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  • 简介:摘要目的构建细胞凋亡受体通路相关蛋白FasL表达的RNA干扰(RNAi)质粒,为研究FasL参与的细胞信号通路提供稳定转染细胞的RNA干扰质粒。方法选取FasL基因的19nt特异性序列,设计针对FasL的shRNA序列,应用基因重组技术克隆到pSilencer1.0-U6表达载体中,EcoRI和ApaI进行双酶切和DNA测序鉴定重组克隆,在脂质体的介导下包含FasL基因RNAi的重组载体转染脐静脉血管内皮细胞,转染48h后,收集细胞裂解液,Westernblotting分析对照组与转染组FasL蛋白的表达水平。结果双酶切证实shRNA正确插入pSilencer1.0-U6质粒,DNA测序证实插入的序列正确;FasL基因RNAi的载体转染血管内皮细胞成功;Westernblotting结果显示与空质粒对照组比转染组细胞FasL表达下调。结论成功构建人FasL基因RNA质粒,为研究FasL参与的细胞信号通路提供了稳定的转染细胞载体。

  • 标签: 载体 FasL RNAi
  • 简介:目的骨肉瘤是一类发生于骨间叶组织的恶性肿瘤,恶性程度高。当前其发病的具体分子机制尚不明确且受多种因素影响。环状RNA(circRNA)已被证实在多种疾病中发挥重要的调控作用,可以通过分子海绵机制吸附miRNA进而调控关键基因表达。本研究拟通过查找骨肉瘤circRNA表达谱芯片,并分析差异表达circRNA及其潜在调控机制,预测其在骨肉瘤发生发展过程中的作用。方法通过GEO数据库查找circRNA芯片表达谱,通过GEO2R对芯片进行差异表达分析,对筛选出的上调和下调表达最明显的circRNA各5个做内源竞争性RNA调控网络图,预测出潜在靶mRNA,并应用生物信息学分析方法分析了这些靶mRNA的功能富集情况。结果在骨肉瘤circRNA表达谱芯片(GSE96964)结果中,有110个明显差异表达的circRNA,包括8个明显上调和102个明显下调的circRNA,通过位点预测网站,在5个上调最明显的circRNA下游预测出127个mRNA,5个下调最明显circRNA下游预测出158个mRNA。OMICSbean分析结果显示,这些基因所富集的通路与骨肉瘤的发生发展有密切关系。结论本研究筛选出的110个明显差异表达circRNA不仅可以作为骨肉瘤诊断与治疗的分子标志物,而且在骨肉瘤的发生发展过程中有潜在的调控作用。

  • 标签: 环状RNA 骨肉瘤 表达谱 生物信息学分析
  • 简介:一项在体内表达功能性RNA分子的方法,为简化RNA样品的准备打开了一扇方便之门,也为体外、体内研究RNA结构、相互作用和功能提供了一套有用工具。

  • 标签: TRNA 支架 重组 体内表达 相互作用
  • 简介:目的构建表达Nogo受体(NgR)特异性siRNA199的重组质粒。方法按照E1bashir等设计原则和siRNA表达载体的要求,在合成、筛选出基因沉默效率较高的siRNA199基础上,设计带有BamHⅠ、HindⅢ酶切黏性末端、终止识别序列和LOOP环的shRNA,并将其克隆入载体pRNAT-1/6.1/Neo,构建成NgR特异siRNA199重组质粒,然后进行酶切鉴定及基因测序。结果设计的shRNA成功克隆入载体pRNAT-1/6.1/Neo,构建成NgR特异siRNA199重组质粒,酶切鉴定及基因测序表明设计序列完全相符,目的基因序列准确无误。结论重组质粒构建成功,为构建病毒载体及观察重组质粒抑制大鼠NgR基因的表达对脊髓损伤的修复作用奠定了基础。

  • 标签: 髓鞘 细胞表面受体 神经再生 脊髓损伤
  • 简介:在目前的疫苗研究中,对新疫苗免疫效果的要求越来越高。减毒或无毒的病毒疫苗载体能够激发高效持久的系统和黏膜免疫,并且具有较高的安全性,为研究新疫苗提供了一条途径。RNA病毒作为疫苗载体,在可操作性和免疫效果方面有着显著的优势,近年来已成为疫苗研究领域的热点。综述了几种RNA病毒载体目前的研究状况及其在疫苗载体方面的应用。

  • 标签: RNA病毒 载体 疫苗
  • 简介:摘要微小RNA-223(miR-223)定位于X染色体上,在进化过程中高度保守。近年来,许多研究指出miR-223在多种消化系统肿瘤如食管癌、胃癌、肝癌、胰腺癌、结直肠癌中表达异常,其可通过多种信号通路参与肿瘤细胞的增殖、凋亡、侵袭等过程,并有望成为消化系统肿瘤诊断和预后的标志物。

  • 标签: 微RNAs 消化系统肿瘤
  • 简介:Longnon-codingRNAs(lncRNAs)refertoagroupofRNAsthatareusuallymorethan200nucleotidesandarenotinvolvedinproteingeneration.Instead,lncRNAsareinvolvedindifferentregulatoryprocesses,suchasregulationofgeneexpression.DifferentlncRNAsexistthroughoutthegenome.LncRNAsarealsoknownfortheirrolesindifferenthumandiseasessuchascancer.HOTAIRisanlncRNAthatplaysaroleasanoncogenicmoleculeindifferentcancercells,suchasbreast,gastric,colorectal,andcervicalcancercells.Therefore,HOTAIRexpressionlevelisapotentialbiomarkerfordiagnosticandtherapeuticpurposesinseveralcancers.ThisRNAtakespartinepigeneticregulationofgenesandplaysanimportantroleindifferentcellularpathwaysbyinteractingwithPolycombRepressiveComplex2(PRC2).Inthisreview,wedescribethemolecularfunctionandregulationofHOTAIRanditsroleindifferenttypesofcancers.

  • 标签: 非编码RNA 癌症 致癌 遗传调控 基因表达 分子功能
  • 简介:Inordertostudythefunctionalstructureofthetranscriptionterminatorsandthemechanismoftemination,asurveyofthechromatinstructure,includingthelocationofDNaseIhypersensitivesitesandthenucleosomearrangement,ofyeastADH1andFLPterminatorswasmade.TheresultsshowthatthereisnorelationshipbetweenthefunctionoftheterminatorsandtheexistenceofDNaseIhypersensitivesites.However,itisfoundthatthereisalwaysanucleosmoeattheimmediateupstreamofthetranscriptionalterminationsites.Asacontrol,thechromatinstructuresofthepBR322DNAfragmentsontheyeastshuttervectorsarealsoinvestigatedatthesametime.TherandomnucleosomearrangementonthebacterialDNAinyesastagreeswiththepublishedreports.Anewhypothesis,aboutthemechanismoftranscriptionalterminationisputforwardandthereasonofdifferentnucleosomearrengementontheDNAswhichareoriginallyfromdifferentspeciesinyeastisdiscussed.

  • 标签: 酵母 RNA聚合酶Ⅱ 转录终止点 染色质结构
  • 简介:摘要阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)是一种中枢神经系统退行性疾病。其发病隐匿,患者从开始有病理改变到出现临床症状往往经历数年甚至十余年的病程演变。一旦进入痴呆期,目前尚无理想的药物逆转病情。为了提高早期诊断效率,近年来针对该病早期生物标志物的研究成为了热点。除了已确定的β-淀粉样蛋白(Aβ)及微管相关蛋白tau蛋白外,目前也发现了微小RNA(miRNA)可能作为潜在生物标志物。

  • 标签: 阿尔茨海默病 微小RNA
  • 简介:很多小RNA病毒科病毒感染宿主细胞后可引发宿主细胞凋亡,这种现象被认为是宿主细胞对抗小RNA病毒侵染的防御机制。凋亡机制可由某些病毒蛋白对细胞产生信号干扰来实现多种凋亡通路。虽然这些凋亡通路的上游事件是不同的,但最后的效应却很一致。此外,一些病毒蛋白具有抑制细胞凋亡的功能,它们能够令感染病毒后的细胞不死亡,形成病毒与宿主细胞共存的持续性感染状态。

  • 标签: 小RNA病毒 细胞凋亡 持续性感染
  • 简介:目的:通过对TRIzol一步法进行改进,建立一种从富含胶原蛋白、多糖及色素的仿刺参体壁提取总RNA的有效方法。方法:样品在液氮中研磨并用TRIzol匀浆后再进行抽提;对TRIzol一步法提取的总RNA进行DNaseⅠ消化和酚氯仿抽提,用2.5mol/L的醋酸钾沉淀,并加入适量糖原(10mg/mL)与RNA共沉淀。结果:琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度法以及RT-PCR检测结果表明,改进的方法能够有效去除基因组DNA、蛋白、多糖及色素的污染,RNA的产率提高。结论:制备的总RNA纯度高,完整性好,能够满足mRNA差异显示RT-PCR等分子生物学研究的要求,是一种提取仿刺参体壁及其他富含黏多糖、胶原蛋白和色素的动物组织总RNA的有效方法。

  • 标签: 仿刺参 体壁 总RNA提取
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  • 简介:摘要目的探讨血清微小RNA-206(miR-206)、微小RNA-590-3p(miR-590-3p)水平与室性心律失常患者预后的关系。方法选取2016年7月至2019年2月于河北燕达医院住院治疗的117例室性心律失常患者(室性心律失常组),同期选取104例健康体健者作为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测两组血清中miR-206和miR-590-3p水平;分析室性心律失常患者血压、血脂水平与血清miR-206、miR-590-3p水平的相关性;比较室性心律失常患者不同预后组血清miR-206和miR-590-3p水平;分析室性心律失常患者预后不良的影响因素。结果室性心律失常组与对照组的性别、年龄、体质指数、肌酐、高血压、高脂血症和吸烟比例比较,差异均无统计学意义(均为P>0.05)。室性心律失常组的miR-206、miR-590-3p、收缩压、舒张压、总胆固醇、三酰甘油和低密度脂蛋白胆固醇水平显著高于对照组,而高密度脂蛋白胆固醇水平低于对照组(均为P<0.05)。室性心律失常患者miR-206与miR-590-3p水平呈正相关,且与收缩压、舒张压、总胆固醇、三酰甘油和低密度脂蛋白胆固醇水平呈正相关,与高密度脂蛋白胆固醇水平呈负相关(均为P<0.05)。预后不良组患者的血清miR-206和miR-590-3p水平均显著高于预后良好组(均为P<0.05);miR-206升高(OR=6.98,95%CI:2.96~16.45,P=0.001)、miR-590-3p升高(OR=7.07,95%CI:4.33~11.54,P=0.002)和总胆固醇升高(OR=6.27,95%CI:4.38~8.97,P=0.008)是室性心律失常患者预后不良的危险因素,高密度脂蛋白胆固醇升高(OR=0.42,95%CI:0.21~0.84,P=0.004)是室性心律失常患者预后不良的保护因素。结论室性心律失常患者血清miR-206和miR- 590-3p水平升高与预后不良密切相关,可作为评估预后的参考指标。

  • 标签: 室性心律失常 血清 微小RNA-206 微小RNA-590-3p 预后
  • 简介:摘要脑缺血/再灌注损伤(cerebral ischemia/reperfusion injury, CI/RI)是脑卒中患者血栓再通后常见的临床病理生理现象,其发病机制涉及多个环节,其中线粒体作为"能量站"扮演了关键角色。缺血性脑卒中诱导脑内大量微RNA (microRNAs, miRNAs)和长链非编码RNA (long non-coding RNAs, lncRNAs)的表达改变,提示miRNAs和lncRNAs与缺血性脑卒中复杂的病理过程有关。此外,研究发现相关miRNAs和lncRNAs可通过调节线粒体参与CI/RI的发生、发展过程。文章综述线粒体在CI/RI中的作用,以及miRNAs和lncRNAs调节线粒体参与CI/RI的最新研究进展,旨在从miRNAs和lncRNAs水平探讨线粒体调控CI/RI的机制,为CI/RI的防治提供新的靶点和思路。

  • 标签: 脑缺血 再灌注损伤 线粒体 微RNA 长链非编码RNA
  • 简介:摘要目的探索社区注射吸毒人群HIV和HCV发病率。方法自2014年6月至2019年6月,在云南省保山市隆阳区以当地的清洁针具交换点为平台,开展前瞻性队列研究,招募社区注射吸毒者200人作为研究对象。队列每6个月进行1次随访评估,调查高危吸毒行为和性行为情况,并采集血样进行HIV和HCV血清抗体检测。采用开放队列,每12个月队列开放1次,补充研究对象至200人。结果社区吸毒人群队列随访5年,共招募社区注射吸毒者231人,5年随访率为82.0%(164/200)。研究对象在研究期间第5年尚未发现HIV阳转。研究队列共有89名HCV阴性注射吸毒者,观察总人时为384.6人年,HCV发病率为0.26/100人年。结论该地区社区注射吸毒人群HIV和HCV发病率处于较低水平,需继续在吸毒人群中采取有效的综合性干预措施以控制该人群HIV传播。

  • 标签: 注射吸毒人群 前瞻性队列 艾滋病病毒 乙型肝炎病毒 发病率
  • 作者: 曾婉嘉 高林 徐艺玮 陈香梅 王福生 鲁凤民
  • 学科: 医药卫生 >
  • 创建时间:2022-12-13
  • 出处:《中华肝脏病杂志》 2022年第09期
  • 机构:北京大学医学部基础医学院病原生物学系暨感染病研究中心,北京 100191,北京大学医学部基础医学院病原生物学系暨感染病研究中心,北京 100191 北京大学三〇二临床医学院,北京 100039,北京大学三〇二临床医学院,北京 100039 解放军总医院第五医学中心感染性疾病诊疗与研究中心,北京 100039,北京大学医学部基础医学院病原生物学系暨感染病研究中心,北京 100191
  • 简介:摘要丙型肝炎病毒(HCV)和乙型肝炎病毒(HBV)合并感染患者在接受直接抗丙型肝炎病毒药物(DAAs)治疗后,可有效抑制HCV复制并实现丙型肝炎治愈,但存在HBV再激活风险,后者可导致严重肝损伤甚至暴发性肝炎的发生。现对HCV和HBV在肝细胞中的复制特点以及激活天然免疫应答的差异进行了总结,探讨了DAAs治疗后发生HBV再激活的分子机制及其临床意义,并提出了相应的临床预防措施。

  • 标签: 丙型肝炎病毒 乙型肝炎病毒 干扰素 直接抗丙型肝炎病毒药物 再激活
  • 简介:摘要目的分析太原市美沙酮维持治疗(MMT)患者HCV感染状况及其感染相关因素与交互作用。方法2019年4-6月对太原市3所MMT门诊正在接受治疗的MMT患者,采用面对面问卷调查收集其一般人口学特征、吸毒情况、MMT情况、性行为、健康状况等,通过病历资料查阅MMT患者HCV检测结果,使用EpiData 3.1软件双录入数据,使用SAS 9.4软件进行统计学分析,用χ2检验进行HCV感染的单因素分析、logistic回归模型进行多因素和交互作用分析。结果MMT患者846例中,男女性别比7.21∶1(743∶103),HCV感染率为12.53%(106/846)。控制混杂因素后,女性(OR=1.936,95%CI:1.023~3.662)、性伴有吸毒史(OR=2.073,95%CI:1.110~3.871)和注射吸毒者(OR=7.737,95%CI:4.614~12.973)的感染HCV风险较高。交互作用结果显示,女性、性伴有吸毒史者及注射吸毒者之间存在相乘交互作用。结论太原市MMT患者中,女性、性伴有吸毒史者、注射吸毒者HCV感染的风险较高,女性与性伴有吸毒史者、女性与注射吸毒者、性伴有吸毒史者与注射吸毒者对HCV感染的发生存在相乘交互作用。

  • 标签: 美沙酮维持治疗 丙型肝炎病毒 感染 相关因素 交互作用
  • 简介:AbstractThe aim of this study was to evaluate the performance of an assay using dried plasma spot (DPS) and dried blood spot (DBS) samples for the serological detection of anti-hepatitis C virus (HCV) antibodies. Between January and July 2019, plasma, DPS and DBS specimens were collected from individuals at high-risk for HCV infection. Samples were tested for anti-HCV by ELISA, and the performance of DPS and DBS specimens was examined using results from the plasma testing, as the standard. Blood samples were collected from 329 persons, including 129 men who have sex with men and 200 intravenous drug users. Results from the plasma testing indicated that 118 samples (59.0%) were HCV positive. Data from the DPS sample testing showed sensitivity as 99.2% (95% confidence interval [CI]: 0.95-1.00) and specificity as 100% (95% CI: 0.98-1.00) for HCV detection, with Kappa of 99.3% (95% CI: 0.98-1.00) while in DBS sample testing the sensitivity as 98.3% (95% CI: 0.93-1.00) and specificity as 100% (95% CI: 0.98-1.00), with Kappa of 98.7% (95% CI: 0.97-1.00), respectively. Spearman’s correlation coefficients for the comparisons between plasma and DPS specimen, plasma and DBS specimens, DPS and DBS specimens were 0.857, 0.750, and 0.739, respectively. Compared with the results in plasma, 1 sample was not detected using the DPS specimens, and 2 samples were failed for the positive detection, using the DBS specimens. Both DPS and DBS samples were promising alternatives to plasma, for the detection of anti-HCV antibodies.

  • 标签: HCV Plasma Dried plasma spots Dried blood spots Spearman's correlation coefficient
  • 简介:我们对HBsAg阳性的出国劳务人员进行了HCV感染情况的调查,现将结果报告如下:1材料与方法1.1材料HBsAg阳性血清来自出国劳务人员;抗HCV试剂系上海科华公司试剂盒。

  • 标签: 出国劳务人员 HBSAG阳性者 HCV感染 调查 丙型肝炎