简介：目的构建含小分子肽P1-绿色荧光蛋白（P1-GFP）融合基因慢病毒载体,用携带小分子肽P1-GFP融合基因的慢病毒感染健康人脐带间充质干细胞,构建靶向间充质干细胞。观察体外培养的靶向间充质干细胞对实验型自身免疫性葡萄膜炎（EAU）的治疗作用。方法选择6~10周龄雌性健康C57BL/6WT小鼠100只。用基因工程技术构建含P1-GFP融合基因慢病毒载体并感染人脐带间充质干细胞,用流式细胞术鉴定;用视网膜光感受器间维生素A类结合蛋白（IRBP）诱导EAU小鼠模型;实验C57BL/6WT小鼠尾静脉注射靶向人脐带间充质干细胞,每天用裂隙灯显微镜对小鼠眼前节的炎症情况进行观察;用流式细胞术检测实验C57BL/6WT小鼠脾脏淋巴细胞CD11c、CD86表型。结果靶向人脐带间充质干细胞表达髓系干细胞的表面标记CD105（90.0%）/CD44（98%）、CD73（85.0%）/CD90（98.5%）;建模后C57BL/6WT小鼠于注射后7~9d开始发病,12~14d发病达高峰,16~20d眼前节炎症自限性减轻,21d后眼内炎症逐渐消退、自愈;用靶向人脐带间充质干细胞治疗后,建模小鼠EAU发病时间延长,炎症程度减轻;建模后的小鼠脾脏CD11c~＋CD86~-细胞数量增加非常明显,经过靶向人脐带间充质干治疗后CD11c~＋CD86~-细胞数量下降,至治疗后第15天仍未恢复至治疗前水平;EAU建模后小鼠成熟树突状细胞（DC）百分比下降,经过治疗后成熟DC百分比逐渐增加,在第15天时基本恢复至正常水平。结论靶向人脐带间充质干细胞对IRBP诱导的C57BL/6WT小鼠EAU有治疗作用,靶向人脐带间充质干细胞作用于DC等抗原呈递细胞,调节其成熟,从而抑制了EAU的进展。

简介：目的培养人骨髓间充质干细胞（humanmarrowmesenchymalstemcell，hMMSCs），体外诱导分化成心肌细胞（cardiomyocytes，CM），将细胞移植入裸鼠皮下，观察其在细胞移植中有无成瘤改变，是否具有细胞移植的潜能性。方法体外培养扩增hMMSCs，流式细胞仪鉴定其纯度；用5-氮杂胞苷（5-Aza，10μmol／L）体外诱导成CM，并进行鉴定；将诱导成CM的hMMSCs接种于裸鼠皮下，移植后18d分别取接种局部皮下及心肌组织，进行组织化学染色。结果体外培养扩增出hMMSCs，流式细胞检查CD44阳性，表达Vimentin；hMMSCs经5-Aza诱导可分化成CM，表达心肌特异性标记TroponinⅠ及Desmin，透镜观察可见肌丝样结构；进行细胞移植的裸鼠注射局部皮下组织没有形成结节样结构，但发现有表达TroponinⅠ、Desmin及Vimentin的细胞；此外，在心肌组织中也发现有表达这三种抗体的hMMSCs。结论hMMSCs可体外分离培养扩增，具有向CM分化的潜能，体外诱导分化成CM的hMMSCs在细胞移植中并没有成瘤性，且经皮下细胞移植诱导分化成CM的hMMSCs具有向心脏归巢的现象，可用于心肌损伤的细胞移植。