简介:目的:基于大肠杆菌质粒pMMB207,构建贝氏柯克斯体穿梭载体,建立贝氏柯克斯体转化系统。方法:利用PCR分别扩增eGFP基因、Kan~R抗性基因、贝氏柯克斯体组成型表达启动子P311和P1169等4段序列,然后用融合PCR技术将4段序列融合为P311-eGFP-P1169-Kan~R串联序列,经KpnⅠ和XhoⅠ酶切后,连接至经同样双酶切的pMMB207骨架上,构建穿梭载体p207-GK;将穿梭载体电转化至贝氏柯克斯体,用ACCM-2培养基进行传代培养或感染BGM细胞;利用倒置荧光显微镜观察eGFP基因的表达,传代至eGFP基因高表达时,用半固体平板培养法克隆分纯贝氏柯克斯体转化株。结果:构建了贝氏柯克斯体穿梭载体,获得了稳定表达eGFP的贝氏柯克斯体转化株,并完成了克隆分纯。结论:建立了完整的贝氏柯克斯体转化系统,为后续用遗传学方法研究贝氏柯克斯体奠定了基础。
简介:辛弃疾是以英雄的身份登上词坛的。他身处亡国之乱世,目睹故土沦陷之悲凉,他日夜忧患苍生、痛惜思民,虽胸怀爱国之心和匡复之志、身兼沙场之略和经纶之才,却因当权者的昏庸而得不到重用。故时常悲愤交加、饮恨报国无门,英雄只能放歌词坛,唱出自己的悲壮之声和爱国情怀,于是在他的词中处处洋溢着慷慨激昂、悲痛沉郁的英雄情怀,这与他早年执戈横槊的戎马生涯及当时的历史背景是紧密相关的。刘辰翁《辛稼轩词序》就早已指出,他的词是'英雄感怆'。他是唐宋词史上罕有匹敌的,文韬武略兼备的英雄词人。他在国难当前的灾难年代,以一种'舍我其谁'的使命意识和英雄豪气自动地把雪耻救国当作自己的职责,表现出无味的忘我精神和坚强勇敢的可贵品质。他的词中所创造的抒情人物(自我)形象,是唐宋词史上唯一的一位性格丰满、情怀复杂的英雄——悲剧英雄。辛弃疾的英雄情怀体现为对崇尚的理想执着,强烈的使命感和坚定的进取精神,以及民族社会与个体人生的忧患意识。