简介：目的探讨卵巢癌细胞株SKOV3．ip1细胞转染表达短发卡状RNA（shRNA）的质粒后，SKOV3．ip1细胞中Her-2／neu基因表达的变化，和对SKOV3．ip1细胞凋亡的影响。方法将针对Her-2／neu基因的shRNA表达载体转染SKOV3．ip1细胞，从mRNA水平、蛋白表达水平和细胞凋亡的变化三个方面评价shRNA表达载体对Her-2／neu基因表达的抑制作用。结果shRNA表达载体可以有效的抑制SKOV3．ip1细胞Her-2／neu基因的表达，使Her-2／neu基因的mRNA和蛋白表达量明显下降，细胞凋亡增多。结论靶向Her-2／neu的shRNA表达载体可以有效抑制Her-2／neu基因的表达。

简介：经方用药精妙、临床疗效卓越，为历代医家所尊崇，也是科学研究者的重点研究对象。经方药物组成多样、成分复杂。经方的现代研究面临药理作用机制复杂、有效成分不明确等问题，从而制约了经方在现代医学领域的推广以及国际化的进程。HPLC及HPLC－MS联用技术广泛被应用到药物的分析、质控，同样适用于经方的成分分析。文章介绍了HPLC及HPLC－MS联用技术在经方成分及含量的鉴定中的应用，包括经方样品的前处理、经方成分的定量、定性分析以及经方的药物代谢研究等方面。免疫共沉淀技术可用于检测经方对蛋白之间的相互作用的影响，激光共聚焦技术可用于观察经方对蛋白、离子等的分布、转移的影响。结合免疫共沉淀与激光共聚焦技术，能更好地解析经方药理作用的分子机制，因此，文章对免疫共沉淀及激光共聚焦技术在经方现代药理研究中的应用也进行了介绍。

简介：摘要目的分析1，4，5三磷酸肌醇受体(IP3R)-葡萄糖调节蛋白75(Grp75)-电压依赖性阴离子通道1(VDAC1)-线粒体钙单向转运体(MCU)钙轴分子在肾病蛋白尿时表达变化，探讨其上游调控路径。方法将SD大鼠分为对照组(6只)和阿霉素(ADR)组(10只)。通过尾静脉1次注射ADR法建立肾病模型。采用免疫组织化学染色分析肾小球钙轴分子表达和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1(mTORC1)活化标志物。体外培养小鼠足细胞，用ADR诱导足细胞损伤，分别予不同浓度依维莫司干预，分析钙轴分子和凋亡标志物。结果与对照组比较，ADR组大鼠蛋白尿时肾小球IP3R(0.02±0比0)、Grp75(0.04±0比0)、VDAC1(0.04±0比0.01±0)、MCU(0.05±0.01比0.01±0)表达显著增强，mTORC1活化标志物增强(0.57±0.01比0.18±0)，差异均有统计学意义(均P<0.001)。在小鼠足细胞中，与对照组比较，ADR组Grp75(1.89±1.17比0.16±0.08)、VDAC1(1.59±0.34比0.20±0.07)、MCU(1.56±0.38比0.46±0.35)表达显著增强，mTORC1活化标志物增强(2.12±0.08比0.39±0.09)，差异均有统计学意义(均P<0.05)。与ADR组比较，ADR+依维莫司(1.0 nmol/L)组足细胞Grp75(0.26±0.20比1.89±1.17，P＝0.001)、VDAC1(0.40±0.26比1.59±0.34，P＝0.014)、MCU(0.60±0.32比1.56±0.38，P＝0.029)表达显著减少，线粒体钙显著降低[(2 664.00±140.57) U比(3 025.16±180.92) U，P＝0.023]，凋亡标志物活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3显著减少(0.55±0.28比1.48±0.45，P＝0.011)，差异均有统计学意义。结论IP3R-Grp75-VDAC1-MCU钙轴分子高表达伴mTORC1过度活化参与ADR大鼠肾病模型蛋白尿发生，mTORC1抑制剂显著抑制足细胞钙轴分子表达，可能参与mTORC1抑制剂所致足细胞效应机制。