简介：无

简介：摘要目的观察CD5+CD19+B细胞在体外是否具有分泌IL-10的功能，并探讨其在HBV感染过程中对CD8+细胞的作用和机制。方法纳入2017年7月至2018年6月在南京医科大学附属无锡第二医院确诊的慢性乙型肝炎(乙肝组)23例、肝硬化(肝硬化组)18例患者，以及同期健康对照(健康对照组)19名。通过外周血单个核细胞(PBMC)分离、细胞培养、流式细胞术分析、CD5+CD19+B细胞分离等操作，比较3组CD5+CD19+B细胞含量较多(占淋巴细胞百分比>6%)的患者比例、CD5+CD19+B细胞分泌IL-10的情况和IL-10+细胞含量较多(占淋巴细胞百分比>4%)的患者比例，分析CD5+CD19+B细胞对CD8+细胞分泌γ干扰素的影响和可能机制。通过对慢性乙型肝炎13例和肝硬化5例患者行肝活组织和免疫组织化学检查，分析CD5+CD19+B细胞在人体肝组织中表达情况。统计学分析采用卡方检验和Fisher确切概率法。结果肝硬化组中CD5+CD19+B细胞含量较多的患者比例高于健康对照组(8/18比2/19)，差异有统计学意义(Fisher确切概率法，P＝0.029)。健康对照组(10名)、乙肝组(23例)、肝硬化组(18例)的CD5+CD19+B细胞分别占IL-10+细胞的81.6%、82.3%、70.1%，IL-10+细胞含量较多的患者分别为2、7和2例，3组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。在脂多糖刺激培养48 h后，健康对照组(10名)CD8+γ干扰素+细胞占淋巴细胞百分比与乙肝组(10例)、肝硬化组(10例)比较(10.73%比7.05%和9.52%)差异均无统计学意义(P均>0.05)；剔除CD5+CD19+B细胞后，健康对照组(10名)、乙肝组(10例)和肝硬化组(10例)中分别有5、4、4例患者CD8+γ干扰素+细胞占淋巴细胞百分比升高。添加IL-10受体阻滞剂后，PBMC中CD8+γ干扰素+占淋巴细胞百分比较添加IL-10受体阻滞剂前升高(7.23%比6.87%)。肝活组织标本免疫组织化学分析结果显示，CD4+和CD8+细胞在患者肝小叶汇管区强表达，CD5+和CD19+细胞较少表达。结论CD5+CD19+B细胞在HBV慢性感染的进展过程中并未体现出明显数量和功能上的差异，但对CD8+细胞分泌γ干扰素的能力具有抑制作用，并且可能是通过分泌IL-10而不是通过细胞间的直接接触实现。

简介：摘要目的探讨外周血CD4＋T细胞水平、CD4＋/CD8＋比值作为预测Ⅳ期非小细胞肺癌(NSCLC)放疗后生存指标的可能性，并构建Nomogram预测模型。方法回顾分析2011-2017年间经病理学确诊的初治682例NSCLC患者外周血疗前CD4＋T细胞、CD4＋/CD8＋比值水平对临床因素、生存的影响，并构建Nomogram预测模型。结合110例疗后免疫细胞水平变化验证预测预后的价值。计数结果采用t检验，Kaplan-Meier法计算生存率并log-rank检验和单因素分析，Cox模型多因素分析。结果单因素分析治疗前CD4＋>43.15%显著延长生存，多因素分析治疗前CD4＋>43.15%是延长生存的因素，并可构建Nomogram预测模型并验证与总生存有良好的相关性；CD4＋T细胞水平43.15%作为临界值均显示治疗前、治疗后、治疗前后高水平、联合CD4＋/CD8＋>1.65的生存延长。结论外周血治疗前CD4＋T细胞的基线水平是Ⅳ期NSCLC生存的预后因子，而外周血治疗前CD4＋/CD8＋比值预测预后的作用有限。

简介：【摘 要】目的：新冠肺炎患者细胞免疫指标 CD4+、 CD8+ T淋巴细胞与患者病情及预后的相关性。方法：将 11例新冠肺炎确诊患者按病情轻重分为轻型、普通型、重型和危重型 4个组，治疗前分别检测患者细胞免疫指标 CD4+、 CD8+ T淋巴细胞的绝对值，计算 CD4＋ /CD8＋的比值。结果：新冠肺炎患者细胞免疫指标 CD4+、 CD8+ T淋巴细胞含量及 CD4＋ /CD8＋的比值均低于健康者正常值，且随着病情加重而逐步减少。结论： CD4+、 CD8+ T淋巴细胞含量及 CD4＋ /CD8＋比值可以作为反映新冠肺炎患者机体免疫状况及疾病发展阶段的一个指标。

简介：摘要目的探讨类自然杀伤T细胞(NK-like T细胞)在胶质瘤患者外周血中的表达及其与临床的关系。方法以2017年9月至2018年9月郑州大学第一附属医院经临床和病理确诊的34例胶质瘤患者为实验组，以12例健康自愿者为实验对照组，密度梯度离心方法分别提取实验组和对照组3 ml外周血内单核细胞(PBMCs)，流式细胞分析外周血单核细胞(PBMCs)内CD3、CD45、CD16和CD56的表达情况，应用t检验分析比较NK-like T细胞占CD3＋和CD45＋细胞的比例在实验组和对照组中的差异，用Spearman相关分析分析外周CD3＋CD16＋NK-like T细胞在CD3＋和CD45＋细胞中比例和临床KPS评分的关系；用胞内染色流式细胞分析的方法，t检验分析实验组和对照组肿瘤坏死因子(TNF)-α＋细胞和γ-干扰素(IFN-γ)＋细胞占CD3＋CD16＋NK-like T细胞比例的差异。结果与对照组比较，实验组外周血中CD3＋CD16＋NK-like T细胞在CD3＋和CD45＋细胞中比例明显下降[(8.772±2.704)%比(22.07±3.071)%，t＝3.786，P<0.01；(3.027±1.033)%比(9.449±1.720)%，t＝3.498，P<0.01)]，并且CD3＋CD16＋细胞分泌细胞因子TNF-α和IFN-γ的能力(TNF-α＋细胞和IFN-γ＋细胞比例)明显下降[(42.24±4.12)%比(19.12±3.81)%，t＝3.125，P<0.01；(41.13±5.02)%比(20.85±3.93)%，t＝2.192，P<0.05)]；IFN-γ＋细胞和TNF-α＋细胞平均荧光强度下降明显(201.00±11.22比95.71±4.19，t＝3.483，P<0.01；147.25±6.39比87.45±3.66，t＝2.883，P<0.01)；CD3＋CD16＋ NK-like T细胞在CD3＋细胞或CD45＋细胞中比例和临床KPS评分明显相关(r＝0.186、0.207，P<0.05)。结论胶质瘤改变了外周血CD3＋CD16＋ NK-like T细胞的比例和功能，CD3＋CD16＋ NK-like T细胞参与了胶质瘤的病理生理过程。

简介：摘要目的研究甲型流感病毒（IAV）感染者外周血中CD160+CD8+ T淋巴细胞亚群的特征。方法收集2018年12月至2019年3月流感季就诊于北京大学地坛医院教学医院感染二科IAV感染者共37例及同期体检的健康对照者51例，应用多色流式细胞检测平台，检测外周血不同分化阶段CD160+CD8+ T淋巴细胞的比例。结果与健康对照相比，IAV感染者外周血T细胞中CD160+CD8+ T细胞比例下降[24.50%（14.70%，44.10%）vs. 8.85%（5.14%，18.15%）]，差异有统计学意义（U = 326.00、P < 0.001）。IAV感染者与健康对照相比，其CD8+ T中初始T细胞（TN）[3.88%（1.28%，9.48%） vs. 0.22%（0.12%，0.60%）]、中央记忆性T细胞（TCM）[8.70%（4.43%，15.80%） vs. 1.51%（0.69%，2.54%）]、效应记忆性T细胞（TEM）[22.30%（13.80%，30.40%） vs. 7.71%（5.23%，16.25%）]和终末效应记忆T细胞（TEMRA）[（46.99 ± 22.91）% vs. （21.60 ± 13.38）%]4个亚群中CD160+细胞的比例均下降，差异有统计学意义（U = 238.50、81.50、412.00，t = 6.03；P均< 0.001）。IAV感染者出院时较入院时CD160+CD8+ T细胞比例上升[（8.92 ± 7.84）% vs. （16.40 ± 9.43）%]（t = 4.09、P = 0.001），但仍低于正常水平[24.50%（14.70%，44.10%） vs. （16.40 ± 9.43）%]，差异有统计学意义（U = 209.50、P = 0.0029）。结论甲型流感病毒感染者外周血中T淋巴细胞CD160+CD8+ T细胞亚群比例显著降低，可能是免疫失衡的重要表现。

简介：摘要目的探讨CD40-CD40配体（CD40L）交联系统在矽肺纤维化形成中的作用。方法选取2016至2018年在浙江省中西医结合医院职业病科门诊及住院收治的患者共64例，根据病例诊断将其分为矽肺组、对照组，每组各32人。收集两组患者肺泡灌洗液（BALF），用流式细胞术检测T淋巴细胞表面CD40L蛋白表达的水平；用ELISA法测定BALF中白细胞介素（IL-8、IL-6）、干扰素（INF-γ）和单核细胞趋化蛋白（MCP-1）的含量。将两组BALF与人胚肺成纤维细胞系HFL-1细胞共培养，用免疫印迹试验（Western Blot）法检测I型胶原蛋白（Collagen I）的表达水平；用免疫荧光法检测α-平滑肌动蛋白（α-SMA）的表达情况。结果与对照组BALF分离得到的T淋巴细胞比较，矽肺组BALF分离得到的T淋巴细胞表面CD40L的表达明显升高，差异有统计学意义（P<0.05）。与对照组比较，矽肺组BALF中IL-8、IL-6、INF-γ、MCP-1的含量均明显升高，差异有统计学意义（P<0.05）。与对照组BALF加入培养基培养HFL-1细胞比较，矽肺组肺泡灌洗液加入培养基培养HFL-1细胞的Collagen I蛋白表达量、α-SMA荧光表达均明显升高，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论CD40-CD40L交联系统可促进T细胞活化，释放炎症因子，促进成纤维细胞合成Collagen I和α-SMA，使肺纤维组织增生，导致矽肺纤维化的形成。

简介：摘要目的探讨腹茧症的临床特点、诊断及治疗方法。方法回顾性分析2001年1月至2019年1月湖南省邵阳市中心医院收治的26例腹茧症患者的临床资料。结果26例患者均通过剖腹探查或腹腔镜探查确诊为腹茧症，并将腹茧症分为2型：Ⅰ型(18例，69%)茧膜较薄，没有形成第2腹腔；Ⅱ型(8例，31%)茧膜较厚，有第2腹腔形成。20例(Ⅰ型12例，Ⅱ型8例)行全部或部分茧膜剥除、粘连松解，6例(均为Ⅰ型)术中未予处理茧膜。26例患者均痊愈出院。结论腹茧症可以分为2种类型，对Ⅱ型及临床症状较重的Ⅰ型需手术切除茧膜，症状较轻的部分Ⅰ型腹茧症可采取保守治疗。

简介：摘要目的探讨外阴硬化性苔藓（VLS）患者外阴组织Foxp3表达及外周血CD4+CD25+CD127low调节性T淋巴细胞（Treg）数量的变化及意义。方法选取2016年8月至2018年12月新疆医科大学第五附属医院确诊的VLS患者15例（VLS组，并根据外阴活检部位分为皮损组和皮损旁组），选择同期外阴修复手术者10例（外阴对照组）和健康体检者15例（外周血对照组）分别作为外阴组织和外周血的相应对照。亚硫酸氢钠基因测序法检测外阴组织Foxp3基因启动子区的甲基化率，蛋白印迹法检测外阴组织Foxp3、DNMT1、DNMT3b蛋白的表达水平，并分析各组蛋白的表达水平与甲基化率的相关性。流式细胞仪检测外周血CD4+CD25+CD127low Treg数量。结果与外阴对照组比较，Foxp3蛋白的表达水平皮损组和皮损旁组均显著下降（分别为0.58±0.05、0.32±0.05、0.42±0.06；P<0.05）；DNMT1和DNMT3b蛋白的表达水平皮损组显著升高（分别为0.52±0.10、0.39±0.04；P<0.05）。3组Foxp3基因启动子区的总甲基化率无差异（P>0.05）；10个CpG位点中，CpG1（皮损旁组）、CpG9（皮损组）、CpG4及CpG10（皮损旁组和皮损组）甲基化率均高于外阴对照组（P<0.05）。VLS组患者10个CpG位点的甲基化率与Foxp3、DNMT1蛋白的表达水平无关（P>0.05）；皮损组、皮损旁组Foxp3与DNMT1蛋白的表达水平均有相关性（r＝0.375， P＝0.032； r＝－0.665， P＝0.007），而与DNMT3b蛋白的表达水平无相关（P>0.05）。VLS组患者外周血CD4+CD25+CD127low Treg数量明显下降［VLS组和外周血对照组分别为（6.8±1.5)%、(8.3±1.7)%；P<0.05］。结论VLS患者外阴组织Foxp3低表达所致外阴局部Treg数量减少或抑制功能异常，可导致VLS发生，这可能有部分甲基化的因素，可能与DNMT1表达上调有关。外周血CD4+CD25+CD127low Treg数量下降可能是VLS的发病原因之一。

简介：摘要目的探讨类风湿关节炎（RA）患者外周血中CD8+CD25+T细胞的比例变化及其临床意义。方法收集2018年5—10月在北京大学人民医院住院的RA患者外周血38例和健康人外周血20名，并记录RA患者的各项临床表现和实验室指标[红细胞沉降率（ESR）、C反应蛋白（CRP）、环瓜氨酸抗体（CCP）]，分离提取外周血中的淋巴细胞，利用流式细胞技术检测外周血中CD8+CD25+T细胞亚群的百分比，运用软件SPSS 22.0和GraphPadPrism 6分析其与实验室指标的相关关系及临床意义。结果RA患者外周血CD8+CD25+T细胞表达明显高于健康对照组（P<0.05）；RA患者外周血CD8+CD25+T细胞与ESR（r=0.352，P=0.030）、CCP（r=0.312，P=0.047）、DAS28（r=0.330，P=0.043）呈现明显正相关（P<0.05），和C3（r=-0.354，P=0.046）、C4（r=-0.440，P=0.010）呈明显负相关（P<0.05），和其他实验室指标无明显相关；在RA患者中CD8+CD25+T细胞在低疾病活动组和高疾病活动组之间差异有统计学意义（P<0.05），在低疾病活动组和中疾病活动组之间、中疾病活动组和高疾病活动组之间差异均无统计学意义。结论RA患者外周血中CD8+CD25+T细胞升高，与实验室指标和疾病活动度明显相关，其可能在类风湿关节炎的发病过程中起重要作用。

简介：摘要目的了解高效抗逆转录病毒治疗(highly active antiretroviral therapy，HAART)后HIV/AIDS患者T淋巴细胞免疫活化及CD4＋CD45RA＋ T细胞的亚群变化，探讨抗病毒治疗对HIV感染者免疫恢复的影响。方法前瞻性分析105例接受HARRT治疗的HIV/AIDS患者，流式细胞仪检测治疗前和治疗后1、3、6及12个月T淋巴细胞活化水平(CD38、HLA-DR的表达)及CD4＋CD45RA＋ T淋巴细胞；同时选取未暴露且HIV-1抗体检测阴性者35名作为健康对照。结果HAART治疗前HIV/AIDS患者T淋巴细胞活化水平显著高于健康对照(P<0.01)，HAART治疗后随治疗时间延长活化水平明显下降，治疗1个月时CD4＋CD38＋ HLA-DR＋及CD8＋CD38＋ 、CD8＋ HLA-DR＋ T淋巴细胞首先出现降低，治疗6个月时包含CD8＋CD38＋HLA-DR＋ T在内的4项活化指标均明显下降，差异有统计学意义(P<0.01)；治疗12个月与6个月相比，CD8＋CD38＋HLA-DR＋ T表达水平继续降低(P<0.01)，而其余3项活化指标差异无统计学意义。但HAART治疗12个月后，4项活化指标仍全部高于健康对照组(P<0.01)。CD4＋CD45RA＋ T淋巴细胞百分比在治疗前及治疗后12个月均明显低于健康对照组。结论HIV/AIDS患者在HAART治疗后6个月免疫活化水平降低，但HAART并不能使免疫活化逆转；HAART治疗也不能恢复HIV感染后降低的CD4＋CD45RA＋ T淋巴细胞的水平。

简介：摘要目的探讨骨髓增生异常综合征(myelodysplastie syndrome，MDS)-难治性贫血(refractory anemia，RA)及难治性血细胞减少伴有多系发育异常(refractory cytopenia with multiple dysplasia，RCMD)患者CD4＋CD25＋FOXP3＋Treg细胞与白细胞介素(interleukin，IL)-10表达水平，评估环孢素对MDS患者CD4＋CD25＋FOXP3 ＋Treg细胞的影响。方法选择2016年1月至2018年1月于新疆维吾尔自治区人民医院25例MDS-RA及RCMD患者(MDS组)和13名健康对照(健康对照组)，采用流式细胞术及酶联免疫吸附试验检测外周血标本CD4＋CD25＋FOXP3＋Treg与IL-10表达水平，检测MDS-RA及RCMD患者在应用以环孢素为基础的免疫抑制方案治疗前、治疗6个月后及MDS组治疗有效及无效的CD4＋CD25＋FOXP3＋Treg与IL-10的表达情况。结果全部25例患者中，13例(52%)有效，12例(48%)无效。MDS组CD4＋CD25＋FOXP3＋ Treg占CD4＋T细胞比例显著高于健康对照组[(0.37±0.10)%与(0.12±0.06)%，t＝2.02，P<0.001]。MDS组IL-10水平显著高于健康对照组[(7.16±1.27) μg/L与(2.75±1.06 ) μg/L ，t＝2.03，P<0.001]。MDS治疗有效组CD4＋CD25＋FOXP3＋Treg细胞比例低于无效组[(0.15±0.06)%与(0.26±0.08)%，t＝1.71，P<0.001]，有效组IL-10水平低于无效组[(3.22±1.01) μg/L与(4.25±1.22) μg/L ，t＝2.06，P＝ 0.030]。25例MDS患者外周血CD4＋CD25＋FOXP3＋Treg比例与IL-10表达水平呈正相关关系(r＝0.35，P＝ 0.02)。结论MDS患者存在CD4＋CD25＋FOXP3＋Treg细胞与IL-10的表达升高，环孢素治疗后降低。

简介：AbstractBackground:Natural killer (NK) cells play a critical role in suppressing human immunodeficiency virus-1 (HIV-1) infection, but knowledge on whether and how NK cells affect immune reconstitution in HIV-1-infected individuals who receive antiretroviral therapy (ART) is limited.Methods:We performed a case-control study with 35 healthy individuals and 66 HIV-1-infected patients including 32 immunological non-responders (INRs) with poor CD4+ T-cell recovery (<500 cells/μL after 4 years of ART) and 34 immunological responders (IRs) with improved CD4+ T-cell recovery (>500 cells/μL after 4 years of ART). NK cell phenotype, receptor repertoire, and early activation in INRs and IRs were investigated by flow cytometry.Results:A significantly higher proportion of CD56dimCD16dim/- NK cells was observed in INRs than IRs before ART and after 4 years of ART. The number of CD56dimCD16dim/- NK cells was inversely correlated with CD4+ T-cell counts in INRs before ART (r = -0.344, P = 0.050). The more CD69-expressing NK cells there were, the lower the CD4+ T-cell counts and ΔCD4, and these correlations were observed in INRs after ART (r = -0.416, P = 0.019; r = -0.509, P = 0.003, respectively). Additionally, CD69-expressing CD56dimCD16dim/- NK cells were more abundant in INRs than those in IRs (P = 0.018) after ART, both of which had an inverse association trend towards significance with CD4+ T-cell counts. The expression of the activating receptors NKG2C, NKG2D, and NKp46 on CD56dimCD16dim/- NK cell subsets were higher in IRs than that in INRs after 4 years of ART (all P < 0.01). Strong inverse correlations were observed between CD69 expression and NKG2C, NKG2A-NKG2C+, NKG2D, and NKp46 expression on CD56dimCD16dim/- NK cells in INRs after ART (NKG2C: r = -0.491, P = 0.004; NKG2A-NKG2C+: r = -0.434, P = 0.013; NKG2D: r = -0.405, P = 0.021; NKp46: r = -0.457, P = 0.008, respectively).Conclusions:INRs had a larger number of CD56dimCD16dim/ - NK cells characterized by higher activation levels than did IRs after ART. The increase in the CD56dimCD16dim/- NK cell subset may play an adverse role in immune reconstitution. Further functional studies of CD56dimCD16dim/- NK cells in INRs are urgently needed to inform targeted interventions to optimize immune recovery.

简介：【摘要】：目的：回顾性分析 26例剖宫产产妇产后出血的原因及采用针对性护理模式进行护理的临床效果。 方法：纳入剖宫产产妇26例为研究对象，产妇就诊时间 2019年 1月至 2020年 1月。均采用针对性护理。 回顾性分析26例剖宫产产妇产后出血的原因、临床治愈率。 结果：26例剖宫产产妇中，子宫收缩乏力导致产后出血者 14例，占比 53.85%，明显高于胎盘因素导致产后出血和凝血功能障碍导致产后出血（ p<0.05）； 26例剖宫产产后出血产妇中，临床治愈 25例，临床治愈率 96.15%，明显高于无效率（ p<0.05）。结论 :剖宫产产妇产后出血的原因主要包括子宫收缩乏力、胎盘因素及凝血功能障碍，经过针对性护理模式进行护理的临床效果显著，值得在临床上推广应用。

简介：摘要：本文利自动气象站观测资料、NCEP 再分析资料等相关资料对绥德县2017年7月26日出现的一次暴雨天气成因进行分析。结果表明：此次暴雨天气是在副热带高压西北变暖湿气流和高原槽朝东边移动过程中给予的动力条件的共同影响下造成的。与此同时，地面形势主要呈“东高西低”特征，冷暖气流共同在绥德县汇集，促使大气的斜压性不断增强，推动了此次暴雨天气的发生发展。此次暴雨天气过程中，水汽条件、动力条件以及不稳定能量条件均较好，这些是导致此次暴雨天气发生的关键物理量因子。

简介：摘要回顾性分析我院26例区域性门静脉高压症（RPH）患者的临床资料，总结该病的临床特点及诊治经验。其中21例表现为孤立性的胃底静脉曲张；有20例以消化道出血为首发症状。导致RPH的原发疾病中，胰源性疾病21例，非胰源性疾病5例。RPH临床表现具有多样性，对于单纯临床表现不足的患者，可选择辅助检查加以诊断，在治疗上，应该遵循个体化的原则。

简介：摘要目的了解山东省HIV /AIDS接受抗病毒治疗后CD4＋/CD8＋比值变化情况及相关影响因素。方法回顾性收集山东省2010—2015年首次接受抗病毒治疗、年龄≥15周岁HIV/AIDS的基线及治疗后6个月、1年、2年、3年、4年和5年时的CD4＋、CD8＋T淋巴细胞计数等随防资料，采用秩和检验和广义估计方程(GEE)描述和分析不同治疗时间的CD4＋/CD8＋比值变化情况及相关影响因素。结果共纳入研究对象557例，基线CD4＋/CD8＋比值中位数0.20，99.82%患者的CD4＋/CD8＋比值发生倒置；CD4＋/CD8＋比值>1的患者所占比例基线为0.18%，经治疗5年后上升至13.11%，时间变化趋势有统计学意义(χ2＝95.01，P<0.05)。多因素广义估计方程分析结果显示，基线CD4＋T淋巴细胞计数水平和基线症状/体征情况是影响CD4＋/CD8＋比值变化的主要影响因素。结论山东省HIV/AIDS抗病毒治疗5年后CD4＋/CD8＋比值明显提升，患者治疗基线CD4细胞水平和基线症状/体征情况是影响CD4＋/CD8＋比值恢复的主要影响因素。

简介：摘要目的探讨轴突导向因子3A（Sema3A）对脂多糖（LPS）诱导的CD4+CD25+调节性T细胞（Tregs）稳定性的作用及机制。方法采用体外免疫磁珠法分离和培养C57BL/6J小鼠脾脏CD4+CD25+ Tregs，将分离的细胞按随机数字表法分为对照组（仅给予抗小鼠CD3e和CD28诱导细胞处于激活状态）、LPS组（在对照组的基础上给予LPS 100 μg/L）、LPS+核转录因子-κB（NF-κB）抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸酯（PDTC）组（给予LPS 100 μg/L+PDTC 25 mg/L）、LPS+磷酸盐缓冲液（PBS）组（给予LPS 100 μg/L+PBS 10 μL）、LPS+PDTC+重组Sema3A（rSema3A）组（给予LPS 100 μg/L+PDTC 25 mg/L+rSema3A 300 μg/L）和LPS+PBS+rSema3A组（给予LPS 100 μg/L+PBS 10 μL+rSema3A 300 μg/L）。各组培养24 h后，采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫荧光法检测CD4+CD25+ Tregs特异性标志物叉头翼状转录因子-3（Foxp-3）、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4（CTLA-4）和膜相关转化型生长因子-β1（TGF-β1m+）的基因及蛋白表达，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞上清液中白细胞介素-10（IL-10）和分泌型转化生长因子-β1（sTGF-β1）的水平，采用免疫荧光法检测细胞凋亡，采用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测Foxp-3-Tregs特异性去甲基化区（Foxp-3-TSDR）的去甲基化程度，以反映CD4+CD25+ Tregs的稳定性，采用电泳迁移率分析（EMSA）检测NF-κB信号通路的DNA结合活性，采用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测NF-κB信号通路活性。结果与对照组比较，LPS能够增加细胞稳定性，表现为Foxp-3、CTLA-4和TGF-β1m+的基因及蛋白表达上调，IL-10和sTGF-β1分泌增加，细胞凋亡减少，Foxp-3-TSDR去甲基化程度增加；同时LPS可增加细胞内NF-κB信号通路的DNA结合活性，以及主要分子NF-κB抑制蛋白激酶β（IKKβ）和p65的磷酸化水平，说明LPS增加细胞稳定性的机制与NF-κB信号通路有关。与LPS组比较，PBS并未对细胞稳定性和NF-κB信号通路产生影响；但添加rSema3A后能进一步增加细胞稳定性，并激活NF-κB信号通路。而PDTC能够抑制rSema3A增加细胞稳定性的功能，表现为：与LPS+PBS+rSema3A组比较，LPS+PDTC+rSema3A组Foxp-3、CTLA-4和TGF-β1m+的基因及蛋白表达明显下调〔Foxp-3基因（2-ΔΔCt）：8.092±1.117比18.509±1.068，Foxp-3蛋白（相对荧光强度）：1.224±0.033比1.826±0.181；CTLA-4基因（2-ΔΔCt）：3.254±0.760比11.840±0.827，CTLA-4蛋白（相对荧光强度）：1.305±0.058比1.842±0.111；TGF-β1m+基因（2-ΔΔCt）：3.589±1.180比8.509±0.472，TGF-β1m+蛋白（相对荧光强度）：1.319±0.033比1.822±0.063，均P<0.01〕，IL-10和sTGF-β1分泌减少〔IL-10（ng/L）：445.33±54.08比992.67±83.10，sTGF-β1（ng/L）：1 116.67±65.25比1 494.67±94.45，均P<0.01〕，细胞凋亡明显增加（荧光强度：0.398±0.031比0.268±0.046，P<0.01），Foxp-3-TSDR去甲基化程度明显降低（灰度值：0.467±0.048比1.780±0.119，P<0.01），NF-κB信号通路的DNA结合活性被明显抑制（灰度值：1.23±0.02比3.95±0.06，P<0.01），IKKβ和p65的磷酸化水平降低〔p-IKKβ表达（p-IKKβ/IKKβ）：0.97±0.07比1.97±0.04，p-p65（p-p65/p65）：0.95±0.08比1.93±0.06，均P<0.01〕。结论LPS能通过NF-κB信号通路增加CD4+CD25+ Tregs稳定性；Sema3A能够进一步增加CD4+CD25+ Tregs稳定性，并且与NF-κB信号通路有关。

简介：

简介：摘要目的评价初次手术术后残留及单纯手术后复发纤维肉瘤患儿的远期疗效及预后相关因素。方法回顾性研究，研究对象为2004年4月至2019年2月上海儿童医学中心收治的26例术后残留或复发纤维肉瘤患儿，接受上海儿童医学中心横纹肌肉瘤1999（SCMC-RS-99）方案及适时肿瘤根治性切除术，化疗前根据手术及影像学检查将疾病状态分为首诊术后残留组（简称残留组）、单纯手术后复发再治疗组（简称复发组），总结患儿临床特点及远期随访结果，采用Kaplan-Meier生存分析评估生存率，应用Log-Rank检验及COX比例风险模型对年龄（<3岁或3~18岁）、性别、肿瘤原发部位、术后分期、疾病状态、ETS变体6（ETV6）基因、化疗方案进行单因素及多因素预后分析。结果26例纤维肉瘤患儿中男13例，女13例；残留组17例，复发组9例。随访至2019年12月31日，随访时间73（10~188）个月，5年总体生存（OS）率为（86±7）%，5年无事件生存（EFS）率为（77±9）%。单因素分析显示，残留组5年EFS优于复发组，差异有统计学意义[（94±5）%比（63±16）%，χ2=5.106，P=0.024]；<3岁的患儿5年EFS明显高于3~18岁患儿，差异有统计学意义[（94±5）%比（62±17）%，χ2=6.507，P=0.011]。性别（χ2=0.445）、肿瘤原发部位（χ2=0.258）、术后分期（χ2=3.046）、ETV6基因（χ2=1.496）、化疗中是否含阿霉素药物（χ2=1.692）与EFS均无明显相关性（P均>0.05）。将年龄、术后分期、疾病状态纳入COX比例风险模型进行分析发现年龄>3岁（HR=8.95，95%CI 0.73~109.50，P=0.086）、单纯手术后复发再治疗（HR=10.60，95%CI 0.84~134.30，P=0.068）、Ⅲ~Ⅳ期（HR=16.50，95%CI 0.84~321.40，P=0.065）对EFS影响差异无统计学意义。结论首次术后残留或术后复发再治疗的纤维肉瘤患儿仍有较好的缓解率及长期生存，尤其小年龄非复发患儿具有明显的生存优势。