简介:Humanμ-opioidreceptor(HμOR)withatagofsixconsecutivehistidinesatitscarboxylterminushasbeenexpressedinrecombinantbaculovirusinfectedSf9insectcells.Themaximalbindingcapacityforthe[^3H]diprenorphineand[^3H]ohmefentanyl(Ohm)were9.1±0.7and6.52±0.23nmol/gprotein,respectively.The[^3H]diprenorphineor[^3H]OhmbindingtothereceptorexpressedinSf9cellswasstronglyinhibitedbyμ-selectiveagonists[D-Ala^2,N-methyl-Phe^4,glyol^5]enkephalin(DAGO),Ohm,andmorphine,butneitherbyδnorbyκselectiveagonist.Na^+(100mM)andGTP(50μM)couldreduceHμORagonistsetorphineandOhmaffinitybindingtotheoverexpressedHμOR.μ-selectiveagonistsDAGOandOhmeffectivelystimulated[^35S]GTPγSbinding(EC50=2.7nMand6.9nM)andinhibitedforskolin-stimulatedcAMPaccumulation(IC50=0.9nMand0.3nM).Theagonist-dependenteffectscouldbeblockedbyopioidantagonistnaloxoneorbypretreatmentofcellswithpertussistoxin(PTX).TheseresultsdemonstratedthatHμORoverexpressedinSf9insectcellsfunctionallycoupledtoendogenousCi/oproteins.
简介:随着制药技术的进步,口服速释固体制剂已经成为现代医学中十分常见的药剂形式,这种药剂的出现推动了医学的发展,有着非常好的使用效果.但是,随着医学技术和制药技术的不断发展,口服速释固体制剂技术还在不断发展,以满足人们的需要.本文旨在通过对口服速释固体制剂技术的研究来阐明其研究现状及发展前景.
简介:MAPK蛋白激酶是一类重要的植物胁迫信号调控因子。为了研究小麦MAPK基因的功能,本试验克隆了小麦MAPK蛋白激酶基因TaMAPK2。为了制备TaMAPK2基因的多克隆抗体,TaMAPK2的非保守区段的DNA序列anti-MAPK2被构建到原核表达载体pET-28a-(+)上,表达融合蛋白His-antiMAPK2。在终浓度为1mmol/LIPTG诱导1h的条件下,融合蛋白His-antiMAPK2表达量达到最大。通过蛋白标记亲和层析柱(HisTrapTMHP)得到纯化的His-antiMAPK2融合蛋白。利用新西兰大白兔制备了TaMAPK2基因的多克隆抗体,ELISA竞争抑制法检测抗体效价检测,效价为1:80000,能满足后续试验要求的效价值,为进一步分析TaMAPK2的蛋白定位、表达等提供基础。
简介:目的:制备稳定分泌抗人生长分化因子15(GDF15)单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞系,并对其分泌的mAb进行鉴定。方法:根据人GDF15氨基酸序列特征,设计合成了8条能够免疫产生GDF15特异性抗体的抗原多肽,与VLP载体偶联后,免疫雌性BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术制备鼠源抗人GDF15的mAb,用间接ELISA检测mAb腹水效价。结果:获得针对7个抗原多肽的12株稳定分泌抗人GDF15的杂交瘤细胞系,腹水mAb效价可达1×104~1×109。结论:获得了针对不同抗原多肽的抗人GDF15的特异性mAb,为进一步研发以GDF15为靶点的单克隆抗体抗肿瘤药物奠定了基础。