抗DBP蛋白IgM和IgG抗体的阳性率分别为50.0%(19/38)和63.2%(24/38)。结论成功构建HAdV-7 DBP蛋白的原达表达载体,获得了HAdV-7型DBP重组蛋白和高效价的兔多克隆抗体。
简介:摘要目的总结儿童人腺病毒7型混合肺炎支原体感染肺炎的临床特征。方法选择2018年12月1日至2019年9月1日在武汉儿童医院确诊的36例人腺病毒7型混合肺炎支原体感染肺炎儿童为研究对象(混合感染组),回顾性分析36例患儿的临床表现、实验室检查和影像学资料,并选取同期住院的94例单纯人腺病毒7型感染肺炎患儿作为单纯感染组。采用t检验、非参数秩和检验及χ2检验进行比较分析。结果混合感染组患儿中,男25例,女11例,平均年龄3.11岁;主要临床表现为发热(97.2%)、咳嗽(100.0%),且多表现为高热,平均体温为40.0 ℃,热峰约4次/d,平均热程11 d;重症肺炎率高(86.1%),与单纯感染组(69.1%)比较差异有统计学意义(χ2=3.878,P<0.05);可合并心肌损害(55.5%)、心力衰竭(16.7%)、肝功能损害(25.0%)、消化道出血(5.5%)、中毒性脑病(11.0%)、噬血细胞综合征(16.7%)、闭塞性细支气管炎(50.0%)等并发症。细胞因子,如白细胞介素(IL)-6[237.84(108.59,606.36) ng/L]、IL-10[31.44(12.13,69.60) ng/L]、干扰素γ[(102.85±92.23) ng/L]均明显升高,其中IL-6、IL-10与单纯感染组[148.35(57.43,390.82);19.67(10.96,35.35)]比较升高更为明显,差异均有统计学意义(Z=-1.984、-2.077,均P<0.05)。混合感染组肺实变(50.0%)及胸腔积液(38.9%)均较常见,且胸腔积液发生率较单纯感染组(19.1%)明显升高,差异有统计学意义(χ2=5.594,P<0.05)。结论儿童腺病毒7型混合肺炎支原体感染肺炎多为重症肺炎,可能与细胞因子风暴有关。
简介:目的构建Wilson病基因ATP7B的重组腺病毒载体.方法分别以BamHⅠ+SalⅠ双酶切pcDNA3.0/ATP7B和pDC315,将ATP7BcDNA目的基因片段和线性化的pDC315连接,定向克隆构建pDC315/ATP7B,以PCR和酶切的方法鉴定.pDC315/ATP7B与腺病毒骨架共转染293细胞构建Ad-ATP7B,PCR进行鉴定.结果经PCR和酶切鉴定证实pDC315/ATP7B构建成功.pDC315/ATP7B与腺病毒骨架共转染293细胞后见明显的毒斑,说明二者在293细胞中同源重组并包装成功.经PCR证实重组腺病毒Ad-ATP7B构建已完成.结论本实验成功构建了ATP7B外源目的基因序列完全正确的重组腺病毒载体Ad-ATP7B,为下一步采用ATP7B基因重组腺病毒载体对Wilson病进行基因治疗打下了基础.
简介:目的:构建白细胞介素7(IL-7)和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)共表达的重组腺病毒载体,为进一步感染干细胞奠定基础。方法:将目的基因IL-7克隆到含有报告基因EGFP的穿梭质粒中,然后再将构建的重组穿梭质粒转移至pAdxsi载体中,构建重组腺病毒载体质粒,继而在H293细胞中扩增,纯化后测定病毒滴度。结果:pShuttle-EGFP-mIL7重组穿梭质粒经酶切鉴定得到0.5kb和5.1kb2条带;pAdxsi-EGFP-mIL7重组腺病毒载体质粒经酶切鉴定得到14K、11.8K、3.1kb、2.66kb、2.47K、1.45K、0.6K7条带;TCID50法测定纯化后的病毒滴度为2×10^10pfu/ml。结论:pAdxsi-EGFP-mIL7重组腺病毒载体构建成功。
简介:摘要目的建立免疫荧光检测牛腺病毒3型(bovine adenovirus type 3, BAV-3)的方法,用于生物制品用牛源材料的检测。方法分别以牛鼻甲骨细胞、传代牛肾细胞、原代牛肾细胞培养BAV-3,筛选最适宜的敏感细胞培养BAV-3,纯化获得抗原后免疫BALB/c小鼠。采用杂交瘤抗体技术制备抗BAV-3单克隆抗体(单抗),亲和层析法纯化后用异硫氰酸荧光素标记。用制备的单抗建立直接免疫荧光法检测BAV-3,并对方法的特异性、灵敏度及中间精密度进行验证。结果用抗BAV-3单抗检测牛腹泻病毒、副流感病毒3型、呼肠孤病毒、呼吸道合胞病毒、狂犬病毒、羊轮状病毒,均无交叉反应。采用该方法检测牛鼻甲骨细胞培养的BAV-3,3次传代可检出的最低病毒含量和标准差分别为0.10和0.05 CCID50。结论建立的免疫荧光检测BAV-3方法具有良好的特异性和较高的灵敏度、中间精密度,可用于BAV-3的常规检测。
简介:利用构建的犬2型腺病毒E3区缺失质粒pBE3L分别构建了含有和不含外源性启动子的绿色荧光蛋白(GFP)基因和狂犬病病毒糖蛋白(Rgp)基因的重组表达质粒pBE3LGFP、pBE3LCGFP、pBE3LRgp和pBE3LCRgp,并分别对DK细胞进行了转染实验,以检测其表达,结果显示,pBE3LCGFP质粒在转染DK细胞后,于36h即可观察到荧光,72~96h无明显差别,传3代后仍可见表达荧光的细胞,pBE3LCRgp质粒转染DK细胞后,于48~96h用间接免疫荧光染色可检测到糖蛋白的表达,而pBE3LGFP和pBE3Rgp质粒转染DK细胞后经检测均无表达,表明构建的E3区缺失性载体不能利用E3区自身的启动子进行目的基因的表达,但利用外源性启动子可使外源基因获得良好表达.