简介:摘要目的对多重实时定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)进行反应体系筛选和方法探索,使其用于G1—G4型轮状病毒VP7基因的快速分型和定量分析。方法设计G1—G4型轮状病毒VP7基因特异性引物和探针,以特异性体外转录RNA为模板,筛选多重qPCR反应体系,建立多重qPCR方法。采用单因素方差分析和配对样本t检验对多重与单重qPCR检测结果进行比较。结果经筛选,得到6组三重qPCR反应体系和1组四重qPCR反应体系。所建立的三重和四重qPCR中,除四重qPCR的G1型参数〔标准曲线决定系数(R2)为0.982、扩增效率为89.221%〕略低于要求外,其余标准曲线R2均>0.99,扩增效率均在90%至110%之间;检测灵敏度达102拷贝/μl。多重与单重qPCR检测同一样本的相关性较好(R2>0.95)。三重与单重qPCR(t值为1.420~25.786)、四重与单重qPCR(t值为2.505~4.851)检测结果间的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。结论建立的多重qPCR可同时对3种以上目的基因进行分型和定量检测,为未来多价轮状病毒疫苗及混合病毒样本中毒株的快速分型和定量检测方法的建立提供了借鉴。
简介:摘要免疫球蛋白(Ig)G4相关疾病(IgG4-RD)是一类由免疫系统介导的、可累及全身多器官的系统性疾病,常累及胰腺、涎腺、泪腺、胆道、腹膜后和淋巴结等。IgG4-RD与多种疾病的临床表现相似,但其治疗方案和临床预后不同,因此正确诊断IgG4-RD十分重要。继2011年日本IgG4-RD综合标准之后,2019年ACR和EULAR联合提出了IgG4-RD分类诊断标准,该标准基于临床表现、血清学、影像学和组织病理学证据4个方面进行综合评分,具有较高的特异性;而在2020年,日本学者对2011年IgG4-RD综合标准进行了修订,进一步提升了其临床实用性。治疗方面,2015年IgG4-RD管理和治疗的国际指南共识指出,糖皮质激素为多数患者的一线治疗方案,免疫抑制剂可与激素联用以提高疗效并减少复发,生物制剂可用于复发性或难治性IgG4-RD的治疗。以利妥昔单抗为代表的生物制剂在IgG4-RD中展现出良好的治疗前景,拓宽了IgG4-RD的用药方案。
简介:摘要目的探讨如何提高全自动血液分离机(G4)制备的洗涤红细胞(MAP)的质量,确保输血安全。方法用G4制备洗涤红细胞(MAP),并从原料血的制备与选择、接驳点的位置、上机的操作方法、洗涤次数、乳糜血的制备等几个方面就如何提高洗涤红细胞(MAP)的质量进行探讨。结果保持冷链制备优质的原料血,选用保存期﹤14d的库存血,选择合适的接驳点,正确掌握上机操作手法,选择合适的洗涤次数,提高乳糜血液的洗涤质量,洗涤红细胞(MAP)质量得到提高。结论以上方法是提高G4制备洗涤红细胞(MAP)的关键控制环节。
简介:摘要目的建立一种快速定量检测免疫球蛋白G4(IgG4)的荧光免疫层析方法,并分析其临床应用价值。方法将免疫层析法与荧光定量技术相结合,采用竞争法反应模式制备试剂盒,建立定量检测IgG4的荧光免疫层析法。评估该法的线性、精密度、准确度、抗干扰能力及稳定性,并与免疫散射比浊法进行对比。绘制受试者工作特征曲线(ROC),计算曲线下面积(AUC),明确诊断胰腺炎相关疾病的临界值,计算灵敏度和特异度。结果荧光免疫层析法测定IgG4的线性范围为0.2~10.0 g/L,精密度变异系数<15%,准确度偏差在±15%以内;胆红素(2.5 g/L)、三酰甘油(10 g/L)、血红蛋白(10 g/L)对定量测定无明显干扰;14个月内检测浓度为1.20、2.65 g/L IgG4标准品的浓度偏差在±15%以内,试剂盒有效期>12个月。采用荧光免疫层析法检测200例健康人血清样本,IgG4正常参考值为<2.03 g/L;采用荧光免疫层析法与免疫散射比浊法检测383例临床血清样本中的IgG4浓度,结果表明两种方法具有一致性(P>0.05);通过ROC曲线分析,以IgG4 2.01 g/L为临界值,荧光免疫层析法诊断胰腺炎相关疾病的灵敏度为96.3%,特异度为95.5%。结论荧光免疫层析法可简单、快速、准确地定量检测IgG4,诊断胰腺炎相关疾病的灵敏度和特异度高,适用于门急诊批量样本的定量检测。
简介:摘要免疫球蛋白(Ig)G4相关疾病是一种免疫介导的累及多个器官的慢性纤维炎性疾病。IgG4相关肝胆胰疾病是IgG4相关疾病在肝胆胰系统中的表现,以血清IgG4滴度升高、病变组织中大量IgG4阳性浆细胞浸润、组织纤维化、影像学器官形态改变等为主要特点,因缺乏可靠的生物标志物,组织病理学仍是诊断的重要依据。IgG4相关肝胆胰疾病发病机制尚未完全明确,现重点报道IgG4相关肝胆胰疾病近年来在肠道微生态-免疫学、宿主遗传-免疫及复发监测领域的进展。