简介：摘要目的探讨咪达唑仑对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖及凋亡的影响及作用机制。方法将MDA-MB-231细胞按照随机数字表法分为对照组（A组），咪达唑仑10、30、50 mg/L浓度组（分别为B组、C组、D组），干扰微RNA-98-5p (microRNA-98-5p, miR-98-5p）表达+50 mg/L咪达唑仑处理组（E组），干扰miR-98-5p表达阴性对照+50 mg/L咪达唑仑处理组（F组），miR-98-5p过表达阴性对照组（G组）及miR-98-5p过表达组（H组），每组设置6个复孔。四甲基偶氮唑盐（methyl thiazolyl tetrazolium, MTT）法检测MDA-MB-231细胞存活率，流式细胞术检测细胞周期与细胞凋亡率，实时荧光定量PCR （real-time fluorescent quantitative PCR, RT-qPCR）法检测各组MDA-MB-231细胞中miR-98-5p表达情况，Western blot法检测MDA-MB-231细胞周期蛋白（Cyclin Dl）、B淋巴细胞瘤-2 (B cell lymphoma-2, Bcl-2）、半胱氨酸蛋白酶-3 (cysteine protease-3, caspase-3）蛋白水平。结果与A组比较，B组、C组、D组MDA-MB-231细胞存活率、S期及G2/M期细胞比例、Cyclin Dl蛋白水平、Bcl-2蛋白水平明显降低（P<0.05），B组、C组、D组MDA-MB-231细胞miR-98-5p相对表达量、G0/G1期细胞比例、细胞凋亡率、caspase-3蛋白水平明显升高（P<0.05）。与B组比较，C组、D组细胞存活率、S期及G2/M期细胞比例、Cyclin Dl蛋白水平、Bcl-2蛋白水平明显降低（P<0.05），miR-98-5p相对表达量、G0/G1期细胞比例、细胞凋亡率、caspase-3蛋白水平明显升高（P<0.05）。与C组比较，D组细胞存活率、S期及G2/M期细胞比例、Cyclin Dl蛋白水平、Bcl-2蛋白水平明显降低（P<0.05），miR-98-5p相对表达量、G0/G1期细胞比例、细胞凋亡率、caspase-3蛋白水平明显升高（P<0.05）。与D组比较，E组细胞存活率、S期及G2/M期细胞比例、Cyclin Dl蛋白水平、Bcl-2蛋白水平明显升高（P<0.05），miR-98-5p相对表达量、G0/G1期细胞比例、细胞凋亡率、caspase-3蛋白水平明显降低（P<0.05）。F组与D组miR-98-5p相对表达量、G0/G1期和S期细胞比例、细胞存活率、细胞凋亡率、Cyclin Dl蛋白水平、Bcl-2蛋白水平、caspase-3蛋白水平差异无统计学意义（P>0.05），F组G2/M期细胞比例低于D组（P<0.05）。A组与G组细胞存活率、细胞凋亡率、细胞周期分布及Cyclin Dl、Bcl-2、caspase-3蛋白水平差异无统计学意义（P>0.05）。与G组比较，H组细胞存活率、S期及G2/M期细胞比例、Cyclin Dl蛋白水平、Bcl-2蛋白水平明显降低（P<0.05），细胞凋亡率、G0/G1期细胞比例及caspase-3蛋白水平明显升高（P<0.05）。结论咪达唑仑通过上调miR-98-5p表达进而抑制乳腺癌细胞增殖，促进其凋亡。

简介：摘要目的探讨丹参酮ⅡA磺酸钠(STS)能否通过SIRT1/p53途径抑制炎症反应，从而延缓脓毒性肾损伤的发生。方法将人肾小管上皮细胞(HK-2)体外培养，随机分为对照组、脂多糖(LPS)组、STS组(LPS+STS)、SIRT1抑制剂(EX-527)组(EX-527+STS+LPS)。对照组加入等量PBS；LPS组给予1 mg/L LPS干预12 h；STS组给予30 μmol/L STS预处理2 h后，加入1.0 mg/L LPS干预12 h；EX-527组在25 μmol/L EX-527预处理2 h后，加入LPS 1.0 mg/L和STS 30 μmol/L干预12 h。采用CCK-8检测细胞的增殖活性；采用酶联免疫吸附法检测HK-2细胞上清液中的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、内二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的表达量；采用免疫印迹法(Western-blot)检测SIRT1、p-p53蛋白表达量；采用实时荧光定量PCR检测SIRT1、p-p53 mRNA表达量。结果与对照组相比，LPS组的HK-2细胞增殖活性显著下降(P<0.01)。LPS组的TNF-α、IL-6水平高于对照组，STS组的TNF-α、IL-6水平低于LPS组，EX-527组的TNF-α、IL-6水平高于STS组，但低于LPS组，差异均有统计学意义(均P<0.01)；LPS组的MDA水平高于对照组，STS组的MDA水平低于LPS组，EX-527组的MDA水平高于STS组，低于LPS组，差异均有统计学意义(均P<0.01)；LPS组的SOD水平低于对照组，STS组的SOD水平高于LPS组，EX-527组的SOD水平高于STS组和LPS组，差异均有统计学意义(均P<0.01)。LPS组的SIRT1蛋白表达量低于对照组，p-p53蛋白表达量高于对照组，差异均有统计学意义(均P<0.05)；STS组的SIRT1蛋白表达量高于LPS组，而p-p53蛋白表达量低于LPS组，差异均有统计学意义(均P<0.05); EX-527组的SIRT1蛋白表达量低于STS组，p-p53表达量高于STS组，差异均有统计学意义(均P<0.05)。LPS组的SIRT1 mRNA表达量低于对照组，p-p53 mRNA表达量高于对照组，差异均有统计学意义(均P<0.05); STS组的SIRT1 mRNA表达量高于LPS组，而p-p53 mRNA表达量低于LPS组，差异均有统计学意义(均P<0.05)；EX-527组的SIRT1 mRNA表达量低于STS组，p-p53 mRNA表达量高于STS组，差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论STS可通过上调SIRT1表达而抑制p-p53生成，进而抑制HK-2细胞的炎症反应及抗氧化作用，延缓肾小管损伤发生，具有一定肾脏保护作用。

简介：摘要：胰岛素抵抗(IR)是2型糖尿病(T2DM)的主要病理机制。运动作为最经济有效的物理疗法，可通过调节lncRNA MALAT1/MicroRNA-382-3p/Resistin轴的表达发挥改善胰岛素抵抗的作用。在IR小鼠模型中，观察到运动可以下调MALAT1来降低抵抗素，从而通过运动降低稳态模型评估-胰岛素抵抗(HOMA-IR)。此外，运动还提高了IR小鼠血清中microrna-382-3p(miR-382-3p)的表达[1]。本文论述了抑制MALAT1可以提高miR-382-3p从而抑制重组蛋白，从而形成运动保护IR的机制，突出了T2DM治疗的发展方向。

简介：摘要：通过德育教育与劳动教育的融会贯通，将劳动教育作为德育教育的载体，通过有效实践活动来解决德育教育表面化、形式化的问题。同时在劳动实践中开展德育教育可以使中职学生树立正确的三观，使德育教育的核心在实际劳动生活与学习生活中体现。

简介：摘要目的探讨miRNA-296-5p（miR-296-5p）对缺氧诱导的胰腺癌细胞迁移、侵袭的影响及其相关机制。方法选择人胰腺癌细胞株PANC-1；收集上海市奉贤区中心医院和蚌埠医学院附属第一医院2010年1月至2014年12月55例胰腺癌患者手术切除的胰腺癌组织和10例癌旁正常胰腺组织。采用免疫组织化学及原位杂交法检测胰腺癌及癌旁正常胰腺组织芯片中缺氧诱导因子1α（HIF-1α）、miR-296-5p的表达水平，分析二者的相关性及其与患者临床病理特征的关系。PANC-1细胞分为缺氧组和常氧组，采用Transwell法测定两组细胞迁移与侵袭能力，实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测两组细胞miR-296-5p及HIF-1α mRNA表达。转染小干扰RNA（siRNA）干扰HIF-1α的表达，将细胞分为PANC-1组（空白对照）、PANC-1-NC组（阴性对照）、PANC-1-siRNA组，检测miR-296-5p的表达；同时转染miR-296-5p激动剂和抑制剂，分为Agomir-miR-296-5p组（激动剂组）、Agomir-miR-296-5p-NC组（激动剂阴性对照组）、Antagomir-miR-296-5p组（抑制剂组）、Antagomir-miR-296-5p-NC组（抑制剂阴性对照组）；Transwell法检测各组细胞迁移和侵袭能力。采用荧光素酶报告基因系统验证miR-296-5p启动子区是否存在HIF-1α的结合位点。结果胰腺癌组织HIF-1α高表达率高于癌旁正常胰腺组织[81.8%（45/55）比0（0/10），P<0.01]；胰腺癌组织miR-296-5p高表达率低于癌旁正常胰腺组织[12.7%（7/55）比90.0%（9/10），χ2=27.23，P<0.01]。HIF-1α表达和miR-296-5p表达呈负相关（r=-0.53，P<0.01）；miR-296-5p低表达与肿瘤长径、TNM分期、淋巴结转移均有关（均P<0.05）。常氧组PANC-1侵袭细胞数为（15.3±2.1）个，缺氧组为（24.7±1.5）个，差异有统计学意义（t=0.26，P=0.003）；常氧组PANC-1迁移细胞数为（20.7±3.8）个，缺氧组为（32.7±1.2）个，差异有统计学意义（t=5.25，P=0.006）。常氧组PANC-1细胞HIF-1α mRNA相对表达量为0.30±0.02，缺氧组为1.00±0.01，差异有统计学意义（t=56.45，P<0.01）；常氧组PANC-1细胞miR-296-5p相对表达量为3.05±0.20，缺氧组为1.14±0.04，差异有统计学意义（t=16.05，P<0.01）。PANC-1组、PANC-1-NC组、PANC-1-siRNA组侵袭细胞数分别为（24.7±1.5）个、（25.7±1.5）个、（12.0±1.7）个，差异有统计学意义（F=68.13，P<0.01），PANC-1-siRNA组较PANC-1组细胞侵袭能力下降（t=9.50，P=0.001）；迁移细胞数分别为（32.7±1.2）个、（37.0±1.0）个、（17.3±1.2）个，差异有统计学意义（F=262.09，P<0.01），PANC-1-siRNA组较PANC-1组细胞迁移能力下降（t=16.26，P<0.01）。Antagomir-miR-296-5p组与PANC-1组比较，细胞侵袭和迁移能力增强（均P<0.05）；Agomir-miR-296-5p组与PANC-1组比较，细胞侵袭和迁移能力减弱（均P<0.05）。荧光素酶报告基因系统检测荧光素酶活性结果显示，miR-296-5p存在与HIF-1α结合的靶点。结论HIF-1α通过负向调控miR-296-5p在缺氧诱导的胰腺癌细胞的侵袭、迁移中发挥重要作用。

简介：摘要目的观察miR-5011-5p对膀胱癌细胞系J82凋亡和迁移的影响并探讨可能的作用机制。方法以J82细胞为研究对象，分别转染随机序列分子（NC组）和miR-5011-5p序列分子（miR-5011-5p组）。通过流式细胞术和划痕实验分析miR-5011-5p对J82细胞凋亡和迁移的影响，通过生物信息学预测miR-5011-5p的靶基因，通过实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）和Western blot分别检测miR-5011-5p对靶基因表达的影响。结果miR-5011-5p组J82细胞中miR-5011-5p相对表达量为10.73±1.67，显著高于NC组的1.04±0.16（t=5.81，P < 0.01）。NC组、miR-5011-5p组J82细胞凋亡率分别为（8.83±1.67）%、（34.96±3.80）%，差异有统计学意义（t=6.30，P < 0.01）。NC组、miR-5011-5p组J82细胞迁移率分别为（71.31±7.69）%、（37.43±5.01）%，差异有统计学意义（t=3.69，P < 0.05）。miR-5011-5p的靶基因可能是Yes相关蛋白1（YAP1）。与NC组相比，miR-5011-5p对J82细胞YAP1表达具有显著抑制效应（P < 0.01）。结论miR-5011-5p可能通过靶向抑制YAP1基因表达，促进膀胱癌J82细胞的凋亡并抑制其迁移。

简介：无

简介：摘要目的对一例疑似智力障碍、多发畸形、多体毛并伴高胆红素血症的患儿进行遗传学分析，探讨异常染色体核型与临床表型的相关性。方法患儿及其家庭成员进行常规染色体G显带核型分析，应用染色体微阵列(chromosomal microarray analysis，CMA)和荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization，FISH)技术对患儿进行染色体畸变检测及验证。结果患儿染色体核型为46, X, der (X) t (X；1) (p11.22; q21.3) mat，CMA及FISH检测结果为arr [hg19] 1q21.3q44(154 150 038-247 174 955)×3，Xp22.33p11.22(262 758-54 792 891)×1；患儿母亲的染色体核型为46，X，t，(X；1)(p11.22；q21.3)。结论患儿X染色体及1号染色体的拷贝数变异源自母亲的t(X; 1)平衡易位，Xpter-p11.22缺失和1q21.3-qter重复是该患儿异常表型的遗传学病因。

简介：摘要目的探讨长链非编码RNA KCNQ1重叠转录物1(KCNQ1OT1)对人晶状体上皮细胞(LECs)凋亡的影响及其机制。方法收集2018年12月至2019年8月在新乡市第一人民医院行白内障手术的23例年龄相关性白内障患者的晶状体前囊膜组织，同时收集20例正常供体眼晶状体前囊膜组织。采用实时荧光定量PCR法检测并比较不同人群晶状体前囊膜组织中KCNQ1OT1和miR-199a-5p mRNA表达水平。体外培养人LECs(SRA01/04)，将细胞分为空白对照组、模型对照组、小干扰RNA-阴性对照(siR-NC)组、siR-KCNQ1OT1组、miR-NC组、miR-199a-5p组、siR-KCNQ1OT1+anti-miR-NC组和siR-KCNQ1OT1+anti-miR-199a-5p组，其中空白对照组不做任何处理，模型对照组采用100 μmol/L过氧化氢(H2O2)培养细胞24 h制作氧化应激损伤模型，其余各组分别采用相应转染试剂按照脂质体法转染6 h后换用100% μmol/L H2O2处理细胞24 h。采用实时荧光定量PCR法检测各组晶状体前囊膜组织和各组LECs细胞中KCNQ1OT1和miR-199a-5p表达水平；采用MTT法检测各组细胞活力值；采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率；采用Western blot法检测各组B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)和bcl-2相关X蛋白(bax)表达水平；采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量；采用双荧光素酶报告实验检测KCNQ1OT1和miR-199a-5p的关系。结果年龄相关性白内障患者前囊膜内KCNQ1OT1相对表达量为2.41±0.42，明显高于正常人的0.97±0.19，差异有统计学意义(t＝14.112，P<0.001)；miR-199a-5p相对表达量为0.36±0.12，明显低于正常人的1.04±0.15，差异有统计学意义(t＝16.507，P<0.001)。与空白对照组比较，模型对照组中KCNQ1OT1和bax蛋白相对表达量、细胞凋亡率、MDA含量明显增加，miR-199a-5p和bcl-2蛋白相对表达量、细胞活力值、SOD活性值明显降低，差异均有统计学意义(均P<0.001)；与siR-NC组比较，siR-KCNQ1OT1组细胞中KCNQ1OT1和bax蛋白相对表达量、细胞凋亡率、MDA含量降低，bcl-2蛋白相对表达量、细胞生存率、SOD活性值增加，差异均有统计学意义(均P<0.05)。与miR-NC组比较，miR-199a-5p组KCNQ1OT1-WT荧光素酶活性显著降低，差异有统计学意义(t＝21.131，P<0.001)；与miR-NC组相比，miR-199a-5p组miR-199a-5p和bcl-2蛋白相对表达量、细胞生存率、SOD活性值明显升高，bax蛋白相对表达量、细胞凋亡率、MDA含量显著降低，差异均有统计学意义(均P<0.05)。siR-KCNQ1OT1+anti-miR-199a-5p组miR-199a-5p和bcl-2蛋白相对表达量、细胞生存率、SOD活性值明显低于siR-KCNQ1OT1+anti-miR-NC组，细胞凋亡率、bax蛋白相对表达量和MDA含量显著高于siR-KCNQ1OT1+anti-miR-NC组，差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论抑制KCNQ1OT1能够增强人LECs活力，抑制H2O2诱导的细胞凋亡和氧化应激反应，其作用机制可能与上调miR-199a-5p有关。

简介：无

简介：摘要目的探讨微小RNA(miR)-138-5p在前列腺癌(PCa)中的表达及对前列腺癌侵袭、迁移、凋亡等能力的影响。方法miR-138-5p模拟物转染正常前列腺上皮细胞(RWPE)-1、DU145细胞，实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)用于检测转染前后细胞miR-138-5p的表达。细胞计数试剂盒(CCK-8)实验、Transwell实验、划痕实验和凋亡实验分析miR-138-5p对PCa侵袭、迁移等能力的影响。GraphPad Prism 6 V6.01用于数据分析，组间比较采用Student’s t检验。结果RT-qPCR结果表明miR-138-5p在DU145细胞中的表达量(0.470±0.111)低于RWPE-1细胞(5.120±0.824)；转染后，RWPE-1 mimic中miR-138-5p的表达量(18.150±2.742)明显高于RWPE-1 NC(4.930±0.586，t＝6.670，P<0.01)，DU145 mimic中miR-138-5p的表达量(9.865±1.006)高于DU145 NC(0.526±0.145，t＝12.990，P<0.01)，差异均有统计学意义；提高miR-138-5p表达水平后，PCa细胞活力下降；DU145 mimic的迁移面积抑制率[(1.50±0.08)%]高于NC组[(1.00±0.03)%，t＝8.382，P<0.01]，差异有统计学意义；DU145 mimic的侵袭细胞数[(102.00±5.96)个]低于NC组[(198.00±15.09)个，t＝8.392，P<0.01]，差异有统计学意义；DU145细胞mimic组的凋亡率[(17.660±1.312)%]高于NC组[(4.990±0.674)%，t＝12.150，P<0.01]，差异有统计学意义，PCa细胞的凋亡增加。结论miR-138-5p可以负向调节PCa细胞的活力、迁移和侵袭，促进PCa细胞凋亡。

简介：摘要目的探讨微小RNA(miR)-17-5p调控同源盒蛋白(HOXB13)的分子机制。方法从SD大鼠胸主动脉分离和培养血管平滑肌细胞(VSMCs)；利用细胞计数试剂盒检测细胞增殖；反转录定量聚合酶链反应检测miRNA和miR-17-5p的表达；细胞转染miR-17-5p mimics、anti-miR-17-5p和小干扰RNA(siRNA)-HOXB13寡核苷酸；荧光素酶报告基因检测miR-17-5p对靶基因的调控；蛋白质印迹法检测蛋白表达。采用单向方差分析和Tukey检验进行统计学分析。结果成功培养出VMSCs，并通过抗α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫染色进行验证。血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)刺激VSMCs的增殖和诱导表型转换，促进HOXB13表达并降低miR-17-5p表达。荧光素酶报告分析证实miR-17-5p靶向HOXB13 mRNA的3’端-非翻译区下调其表达。anti-miR-17-5p组细胞增殖水平(1.362±0.076)高于阴性对照组(0.795±0.087)，而miR-17-5p mimics组细胞增殖水平(0.164±0.057)低于阴性对照组(F＝31.865，P<0.01)，差异有统计学意义。miR-17-5p/HOXB13轴调控α-SMA和抗增殖细胞核抗原(PCNA)表达。结论miR-17-5p通过调控HOXB13介导VSMCs的表型转换和增殖。

简介：摘要目的探讨载P311微球的温敏壳聚糖水凝胶对大鼠全层皮肤缺损创面愈合的影响。方法采用实验研究方法。通过油包水乳化法制备聚乙烯醇/海藻酸钠微球（单纯微球）、P311微球及异硫氰酸荧光素标记的牛血清白蛋白（FITC-BSA）微球，于光学显微镜/倒置荧光显微镜下观察形貌。制备壳聚糖溶液，将壳聚糖溶液和β-磷酸甘油二钠水合物混合制备单纯温敏水凝胶，在单纯温敏水凝胶中加入相应物质制备载单纯微球和载P311微球的温敏水凝胶，观察4种液体在37 ℃时倾斜状态下的形态变化，冷冻干燥后于扫描电子显微镜下观察微观形貌。取18只3~4周龄雄性SD大鼠，分为不进行任何处理的正常组及于背部脊柱两侧分别制作1个全层皮肤缺损创面并进行相应处理的敷贴组、壳聚糖组、单纯水凝胶组、载单纯微球水凝胶组、载P311微球水凝胶组，每组3只。取5组全层皮肤缺损大鼠，于伤后0（即刻）、5、10、15 d 观察创面愈合情况，计算伤后5、10、15 d创面愈合率；取5组全层皮肤缺损大鼠伤后15 d创面和创缘组织及正常组大鼠相同部位正常皮肤组织，行苏木精-伊红染色观察组织学变化，行免疫组织化学染色观测CD31及血管内皮生长因子（VEGF）的表达，采用蛋白质印迹法检测CD31及VEGF的蛋白表达。样本数均为3。对数据行单因素方差分析、重复测量方差分析及Bonferroni校正。结果单纯微球呈球形，表面疏松多孔；P311微球及FITC-BSA微球表面光滑无孔隙，且FITC-BSA微球散发出均匀的绿色荧光；3种微球直径基本一致，为33.1~37.7 μm。在37 ℃时倾斜状态下，与壳聚糖溶液及单纯温敏水凝胶相比，载微球的2种水凝胶结构更稳定。载微球的2种水凝胶网状结构较壳聚糖溶液、单纯温敏水凝胶更致密，且其横断面可见直径约30 μm的微球。伤后15 d内，5组大鼠创面均不同程度愈合，其中载P311微球水凝胶组大鼠创面愈合情况最好。敷贴组、壳聚糖组大鼠伤后5、10、15 d创面愈合率分别为（26.6±2.4）%、（38.5±3.1）%、（50.9±1.5）%，（47.6±2.0）%、（58.5±3.6）%、（66.7±4.1）%，均明显低于载P311微球水凝胶组的（59.3±4.8）%、（87.6±3.2）%、（97.2±1.0）%，P<0.05或P<0.01；单纯水凝胶组大鼠伤后10、15 d及载单纯微球水凝胶组大鼠伤后15 d创面愈合率分别为（76.0±3.3）%、（84.5±3.6）%、（88.0±2.6）%，均明显低于载P311微球水凝胶组（P<0.05）。正常组大鼠正常皮肤中可见表皮、毛囊及皮脂腺，未见CD31和VEGF阳性表达；载P311微球水凝胶组大鼠伤后15 d创面已几乎完全上皮化，创面血管、毛囊、皮脂腺生成及CD31和VEGF阳性表达较其他4组全层皮肤缺损大鼠明显增加，CD31和VEGF蛋白表达均较其余5组大鼠明显增加（P<0.01）。结论载P311微球的温敏壳聚糖水凝胶，可以缓释包载的药物，延长药物作用时间，并通过促进创面血管生成及再上皮化，促进全层皮肤缺损大鼠创面愈合。

简介：摘要目的研究高糖微环境下P62蛋白对人表皮细胞株HaCaT迁移和运动性的影响及其可能的分子机制，以探讨糖尿病足创面难愈合的机制。方法采用实验研究方法。取对数生长期HaCaT进行实验。取细胞，按随机数字表法（分组方法下同）分为正常对照组（培养液含终物质的量浓度5.5 mmol/L的葡萄糖）及高糖（培养液含终物质的量浓度30.0 mmol/L的葡萄糖）24 h组、高糖48 h组、高糖72 h组。正常对照组细胞行常规培养72 h，高糖72 h组细胞行高糖培养72 h，高糖48 h组细胞先常规培养24 h再高糖培养48 h，高糖24 h组细胞先常规培养48 h再高糖培养24 h后，采用蛋白质印迹法检测P62蛋白表达。取细胞，分为正常对照组、高糖组，分别同前培养48 h后，采用免疫荧光法检测P62蛋白表达（以绿色荧光表示）。取细胞，分为阴性对照小干扰RNA（siRNA）组、P62-siRNA-1组、P62-siRNA-2组、P62-siRNA-3组，并转染相应试剂，于转染后72 h，采用蛋白质印迹法检测P62蛋白表达。取细胞，分为正常糖+阴性对照siRNA组、正常糖+P62-siRNA组、高糖+阴性对照siRNA组、高糖+P62-siRNA组，并行相应处理，于转染后72 h，采用蛋白质印迹法检测P62蛋白表达；行划痕试验检测并计算划痕后24 h细胞迁移率（样本数为9）；在活细胞工作站下，观察3 h内细胞运动范围并计算运动速度（正常糖+阴性对照siRNA组、正常糖+P62-siRNA组、高糖+阴性对照siRNA组、高糖+P62-siRNA组观察细胞数分别为76、75、80、79个）。取细胞，分为正常糖+磷酸盐缓冲液（PBS）组、高糖+PBS组、高糖+N-乙酰半胱氨酸（NAC）组，行相应处理后，于培养48 h，分别采用蛋白质印迹法及免疫荧光法检测P62蛋白表达。除划痕试验外，其余实验各组样本数均为3。对数据行单因素方差分析、LSD检验。结果与正常对照组比较，高糖24 h组、高糖48 h组及高糖72 h组细胞P62蛋白表达量均明显增加（P<0.01）。培养48 h，高糖组细胞中P62的绿色荧光强于正常对照组。转染后72 h，与阴性对照siRNA组比较，P62-siRNA-1组、P62-siRNA-2组和P62-siRNA-3组细胞P62蛋白表达量均明显减少（P<0.01）。转染后72 h，与正常糖+阴性对照siRNA组比较，正常糖+P62-siRNA组细胞P62蛋白表达量明显减少（P<0.01），高糖+阴性对照siRNA组细胞P62蛋白表达量明显增加（P<0.01）；与高糖+阴性对照siRNA组比较，高糖+P62-siRNA组细胞P62蛋白表达量明显减少（P<0.01）。划痕后24 h，与正常糖+阴性对照siRNA组［（55±7）%］比较，正常糖+P62-siRNA组细胞迁移率明显升高［（72±14）%，P<0.01］，高糖+阴性对照siRNA组细胞迁移率明显下降［（37±7）%，P<0.01］；与高糖+阴性对照siRNA组比较，高糖+P62-siRNA组细胞迁移率明显升高［（54±10）%，P<0.01］。观察3 h内，高糖+阴性对照siRNA组细胞运动范围较正常糖+阴性对照siRNA组缩小，正常糖+P62-siRNA组细胞运动范围较正常糖+阴性对照siRNA组增大，高糖+P62-siRNA组细胞运动范围较高糖+阴性对照siRNA组增大。与正常糖+阴性对照siRNA组比较，正常糖+P62-siRNA组细胞运动速度明显增加（P<0.01），高糖+阴性对照siRNA组细胞运动速度明显下降（P<0.01）；与高糖+阴性对照siRNA组比较，高糖+P62-siRNA组细胞运动速度明显增加（P<0.01）。培养48 h，与正常糖+PBS组比较，高糖+PBS组细胞P62蛋白表达量明显增加（P<0.01）；与高糖+PBS组比较，高糖+NAC组细胞P62蛋白表达量明显减少（P<0.01）。培养48 h，高糖+PBS组细胞中P62的绿色荧光强于正常糖+PBS组，而高糖+NAC组细胞中P62的绿色荧光弱于高糖+PBS组。结论在HaCaT中，高糖微环境可促进P62蛋白表达；敲减P62蛋白可促进其迁移并增加运动性；高糖微环境下活性氧增加可能是P62表达增加的潜在机制。

简介：摘要目的探讨miR-150-5p在慢性阻塞性肺疾病(COPD)相关肺动脉高压(PH)中的表达水平及临床意义。方法本研究为病例对照研究，采用非随机抽样的方法选择2019年7月至2020年12月在长沙市第三医院呼吸与危重症医学科门诊随诊的稳定期COPD患者198例，根据肺动脉收缩压(SPAP)和匹配度，筛选出COPD合并PH(COPD+PH)组30例和单纯COPD组30例，同期健康人(对照组)20名。检测3组肺功能指标第1秒用力呼气容积/用力肺活量(FEV1/FVC)、第1秒用力呼气容积占预计值的百分比(FEV1%pred)、N末端脑钠肽前体(NT-proBNP)和外周血miR-150-5p的表达水平，分析miR-150-5p相对表达量与NT-proBNP水平、SPAP的相关性。用曲线下面积评价miR-150-5p判断COPD患者继发PH的诊断价值。结果COPD+PH组和单纯COPD组FEV1/FVC和FEV1%pred均低于对照组，分别为FEV1/FVC(55.09±6.91)%、(57.80±7.04)%比(86.62±3.40)%；FEV1%pred(64.30±8.41)%、(66.82±7.90)%比(102.06±4.12)%(F值分别为45.61和44.97，P值均<0.01)。COPD+PH组和单纯COPD组NT-proBNP高于对照组，COPD+PH组又高于单纯COPD组，分别为(533.95±139.03)ng/L、(148.91±9.47)ng/L比(35.29±11.40)ng/L(P值均<0.01)；COPD+PH组和单纯COPD组血清中miR-150-5p水平低于对照组，COPD+PH组又低于单纯COPD组[0.134(0.081，0.210)、0.312(0.248，0.388)比0.506(0.383，0.721)，χ2＝56.09，P<0.01]。相关性分析显示miR-150-5p的相对表达量与NT-proBNP和SPAP均呈负相关(r值分别为-0.872和-0.884，P值均<0.01)。受试者工作曲线分析显示，当miR-150-5p截断值为0.252时，曲线下面积为0.982(95%CI：0.959~1.000)，其敏感度为96.70%，特异度为90.00%，准确度为93.33%。结论COPD合并PH患者外周血中miR-150-5p表达水平下调，与NT-proBNP和SPAP呈负相关。外周血miR-150-5p对COPD合并PH的预测能力有较高的敏感度、特异度和准确度，可作为COPD患者继发PH的早期诊断及病情评估的潜在生物标志物。

简介：摘要目的探讨Circ_002770调控微小RNA(miR)-331-3p对黑色素瘤上皮-间充质转化(EMT)和侵袭的影响。方法选取32例黑色素瘤患者的癌组织及癌旁组织，采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测黑色素瘤组织和细胞中Circ_002770和miR-331-3p的表达水平；双荧光素酶报告实验检测miR-331-3p与Circ_002770之间的靶向关系；采用蛋白质印迹法(Western blot)检测EMT程度；Transwell小室法检测细胞侵袭。组间差异采用单因素方差分析进行统计分析。结果黑色素瘤组织(3.01±0.21)中Circ_00277的表达显著高于癌旁组织(1.00±0.06)，差异有统计学意义(t＝72.113，P<0.05)；MM细胞中Circ_00277的表达显著高于正常皮肤上皮细胞，差异有统计学意义(t＝98.021，P<0.05)。黑色素瘤组织(0.41±0.16)中miR-331-3p的表达显著低于癌旁组织(1.00±0.05)，差异有统计学意义(t＝36.892，P<0.05)；MM细胞中miR-331-3p的表达显著低于正常皮肤上皮细胞，差异有统计学意义(t＝187.239，P<0.05)。Circ_002770发挥分子海绵的作用抑制miR-331-3p表达；miR-331-3p与circ_002770野生型荧光载体共转染后A357细胞活性(0.46±0.21)显著低于对照组(1.00±0.23)，差异有统计学意义(t＝23.823，P<0.05)。而miR-331-3p与circ_002770突变型荧光载体共转染后A357细胞活性无明显变化(1.01±0.40比1.05±0.31)。低表达Circ_002770或过表达miR-331-3p均抑制黑色素瘤细胞的侵袭与EMT(P<0.05)。结论Circ_002770可吸附miR-331-3p促进黑色素瘤细胞的EMT和侵袭，进而影响黑色素瘤的进展。

简介：摘要目的探索微小RNA(miR)-340-5p在胰腺导管腺癌细胞(PDAC)中表达及影响其生物学行为的机制。方法实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测40例胰腺导管腺癌与正常细胞中miR-340-5p的表达，研究其表达水平与临床特征之间的联系。检测不同胰腺导管腺癌细胞及人胰腺导管上皮细胞中miR-340-5p水平。miR-340-5p模拟物转染PDAC细胞株PANC-1；甲基噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖活性；划痕实验、Transwell侵袭实验检测细胞侵袭迁移能力。RT-qPCR及蛋白质印迹法(Western blot)检测N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达。双荧光素酶报告基因分析实验检测miR-340-5p对RhoA的调控功能。结果PDAC组织中miR-340-5p水平低于正常胰腺组织(0.362 4±0.083 7、0.965 2±0.129 9，t＝21.272，P<0.01)；PDAC中miR-340-5p表达降低与胰腺癌淋巴结转移(χ2＝7.782，P<0.01)、肝转移(χ2＝17.109，P<0.01)有相关。双荧光素酶报告基因分析结果表明，野生型RhoA的荧光素酶活性在转染miR-340-5p模拟物后低于对照组(0.992 5±0.099 8比0.177 5±0.019 0，t＝18.496，P<0.01)。转染后，转染组细胞增殖活性降低(0.505 2±0.077 1比1.031 0±0.069 1、1.029 5±0.113 5，t＝38.012、7.637，P<0.01、迁移距离减少(0.753 3±0.050 1、0.725 0±0.071 5比0.338 3±0.087 7，t＝11.098、7.031，P<0.01)、迁移细胞数减少(57.000 0±4.290 0、52.666 7±5.785 0比19.833 3±2.994 0，P<0.01)。Western blot及RT-qPCR结果显示，与空白对照组(NC)及阴性对照组(Scramble)比较，miR-340-5p模拟物转染组N-cadherin(1.048 3±0.076 9、1.040 7±0.079 2比0.457 3±0.074 5，t＝11.800、11.585，P<0.01)、Vimentin(1.045 3±0.062 8、0.993 3±0.068 6比0.521 7±0.057 9，t＝10.982、9.585，P<0.05)、MMP-9(1.047 0±0.069 6、1.154 3±0.101 1比0.560 3±0.457 1，t＝32.803、18.559，P<0.01)表达显著降低，E-cadherin(1.053 3±0.100 3、0.987 7±0.083 4比1.976 0±0.154 2，t＝－29.502、－24.203，P<0.01)表达升高。结论胰腺导管腺癌中miR-340-5p表达降低，过表达miR-340-5p后能明显抑制PANC-1细胞的体外增殖和转移。其对RhoA信号通路介导的上皮-间充质转化(EMT)进程具有潜在抑制作用。

简介：摘要目的探讨miR-138-5p靶向HIF-1α对人肾癌细胞GRC-1增殖、凋亡和迁移的影响。方法将GRC-1细胞分为四组，分别为GRC-1组、miR-138 mimic组、pc-HIF-1α组及共转染组(mimic+pc-HIF-1α组)，并将mimic-scramble组设置为miR-138 mimic转染的阴性对照组。采用荧光素酶报告实验验证miR-138-5p与HIF-1α的靶向关系，采用qRT-PCR检测miR-138 mimic对GRC-1细胞HIF-1α mRNA水平的影响，采用Western blot检测miR-138对GRC-1细胞HIF-1α蛋白水平的影响。分别采用CCK-8、流式细胞术和划痕实验检测miR-138-5p靶向HIF-1α对GRC-1细胞的增殖、凋亡和迁移的影响。结果荧光素酶报告实验结果显示miR-138-5p可靶向HIF-1α。与GRC-1组比较，miR-138 mimic组的miR-138-5p mRNA表达水平较高，HIF-1α mRNA表达水平较低(均P<0.01);与GRC-1组比较，miR-138 mimic组的HIF-1α蛋白表达水平较低，而pc-HIF-1α组的HIF-1α蛋白表达水平较高(均P<0.01)；mimic+pc-HIF-1α组的HIF-1α蛋白表达水平低于pc-HIF-1α组(P<0.01)；与GRC-1组比较，miR-138 mimic组的GRC-1细胞增殖倍数较低，而pc-HIF-1α组的GRC-1细胞增殖倍数较高(均P<0.01)；mimic+pc-HIF-1α组的GRC-1细胞增殖倍数低于pc-HIF-1α组，差异有统计学意义(P<0.01)；与GRC-1组比较，miR-138 mimic组的GRC-1细胞凋亡率较高，而pc-HIF-1α组的GRC-1细胞凋亡率较低(均P<0.01)；mimic+pc-HIF-1α组的GRC-1细胞凋亡率高于pc-HIF-1α组(P<0.01)；与GRC-1组比较，miR-138 mimic组的GRC-1细胞划痕愈合率较低，而pc-HIF-1α组的GRC-1细胞划痕愈合率较高(均P<0.01)；mimic+pc-HIF-1α组的GRC-1细胞划痕愈合率低于pc-HIF-1α组(P<0.01)。结论miR-138-5p可通过靶向HIF-1α，负向调控HIF-1α mRNA和蛋白的表达，进而减弱人肾癌细胞GRC-1的增殖和迁移，促进其凋亡。

简介：

简介：【摘要】百草枯中毒是急诊科常见的急危重症，对病人造成严重的损伤，为病人家庭带来了巨大的负担，文章对近十年研究较多的通路进行了分析，选取了其中的三条通路，即P38/MAPK通路、Nrf2/Are通路及AMPK通路，描述了三条通路的生理作用及其在百草枯中毒中起到的作用，分析了作用于该通路且在动物实验或人体实验中可用的药物，为治疗百草枯中毒提供了新的思路。