简介：目的：建立检测猪常见致病菌的反向斑点杂交方法。方法：将23SrRNA基因芯片用的针对12种细菌的25～30mer探针加长到30～38mer,2对通用引物序列不变。用地高辛标记下游引物,以尼龙膜为载体制备膜芯片,检验探针/膜杂交的特异性和敏感性;另外设计1条大肠杆菌K88基因探针、一段带K88探针的报告基因和1对报告基因的反向PCR引物,在PCR体系中增加封口的K88报告基因和反向引物对,被检样品扩增后进行膜杂交。结果：修改的13条探针与参考目标菌株在膜上成特异性杂交,对52个参考菌株和野外分离株的检测准确率为92%;膜杂交的敏感性与玻片芯片接近,最小检出量为100fgDNA;在尼龙膜上增加K88探针,与3重PCR产物杂交,可以检测到大肠杆菌K88毒力基因。结论：建立的反向斑点杂交方法简便快速,检测成本低,可用于仪器设备不足的实验室,同时可以加入检测如大肠杆菌K88等致病基因,提高基于保守基因的芯片的诊断能力。

简介：建立了商业化种植的NeWLeaf-YTM转基因马铃薯的筛选检测和鉴定的PCR方法.该方法根据马铃薯自身patatin基因作为内源特异参照基因扩增216bp片段,检查模板DNA提取的质量,避免了假阴性结果;同时扩增FMV35S启动子基因225bp片段和PVY-cp基因161bp片段.PCR反应循环参数是94℃2min;94℃40s,55℃60s,72℃60s,35次循环;之后72℃延伸5min.本实验中的F-primer(PVY01-5′)/R-primer(PVY01-3′)引物是针对商业化种植的NewLeaf-YTM转基因马铃薯PVY-cp抗病毒基因而设计的,具有很强的特异性,可以达到对NeWLeaf-YTM转基因马铃薯鉴定的目的.

简介：目的：建立李痘病毒（PPV）特异、灵敏、快速的实时荧光定量RT-PCR检测方法,用于核果类种苗的健康评测及李痘病毒疫情监测。方法：根据PPV-D株系和PPV-M株系的外被蛋白（CP）基因保守序列,设计特异性引物和TaqMan探针,扩增全长CP基因片段,并将其克隆到pMD18-T载体上,构建质粒标准品,建立PPV的实时荧光定量RT-PCR检测方法,并对该方法的特异性、灵敏度和重复性进行评估。结果：此荧光定量RT-PCR方法对PPV检测呈现高灵敏度和高特异性,与马铃薯Y病毒和马铃薯X病毒无交叉反应,最低检出限可达1.6×10^2拷贝/μL,标准曲线的相关系数为0.99918。结论：建立了李痘病毒的荧光定量RT-PCR检测方法,可望应用于检验检疫部门对李痘病毒的快速检测

简介：MDR1基因的表达量与肿瘤细胞的耐药性呈正相关且在多种肿瘤组织中都有过度表达。准确监测肿瘤病人MDR1基因表达情况对选择化疗方案和提高化疗效果有重要作用。在检测MDR1基因表达的方法中RT-PCR检测MDR1的过程中一般使用β肌动蛋白作为外参照,通过计算MDR1cDNA与β肌动蛋白cDNA的比值来表示MDR1基因的表达量。这样只能得到MDR1基因相对β肌动蛋白基因的表达量,而不能测出其绝对表达量。而且扩增

简介：目的：比较并评价涂片抗酸染色法（涂片法）、L-J培养法和基因芯片法在分枝杆菌检测中的应用价值。方法：对241例需查抗酸杆菌的临床标本,采用涂片法、L-J培养法和基因芯片法检测分枝杆菌,3种方法检测结果存在分歧的标本再进行DNA测序,以培养鉴定结果阳性或DNA测序得到分枝杆菌序列为确诊标准。结果：241例标本,涂片法、L-J培养法和基因芯片法的检测阳性率依次为18.7%、12.0%、15.8%,经卡方检验三者阳性率的差异没有统计学意义（P〉0.05）;检测灵敏度依次为85.4%、70.7%、93.0%,经卡方检验三种方法的灵敏度总体来说有差别（χ2=7.24,P〈0.05）,涂片法与L-J培养法以及涂片法与基因芯片法的灵敏度差异没有统计学差异,基因芯片法的灵敏度高于涂片法（χ2=6.61,P〈0.05）;检测特异性依次为95.6%、100.0%、100.0%。38例基因芯片检测阳性患者中有28例为结核分枝杆菌,10例为非结核分枝杆菌。结论：与涂片法及培养法相比较,基因芯片法能够鉴别分枝杆菌菌种,同时具有快速、可靠、准确度高的特点,在分枝杆菌感染的早期诊断和抗菌治疗上具有重要的临床价值。

简介：韩国三星综合技术研究院最近开发出一种新型医用检测仪，能在10分钟内测出人体细胞内的DNA是否被病原体感染。

简介：随着计算机技术的发展,已经广泛应用于人们的工作和生活中。随之网络和信息安全方面也越来受到人们的重视。本文从网络安全漏洞检测与攻击图构建两方面进行分析,探讨增强计算机安全性能的相关措施。

简介：建立了从肉骨粉中提取DNA的稳定、简便易操作的方法.根据牛、羊线粒体DNA基因片段设计特异性引物和TaqMan探针,建立了实时荧光PCR技术检测肉骨粉中牛、羊源性成分的快速、特异、敏感的方法.

简介：能够让人感染疾病的病原菌种类很多,致病性以及对抗性菌类药物也会随之而变化,这给感染疾病的预防和治疗带来了很多的问题。对微生物检测也提出了更高的要求。本文主要针对生物检测的概念以及对疾病防止的重要性进行阐述,希望能够给临床医学带来一定的帮助。

简介：目的：建立盐酸雷尼替丁有关物质高效液相色谱检测方法及方法学研究.方法：采用色谱柱：AgelaVenusilASBC184.6×150mm,流动相为0.08mol/L柠檬酸溶液（用三乙胺调节pH至3.5）-乙腈（80∶20）,检测波长为314nm.流速为1.0ml/min;柱温为30？C.结果：采用该方法能将杂质与主成分有效分离,专属性良好,耐用性强,10小时内溶液较稳定,经检测限试验证明该方法能有效检出杂质.结论：高效液相方法简便,准确度高,专属性好,建议采用此法测定盐酸雷尼替丁的有关物质.

简介：目的：了解北京地区Merkel细胞多瘤病毒（MCPyV）在呼吸道感染住院儿童中的流行情况和临床特点。方法：采集北京友谊医院儿科呼吸道感染住院患儿的鼻咽抽吸物样本200份，并收集相应的患儿临床资料，采用Taq．Manreal—timePCR方法检测MCPyVLTAg基因，并经测序确认；MCPyV阳性样本同时检测常见的人呼吸道病毒混合感染情况。结果：200份标本中共检出MCPyV阳性6例，检出率3％；感染儿童年龄从6月到5岁，其中年龄≤3岁的占83．3％（5／6）。诊断包括支气管肺炎和急性支气管炎，临床表现包括发热、咳嗽、喘息。6例阳性样本均与其他呼吸道病毒混合感染，A型流感病毒和呼吸道合胞病毒混合感染最常见，6例阳性样本MCPyV载量均低于10拷贝／μL。结论：real—timePCR方法检测呼吸道感染住院患儿中MCPyV的感染率为3％，6例MCPyV阳性样本均与其他呼吸道病毒混合感染且MCPyV载量较低，不能认为MCPyV是儿童呼吸道感染的病因。

简介：目前有关造血的基因重组的细胞因子不断出现,如EPO、TPO、G-CSF、SCF及多种白介素等等。如何评价这些细胞因子的生物活性,已成为重要研究课题,基中对造血祖细胞的增殖分化的影响是一个重要的技术途径。本文就常用的几种体外培养体系及方法作一探讨,以提供检测基因重组细胞因子活性的有效方法。①培养体系的选择,大致分为二大类:琼脂培养法主要用于粒-巨噬系祖细胞CFU-GM;培养甲基纤维素法,用于CFU-E、BFU-E、

简介：目的:分析冠心病和原发性高血压患者血脂、血糖和尿酸检测之间的关联性。方法:利用先进的生化分析仪将50例原发性高血压,60例冠心病和原发性高高血压并存病患和110例健康组的血清中的甘油三酯,高密度脂蛋白胆固醇,血糖,尿酸项目进行对比观察。结果:除了高密度脂蛋白胆固醇指标之外,冠心病以及原发性高血压病患的各项指标均高于正常标准。结论:高血脂症,高血糖症,高尿酸症和原发性高血压与心脏病有着极其密切的关系,共同令心脑血管疾病恶化。

简介：本文简要地介绍了DNA电化学生物传感器研究的最新进展，重点讨论了改善生物传感器选择性和灵敏度的技术和方法。

简介：文章就胶体金免疫层析技术的基本应用原理极其所具有的应用特点进行简要阐述,主要针对寄生虫病检测中胶体金免疫层析技术的应用做出分析。

简介：目的：建立一种灵敏、特异、快速的ELISA方法，用于猕猴血清中抗死亡受体5（DR5）单克隆抗体的检测。方法：采用双抗夹心ELlSA法，用猴血清吸附的羊抗入IgG包被于96孔酶标板，加入待测样品，用HRP标记的猴血清吸附的羊抗人IgG进行检测，加底物显色，读取D450值。结果：建立了检测抗DR5单克隆抗体的ELISA方法并进行了确证，方法的线性范围为12．5-800ng／mL，定量下限为12．5ng／mL，板内和板间精密度均小于15％，准确度为-4-15％，冻融稳定性和稀释稳定性良好。结论：方法学确证结果表明，本研究建立的抗DR5单克隆抗体检测方法符合新生物制品临床前药代动力学研究指导原则要求，可用于抗DR5单克隆抗体的检测。

简介：目的：构建40S核糖体蛋白S6的原核表达载体,表达并纯化S6蛋白,将其作为底物用于S6激酶（S6K）的体外活性测定。方法：采用RT-PCR方法从人胚肾细胞HEK293中获取S6cDNA,将扩增产物克隆至大肠杆菌表达载体中,进行酶切及测序鉴定;IPTG诱导GST-S6融合蛋白在大肠杆菌中表达,用谷胱甘肽亲和层析纯化GST-S6,免疫沉淀法检测该蛋白是否可作为底物用于S6K的体外激酶活性测定。结果：酶切及测序鉴定表明构建了S6原核表达载体,并表达及纯化出GST-S6融合蛋白,相对分子质量为55×103。该蛋白可用于S6K的体外激酶活性测定,特异性强。结论：S6蛋白的克隆、表达与纯化成功,可用于S6K的体外激酶活性测定,为研究S6K的功能奠定了基础。

简介：目的：建立一种基于qRT—PCR的微量细胞中和实验改良法，快速、定量检测汉滩病毒感染中的中和抗体活性。方法：将本室前期制备的抗汉滩病毒高中和活性鼠源性单抗3G1、鼠/人嵌合单抗1D9和感染剂量为100TCIDso的病毒混合液于37℃孵育1h后感染Vero—E6细胞，提取细胞总RNA。根据GenBank数据库中汉滩病毒76—118株S基因序列设计特异性引物，在上述实验基础上以细胞总RNA为检测样品，建立qRT—PCR快速、定量检测汉滩病毒感染中中和抗体活性的实验方法。结果和结论：建立了一种基于qRT—PCR的微量细胞中和实验改良法，可定量测定汉滩病毒感染中的中和抗体活性，该法具有快速、灵敏、特异和重复性好等优点。

简介：目的：建立实时定量检测口腔内变形链球菌的实时定量聚合酶螺旋反应（PSR）方法。方法：针对变形链球菌的gtfB基因设计4套引物，通过实时浊度法和显色法两种方法判断结果。结果：从4套引物中筛选出最佳引物，并确定最佳温度为65％；进一步实验表明采用最佳引物能特异性地检测变形链球菌，与13种其他病原核酸无交叉反应，敏感性达10拷贝／μL。结论：建立了实时定量检测变形链球菌的PSR方法，该方法具有简单快速、特异性强、敏感性高的特点，为实时定量检测变形链球菌提供了新技术。

简介：目的：建立检测人4型腺病毒拷贝数的荧光定量PCR方法。方法：提取本实验室构建的4型腺病毒全基因组质粒，以梯度稀释质粒为标准模板，选取人4型腺病毒六邻体区域基因设计一对特异性引物，进行SYBRGreenI荧光定量PCR扩增并制作标准曲线。结果：标准曲线为y=-4．284x＋53．468，由全基因组质粒所构建的标准曲线线性关系良好，扩增反应Ct值与拷贝数的对数呈线性关系（R2=0．999609），检出敏感度可达1×10^2拷贝/μL，且与其他几种腺病毒无交叉反应。用该方法检测4型腺病毒感染细胞2、12和24h后的病毒拷贝数，其病毒拷贝数随时间增加，与细胞病变（CPE）变化保持一致，且荧光定量PCR的测量结果稳定（变异系数〈6％）。结论：建立了检测人4型腺病毒基因拷贝数的荧光定量RT—PCR方法，该方法灵敏度高、特异性强。