简介：摘要目的探讨可变剪接调控RE-1序列沉默转录因子(REST)在血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化及腹主动脉瘤(AAA)发生发展中起到的作用。方法检测人AAA组织和小鼠AAA模型及对照正常动脉中膜VSMC形态和弹性纤维改变；实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)、蛋白质免疫印迹法(western blot)检测AAA组织及对照正常动脉组织中REST及其剪接异构体REST4的表达。RT-qPCR和Western blot检测沉默REST对人原代主动脉平滑肌细胞(HASMC)收缩型标志物α-SMA、合成型标志物波形蛋白(VIM)以及钾离子通道Kv1.3蛋白表达水平的影响。细胞增殖检测法(CCK-8)和细胞结晶紫染色实验检测沉默REST后HASMC增殖能力的改变。t检验验证定量数据的统计学差异。结果人和小鼠AAA中膜平滑肌细胞形态由梭型向分支型转化，AAA组REST表达低于对照组、REST4表达高于对照组(REST＝0.143±0.086，t＝5.672, P<0.05；REST＝115.245±8.909，t＝21.460, P<0.01)。沉默REST后，α-SMA表达量低于对照组，VIM和Kv1.3表达量高于对照组(α-SMA＝0.335±0.030，t＝9.711，P<0.01；VIM＝10.177±0.728，t＝15.170, P<0.01；Kv1.3＝13.427±1.103，t＝14.690, P<0.01)，同时沉默REST后，VSMC增殖能力高于对照组(A450：2.41±0.27比3.85±0.14，t＝6.744，P<0.01；光密度值：29.00±2.46比348.25±27.36，t＝16.440，P<0.01)。上述作用可被Kv1.3特异性抑制剂逆转(α-SMA＝2.448±0.498，t＝4.314，P<0.05；VIM＝0.758±0.030，t＝4.018，P<0.05)。结论AAA中膜平滑肌细胞中REST可变剪接上调，抑制REST功能，激活Kv1.3表达，进而诱导VSMC表型转化。

简介：摘要目的观察尿道上皮细胞中BTB-CNC异体同源体1(BACH1)对转化生长因子-β(TGF-β)信号通路的影响，从而参与微小RNA(miR)-155-5p诱导的炎症和纤维化的调节。方法采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测BACH1敲低或过表达后SV-HUC-1细胞中的TGF-β信号通路TGF-β、信号转导分子7(Smad7)和信号转导分子3(Smad3)的信使RNA(mRNA)和蛋白水平。我们在转染了miR-155-5p的细胞中过表达了BACH1，酶联免疫吸附试验(ELISA)测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(interleukin，IL)-1β和IL-6水平，RT-qPCR检测血管内皮生长因子(VEGF)、纤维连接蛋白(FN)、Ⅳ型胶原(Collagen Ⅳ)、TGF-β、Smad3和Smad7的表达水平。采用单因素方差分析比较两组间差异。结果TGF-β和Smad3的mRNA表达水平(2.14±0.11比0.99±0.07，F＝238.581；1.78±0.06比0.96±0.08，F＝201.720，P<0.01)，和蛋白表达水平(1.36±0.08比1.0±0.08，F＝32.911；1.34±0.04比1.01±0.08，F＝39.361，P<0.05)在BACH1敲低后升高，在BACH1过表达后下降(mRNA水平分别为0.39±0.06比1.09±0.04，F＝246.369；0.56±0.09比1.04±0.11，F＝36.668；蛋白水平分别为0.31±0.12比1.00±0.07，F＝81.323；0.63±0.05比0.98±0.14，F＝16.026，P<0.01)，而Smad7的mRNA水平(0.50±0.07比1.01±0.06，F＝105.446)和蛋白水平(0.40±0.08比1.00±0.11，F＝58.835)被BACH1小干扰RNA(siRNA)下调，P<0.01，在BACH1过表达后上调(mRNA水平为1.67±0.11比1.05±0.09，F＝55.960；蛋白水平为1.80±0.16比0.99±0.10，F＝52.571，P<0.01)。由miR-155-5p mimics引起的IL-1β、IL-6和TNF-α水平的增加因BACH1过表达而减弱(497.60±16.85比287.83±14.89比310.30±13.77，F＝171.691；795.17±34.84比396.53±24.59比425.67±21.39，F＝195.307；764.43±27.05比401.67±23.06比454.9±24.76，F＝184.088，P<0.01)。由miR-155-5p mimics诱导的VEGF、FN和Collagen Ⅳ的上调也被BACH1过表达阻断(1.90±0.10比0.95±0.05比1.21±0.05，F＝111.524；2.03±0.11比0.98±0.09比1.11±0.07，F＝121.346；1.91±0.11比1.11±0.06比0.94±0.04，F＝151.621，P<0.01)。TGF-β/smad信号通路相关因子TGF-β、Smad3和Smad7被过表达miR-155-5p激活，但BACH1共表达后，TGF-β/smad信号通路活性受到抑制(2.18±0.06比0.97±0.06比0.92±0.11，F＝240.091；1.64±0.11比1.01±0.08比0.92±0.03，F＝67.813；0.41±0.06比1.00±0.06比0.89±0.08，F＝65.57，P<0.01)。结论BACH1抑制尿道上皮细胞中TGF-β信号通路的激活从而阻断miR-155-5p诱导的炎性反应。

简介：无