简介:摘要目的构建肝脏及淋巴结窦内皮细胞C型凝集素糖基识别结构域(LSECtin-CRD)双半胱氨酸(Cys)突变体原核表达载体,获得LSECtin-CRD突变体蛋白,并鉴定其生物学活性。方法基于LSECtin-CRD的三维结构模型选择突变位点;通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)对LSECtin-CRD基因引入Cys点突变,构建pET28b-Tat-LSECtin-CRD突变体载体;IPTG诱导可溶性表达LSECtin-CRD突变体蛋白,SDS-PAGE鉴定蛋白质表达水平;亲和层析方法对突变体蛋白进行纯化;通过检测突变体蛋白的甘露糖和GlcNAc结合能力鉴定其生物活性。结果菌液PCR和测序结果表明LSECtin-CRD双Cys突变体G205C-A227C和G205C-D279C原核表达载体构建成功,SDS-PAGE结果显示两个突变体蛋白均实现高效可溶性表达,单糖结合试验结果显示两个突变体蛋白均具有良好的生物学活性。结论本研究获得了具有生物学活性的LSECtin-CRD双Cys突变体蛋白,为进一步研究LSECtin-CRD结构和功能关系提供实验依据。
简介:摘要:在地铁区间施工中,受地质条件和地下环境影响,往往无法进行明挖施工,在这种情况下通常采用暗挖施工。浅埋暗挖法采用在地下暗挖施工,避免了地面拆迁,地面围挡范围小因而对路面交通的影响较小,被广泛应用。但由于浅埋暗挖法破坏了原有的平衡状况,待初支完成后土体通过建立新的平衡并过渡到稳定状态。而在此过程中,在土体荷载和路面附加荷载作用下,混凝土结构与土体会产生向下运动,结构达到设计强度前甚至出现剧烈的下沉与崩塌。上述问题将严重影响交通安全,并造成恶劣的社会环境影响。正是基于此原因,本章对CRD法施工导致地表沉降的原因以及控制技术展开了探讨,并通过研究其影响,提出了具体的控制策略,为CRD法施工的进展创造了必要的前提条件。