简介:目的:构建斑马鱼FOXP3A融合蛋白的原核表达系统,诱导表达并制备多克隆抗血清。方法:选取斑马鱼foxp3a基因cDNA的894bp特异区段(s-foxp3a),对该片段进行密码子优化后构建原核表达载体pET-32a-s-foxp3a,转化大肠杆菌BL21(DE3),诱导表达斑马鱼S-FOXP3A-His融合蛋白并纯化,纯化后的蛋白免疫家兔,制备斑马鱼FOXP3A蛋白的多克隆抗血清,4次免疫后取血清,采用间接ELISA法检测抗血清效价。结果:在16℃经0.5mmol/LIPTG诱导10h的条件下,SDS-PAGE分析表明斑马鱼S-FOXP3A-His融合蛋白以包涵体形式产生;间接ELISA检测结果显示,FOXP3A蛋白多克隆抗血清的效价在1.6×10^5以上。结论:制备了高效价的斑马鱼FOXP3A多克隆抗血清,为进一步解析斑马鱼FOXP3A蛋白的功能提供了基础工具。
简介:车站编组自动化设备的应用极大地提高了列车编组安全性和效率,使用DYT可控停车防溜器制动防溜,减轻了作业人员的工作条件和劳动强度,提高了站场自动化作业的水平。文章对DYT停车器的维修与管理进行了探讨与研究,提出设备更新时的一些改进思路。
简介:目的:为进一步研究CLP(coactosin-likeprotein)与5’-脂氧合酶、肌动蛋白的相互作用机制及功能,开展CLP克隆表达、分离纯化研究,以得到高纯度的CLP,并对其生物化学特性进行分析测定。方法:从人的胎肝cDNA文库中经PCR扩增得到CLP基因,克隆到原核表达载体pGEX-6p-1中并获得高效表达,经过GlutathioneSepharose4B亲和层析和Su-perdex75分子筛纯化,得到高纯度的CLP;在此基础上进行SDS-PAGE、动态光散射和分析型超速离心等实验,并进一步分析实验结果。结果:CLP在溶液中主要以单体形式呈现;CLP的摩擦率为1.909,证实该蛋白质具有线性化趋势存在的可能性,且线性化程度较高。结论:实验结果揭示了CLP作为线性化蛋白质的可能性,为进一步搭建CLP和丝状肌动蛋白的作用模型奠定了一定的数据基础。
简介:目的:众所周知,铅是人类和动物的神经毒物.无数的研究证据表明,慢性低水平铅暴露能够引起实验动物、人类特别是儿童的学习和记忆功能障碍,而铅中毒事件却仍然在许多国家时有发生.但目前对铅中毒的有效治疗方法非常有限,因此目前急需寻求一种能够有效拮抗铅中毒的替代疗法.本研究通过观察发芽糙米对发育期大鼠低水平铅暴露引起的学习和记忆能力损伤的拮抗作用,探索一种拮抗铅毒性尤其是对于发育期机体学习和记忆损伤的有效治疗方法.方法:1将刚断奶(21日龄,PND21)大鼠随机分为5组:分别为对照组(AIN93G饮食,去离子水),醋酸铅组(AIN93G饮食,2g/L醋酸铅去离子水),醋酸铅+白米组(白米饮食,2g/L醋酸铅去离子水),醋酸铅+糙米组(糙米饮食,2g/L的醋酸铅去离子水),醋酸铅+发芽糙米组(发芽糙米饮食,2g/L醋酸铅去离子水).不同饮食组大鼠在喂养60天后终止实验.2通过水迷宫和被动回避实验检测发芽糙米对刚断奶大鼠的铅导致学习记忆能力损害的拮抗作用.3石墨炉原子吸收法测定大鼠血清和海马组织铅含量.4高效液相色谱法测定大鼠海马组织γ-氨基丁酸和谷氨酸含量.5大鼠氧化应激状态测定结果:1喂以发芽糙米后铅暴露大鼠血清和海马中铅含量的减少.2喂以发芽糙米类后铅暴露大鼠的学习记忆能力增强3喂以发芽糙米后铅暴露大鼠海马组织中γ-氨基丁酸和谷氨酸含量的增多.4喂以发芽糙米后铅暴露大鼠氧化应激能力增强.结论:1喂以发芽糙米和糙米后能够一定程度上减少铅在体内的蓄积.2喂以发芽糙米后能够拮抗低水平铅暴露对发育中大鼠的学习记忆的损伤作用.3喂以发芽糙米后能够拮抗低水平铅暴露对发育中大鼠的学习记忆的损伤作用的原因可能与其富含GABA、减轻铅引起的氧化应激有关.