简介:玻璃化法作为简单方便的超低温保存方法之一,目前已成功地应用于植物茎尖、胚性细胞、原生质体、悬浮细胞等多种单一组织或细胞培养体系,但尚未见对幼苗这种复合组织的保存报道.本文研究了拟南芥(Arabidopsisthaliana,Landsbergerecta)幼苗的玻璃化保存程序并发现了一些有价值的研究现象.幼苗来自萌发的种子,种子消毒后播种在MS培养基上,4℃处理48h后转入25℃,10h光周期,萌发不同天数为实验材料.玻璃化程序包括:1)预处理———用2M甘油+04M蔗糖在20℃处理20min;2)脱水处理———用玻璃液PVS2(30%w/v蔗糖+15%w/v乙二醇+15%w/v二甲基亚砜+含04M蔗糖的MS)0℃处理50min;3)冷冻融化———玻璃液及幼苗一起投入液氮(LN2)保存,20℃室温自然融化;4)置换———用MS+12M蔗糖20℃处理30min,成活力检查;幼苗转到MS培养基培养5天,观察再生长状况.10天后转到培养土中,在生长箱中长到结实.结果表明:1)使用完整的程序,冻融后成活率最高,为765%;玻璃液处理是成功的关键,省去此处理成活率为0;冻融是造成玻璃化保存成活率降低的主要因子;2)由萌发0~2天的种子形成的幼苗便使用该技术,冻存融化后成活率分别为88%,838%和765%,结实正常;3)
简介:对青薯9号、大西洋、小白花和E1074种基因型的马铃薯茎尖进行玻璃化法超低温保存,并运用甲基化敏感扩增多态性(MSAP)技术分析4种材料超低温保存前后DNA甲基化的的变异情况。结果表明:经玻璃化法超低温保存,四个品种的成活率分别为86.93%,/o、78.03%、71.57%和65.82%。成活率和再生率因基因型而异,且不同基因型之间的差异显著。用MSAP技术分析超低温保存前后植株甲基化的结果显示:用16对引物组合对4个品种进行扩增,平均扩增出493条带;与对照相比,4个品种基因组的CCGG序列中有8.4%~14.3%DNA发生甲基化变化。经超低温保存后,去甲基化和甲基化都有发生,并以去甲基化变化为主要趋势。本文运用MSAP技术对马铃薯超低温保存前后植株进行胞嘧啶甲基化分析表明,使用MSAP检测超低温保存后再生植株DNA甲基化遗传变异非常有效。