简介:【摘要】目的:利用改良RP-HPLC(反向高效液相色谱法)对牡丹皮中的芍药苷与丹皮酚的含量进行测定。方法:采用色谱柱SunFire ODS C18(4.5x250mm,5μm),然后以甲醇-水梯度洗脱,控制流速1.0ml/min,在最大的波长下检测,220mm为芍药苷,264mm为丹皮酚。结果:0.216-2.132μg范围为芍药苷,0.613-6.320μg范围为丹皮酚且线性关系良好(r分别为0.9994,0.9997),芍药苷平均回收率为99.65%,丹皮酥平均回收率为98.96%。结论:采用改良RP-HPLC方法检测,可有效控制牡丹皮质量,且该方法简单、重复性较好,准确率高,可为牡丹皮中的芍药苷与丹皮酚含量测定提高可靠参考。
简介:摘要目的探讨血必净注射液(简称血必净)与其组分芍药苷对脓毒症大鼠脾脏调节性T细胞(Treg)免疫功能及大鼠生存率的影响。方法(1)免疫磁珠法分离提纯3只9~12周龄SD雄性大鼠(鼠龄、品系、性别下同)脾脏CD4+CD25+Treg和CD4+T细胞。按照随机数字表法(分组方法下同)将CD4+CD25+Treg分为空白对照组、单纯CD3/CD28组、单纯内毒素/脂多糖(LPS)组、LPS+血必净组、LPS+芍药苷组,每组6孔。单纯CD3/CD28组、单纯LPS组、LPS+血必净组及LPS+芍药苷组细胞采用加入1.25 μg CD3和2.5 μg CD28的含体积分数10%胎牛血清的RPMI 1640培养基培养24 h后,单纯LPS组、LPS+血必净组及LPS+芍药苷组细胞加入1 μg/mL LPS 1 μL,并立即在LPS+血必净组细胞中加入5 mg/mL血必净1 μL、在LPS+芍药苷组细胞中加入80 μmol/L芍药苷1 μL,均继续培养72 h。空白对照组细胞加入等体积含体积分数10%胎牛血清的RPMI 1640培养基培养96 h。采用流式细胞术检测CD4+CD25+Treg的细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)及叉头翼状螺旋转录因子3(Foxp3)表达、CD4+CD25+Treg凋亡率,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测CD4+CD25+Treg培养上清液中白细胞介素10(IL-10)水平。将CD4+T细胞分为空白对照′组、单纯CD3/CD28′组、单纯LPS′组、LPS+血必净′组、LPS+芍药苷′组,每组6孔,加入前述相应组处理后CD4+CD25+Treg共培养72 h后,流式细胞术检测CD4+T细胞增殖活性,ELISA法检测CD4+T细胞培养上清液中IL-4水平。(2)将120只大鼠分成假手术组、单纯脓毒症组、脓毒症+血必净组和脓毒症+芍药苷组,每组30只。单纯脓毒症组、脓毒症+血必净组和脓毒症+芍药苷组大鼠采取盲肠结扎穿孔术构建脓毒症模型,假手术组大鼠单纯开腹模拟手术。脓毒症+血必净组大鼠术后经尾静脉注射血必净4 mL/kg,2次/d;脓毒症+芍药苷组大鼠术后经尾静脉注射芍药苷978 μg,2次/d。分别观察并记录术后1、2、3、4、5、6、7 d的4组大鼠生存率,并绘制Kaplan-Meier生存曲线。对数据行单因素方差分析、LSD-t检验,对生存曲线行Log-rank(Mantel-Cox)检验。结果(1)与空白对照组比较,单纯LPS组CD4+CD25+Treg的CTLA-4、Foxp3表达水平明显升高(t=27.19、17.00,P<0.01),细胞培养上清液中IL-10水平明显升高(t=40.76,P<0.01)。与单纯LPS组比较,LPS+血必净组、LPS+芍药苷组CD4+CD25+Treg的CTLA-4、Foxp3表达水平明显降低(tLPS+血必净组=31.03、11.27,tLPS+芍药苷组=5.79、5.64,P<0.01),细胞培养上清液中IL-10水平明显降低(t=15.49、4.20,P<0.01)。与空白对照组比较,单纯LPS组CD4+CD25+Treg凋亡率明显下降(t=6.02,P<0.01);与单纯LPS组比较,LPS+血必净组、LPS+芍药苷组CD4+CD25+Treg凋亡率明显增加(t=20.32、8.60,P<0.01)。(2)与单纯CD3/CD28′组比较,单纯LPS′组CD4+T细胞增殖率明显降低(t=22.47,P<0.01),细胞培养上清液中IL-4水平明显升高(t=3.51,P<0.01)。与单纯LPS′组比较,LPS+血必净′组、LPS+芍药苷′组CD4+T细胞增殖率均明显增加(t=16.31、11.48,P<0.01),细胞培养上清液中IL-4水平无明显变化。(3)假手术组、单纯脓毒症组、脓毒症+血必净组、脓毒症+芍药苷组大鼠术后7 d生存率分别为100%(30/30)、30%(9/30)、57%(17/30)、47%(14/30)。与单纯脓毒症组比较,脓毒症+血必净组大鼠术后7 d内生存率明显升高(χ2=4.34,P<0.05),脓毒症+芍药苷组大鼠术后7 d内生存率无明显变化。结论血必净及其组分芍药苷均能逆转脓毒症介导的大鼠Treg免疫抑制功能上调及凋亡抵抗,并改善效应性T细胞增殖能力。芍药苷对脓毒症大鼠生存率的改善效应明显弱于血必净。
简介:摘要目的研究黄芩甲苷对心肌缺血再灌注大鼠氧化应激反应的干预作用及其作用机制。方法将120只大鼠随机分为6组,每组20只:假手术组(sham组)、模型组、黄芩甲苷低(10 mg/kg)、中(20 mg/kg)、高(40 mg/kg)剂量组,地尔硫(阳性对照药)组。采用夹闭冠状动脉的方法制备心肌缺血再灌注损伤大鼠模型,连续尾静脉治疗给药7 d,给药结束后,于腹主动脉取血并分离得到血清,测定血清中谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、磷酸肌酸激酶(phosphocreatine kinase,CPK)以及乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性;取血结束后,每组随机取出大鼠心脏,切片,并进行2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色,评估各组大鼠心肌梗死面积;每组另外10只取出心脏进行匀浆得心脏组织匀浆液,比色法检测心肌组织中氧化应激因子超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、还原性谷胱甘肽(Glutathione,GSH)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、过氧化氢酶(catalase,CAT)水平;Western blot法检测心肌组织中血红素加氧酶1(heme oxygenase 1,HO-1)、新型核调节因子2(novel nuclear regulator2,Nrf2)蛋白表达并进行定量分析。结果黄芩甲苷低中高剂量组大鼠心肌组织梗死面积分别为(35.02±9.36)%,(29.41±6.38)%,(25.47±6.31)%;黄芩甲苷低剂量组血清中AST的含量为(477.00±83.49)kU/L,中剂量组血清中AST的含量为(398.00±64.17)kU/L,高剂量组中AST的含量为(408.00±48.38)kU/L;CPK的含量分别降为(523.00±49.36),(458±38.77),(336±36.13) kU/L;LDH的含量为(901.00±89.65),(867.00±84.04),(695±69.55)kU/L;心肌组织中SOD活性升高为(24.43±4.35),(27.14±3.18),(34.96±6.46)U/g;GSH的活性升高为(11.27±4.83),(14.70±2.49),(15.28±3.53)U/g;CAT活性升高为(7.08±0.96),(9.59±1.35),(12.51±2.36)U/g;MDA的活性降低为(28.97±4.46),(23.59±3.24),(16.04±2.67)U/g;同时对HO-1、Nrf2蛋白表达进行检测,HO-1蛋白相对表达量升高为(1.61±0.05),(1.73±0.03),(2.04±0.04)U/g;Nrf2蛋白的相对表达量显著升高为(1.61±0.03),(1.93±0.03),(2.34±0.02)。上述数据与模型组比较,差异具有统计学意义(P值均<0.05)。结论黄芩甲苷具有抑制心肌缺血再灌注损伤大鼠氧化应激反应的作用,其作用机制可能与黄芩甲苷能够提高机体Nrf2与HO-1内源性抗氧化信号传导通路,增加心肌组织的抗氧化能力来发挥心肌保护作用。
简介:摘要目的探讨芍药苷对脓毒症心脏微血管内皮细胞(CMECs)通透性的影响及机制。方法体外分离并原代培养大鼠CMECs细胞,待细胞进入对数生长期用于实验。采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)筛选出芍药苷的安全有效浓度10、20、40 μmol/L。将细胞分为空白对照组、脂多糖(LPS)组及低、中、高浓度芍药苷预处理组。空白对照组用完全培养基培养;LPS组在完全培养基中加入1 mg/L的LPS刺激细胞;芍药苷预处理各组分别于LPS刺激前4 h加入10、20、40 μmol/L芍药苷进行预处理。各组细胞于LPS刺激后继续培养24 h,采用辣根过氧化物酶(HRP)法检测大鼠CMECs细胞通透性;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清液中CXC趋化因子配体(CXCL1、CXCL2)水平;采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中CXCL1、CXCL2的mRNA表达;采用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测细胞中磷酸化Src(p-Src)、血管内皮-钙黏蛋白(VE-cadherin)、磷酸化丝裂素活化蛋白激酶(p-MAPK)的蛋白表达。结果与空白对照组相比,LPS组大鼠CMECs细胞通透性明显增加;经不同浓度芍药苷预处理后细胞通透性均有一定程度改善,以40 μmol/L芍药苷组改善最明显,与LPS组比较差异有统计学意义(A值:1.61±0.07比2.13±0.06,P<0.01)。ELISA结果显示,空白对照组大鼠CMECs细胞上清液中有适量CXCL1、CXCL2分泌;但在LPS诱导下,细胞上清液中CXCL1、CXCL2分泌量明显增加;给予不同浓度芍药苷预处理后细胞上清液中CXCL1、CXCL2的分泌量均明显减少,其中40 μmol/L芍药苷对CXCL1的抑制作用最佳,20 μmol/L芍药苷对CXCL2的抑制作用最佳,与LPS组比较差异均有统计学意义〔CXCL1(ng/L):337.51±68.04比829.86±65.06,CXCL2(ng/L):4.48±0.11比9.41±0.70,均P<0.01〕。RT-qPCR结果显示,大鼠CMECs细胞中CXCL1、CXCL2的mRNA表达与ELISA结果一致,表现为LPS能够诱导大鼠CMECs细胞中CXCL1、CXCL2的mRNA表达增加;而不同浓度芍药苷预处理后能够明显降低CXCL1、CXCL2的mRNA表达,40 μmol/L芍药苷对CXCL1 mRNA表达的抑制效果最佳,20 μmol/L芍药苷对CXCL2 mRNA表达的抑制效果最佳,与LPS组比较差异均有统计学意义〔CXCL1 mRNA(2-ΔΔCt):0.543±0.004比0.812±0.089,CXCL2 mRNA(2-ΔΔCt):10.52±0.71比17.68±1.09,均P<0.01〕。Western Blot结果显示,空白对照组大鼠CMECs细胞中有适量p-Src、VE-cadherin和p-MAPK蛋白表达;LPS刺激后大鼠CMECs细胞中p-Src、p-MAPK蛋白表达明显增加,而VE-cadherin蛋白表达明显下降;经不同浓度芍药苷预处理后,细胞中p-Src、p-MAPK蛋白表达有不同程度降低,但VE-cadherin蛋白表达则呈升高趋势,以40 μmol/L芍药苷组效果最佳,与LPS组比较差异均有统计学意义〔p-Src蛋白(p-Src/GAPDH):1.02±0.09比1.29±0.05,p-MAPK蛋白(p-MAPK/GAPDH):0.24±0.02比0.62±0.02,VE-cadherin蛋白(VE-cadherin/GAPDH):0.64±0.03比0.31±0.02,均P<0.01〕。结论芍药苷能够通过调节CMECs细胞中Src/VE-cadherin通路,抑制炎症相关蛋白及趋化因子的表达和分泌,改善LPS诱导的CMECs细胞通透性。
简介:摘要目的探讨迟发型鸟氨酸氨基甲酰转移酶缺乏症(ornithine transcarbamylase deficiency,OTCD)的临床特点,减少临床误诊率。方法分析我院收治的1例反复住院治疗的OTCD患儿各阶段的临床特点及转归。结果患儿以呕吐、嗜睡为主要症状,入院后反复检查血氨正常,颅脑影像学检查提示皮层及皮层下广泛异常信号(T2Flair稍高信号,DWI高信号),脑电图呈广泛低电压,有机酸气相质谱检测发现乳清酸及尿嘧啶异常增高,基因检测发现OTC基因的核苷酸碱基存在错义突变。结论OTCD患儿通常伴血氨升高,但临床中如有不明原因的呕吐、嗜睡症状,即使血氨正常也不能排除本病,应完善有机酸气相质谱及基因检测方法进一步明确诊断。
简介:摘要 目的 分析多烯磷脂酰胆碱联合二甲双胍治疗非酒精性脂肪肝的临床效果。方法 选取我院收治的非酒精性脂肪肝患者 80例作为此次的观察对象,选取时间为 2018年 2月至 2019年 2月间,并根据抽签法将其平均分成两组,其中接受多烯磷脂酰胆碱进行治疗的 40例设为参照组,在参照组基础上联合二甲双胍进行治疗的 40例设为实验组,分析这两组的治疗效果。结果 从治疗有效率上看,实验组明显优于参照组,对比差异明显( p<0.05);从肝功能指标水平上看,治疗前两组对比差异无统计学意义( p>0.05),治疗后两组对比差异显著,实验组明显优于参照组,对比差异具有统计学意义( p<0.05);从不良反应发生率上看,实验组明显低于参照组,对比差异明显( p<0.05)。结论 对非酒精性脂肪肝患者实施多烯磷脂酰胆碱联合二甲双胍进行治疗具有较高的应用价值,值得推广。
简介:摘要目的探讨黄芪甲苷对人内皮祖细胞(EPC)分泌外泌体及外泌体中微小RNA-126(miRNA-126)表达的影响。方法取湖南中医药大学第一附属医院妇产科2019年出生的1名足月健康新生儿脐带血,采用密度梯度离心法分离单个核细胞并培养7 d,其间行形态学观察;取第3代细胞,采用CD31免疫磁珠分选法和双荧光染色法鉴定。将鉴定成功的EPC按照随机数字表法分为黄芪甲苷组和磷酸盐缓冲液(PBS)组。黄芪甲苷组细胞加入终质量浓度100 mg/L的黄芪甲苷培养24 h,PBS组细胞加入等体积的PBS培养24 h。培养结束后收集2组细胞培养上清液中的外泌体,采用蛋白质印迹法检测外泌体特征性标志物CD9、CD63和CD81表达,于透射电子显微镜下观察EPC外泌体(EPC-Exo)形态,采用纳米颗粒跟踪分析技术检测EPC-Exo的粒径,采用二辛丁酸法测定EPC-Exo的浓度(样本数为3),采用反转录PCR法测定EPC-Exo中与血管新生相关miRNA-126-3p和miRNA-126-5p的表达(样本数为3)。对数据行独立样本t检验。结果(1)培养第4天,细胞开始贴壁生长,圆形、梭形、条形等多形态同时出现;继续培养至第7天时,细胞边缘清晰,呈铺路石样排列,中央细胞呈圆形,周边细胞呈梭形。(2)CD31免疫磁珠分选法显示细胞膜染绿色,细胞核染蓝色;双荧光染色法显示细胞呈橙黄色。经以上鉴定,细胞被证实为EPC。(3)培养24 h,2组EPC-Exo的CD9、CD63和CD81表达均呈阳性,证实本实验已成功提取EPC-Exo。(4)培养24 h,2组EPC-Exo均呈圆形膜囊泡,形态无明显差异。(5)培养24 h,黄芪甲苷组中98.7%的EPC-Exo粒径为84.7~143.1 nm,PBS组中98.0%的EPC-Exo粒径为88.7~123.5 nm。(6)培养24 h,黄芪甲苷组EPC-Exo的质量浓度为(310±5)μg/mL,明显高于PBS组的(257±5)μg/mL,t=13.369,P<0.01。(7)培养24 h,黄芪甲苷组EPC-Exo中miRNA-126-3p(t=16.062,P<0.01)和miRNA-126-5p(t=3.252,P<0.05)均明显多于PBS组。结论黄芪甲苷可改善人EPC分泌外泌体的功能,且所分泌的外泌体负载miRNA-126。
简介:【摘要】目的:探究使用雷公藤多苷联合甲氨蝶呤治疗类风湿性关节炎的临床疗效。方法:选取我院2019-2020年来我院治疗且符合指标的类风湿性关节炎患者160例,分组,实验组采用雷公藤多苷联合甲氨蝶呤治疗,对照组采用甲氨蝶呤单独治疗,记录两组患者的临床数据,实验室病理检查数据,不良反应,并进行有效率比较。结果:两药联合使用时无论是临床指标还是实验室病理检查治疗效果都比单独使用效果更好,总的有效率也更高,但是对于不良反应依旧是治疗效果有点欠缺。结论:雷公藤多苷联合甲氨蝶呤治疗类风湿性关节炎效果显著,值得临床推广。
简介:摘要1例主诉为“腹泻、呕吐伴体重增长不良1年”的患儿就诊于浙江大学医学院附属儿童医院消化内科,经基因检测提示二酰基甘油酰基转移酶1(DGAT1)基因存在2处杂合突变,c.676+1G>T,c.367_368delCT,分别来源于父亲和母亲,免疫组织化学示患儿十二指肠肠上皮细胞DGAT1蛋白的表达明显低于对照组,诊断为DGAT1基因缺陷。
简介:摘要:目的:建立HPLC测定法同时测定复方芩兰口服液口服液中黄芩苷、汉黄芩苷的含量。方法:采用高效液相色谱法,色谱柱为Waters Symmetry C18色谱柱( 150mm×4.6mm,5μm);流动相乙腈-0.05%磷酸为流动相;流速1.0mL.min-1;检测波长275nm,柱温30℃。结果:0.1~0.8mg.mL-1黄芩苷与峰面积的线性关系良好(r=0.9967)、1~10μg.mL-1汉黄芩苷与峰面积的线性关系良好(r=0.9994);黄芩苷平均加样回收率99.31%(RSD=0.44%),汉黄芩苷平均加样回收率95.32%(RSD=1.20%)。结论:该方法简便、准确,可同时测定复方芩兰口服液中的黄芩苷、汉黄芩苷的含量,可作为复方芩兰口服液提升质量标准的参考依据。