简介：随着现代分子生物学技术的发展,反转录聚合酶链式反应技术在甘薯病毒检测上的应用越来越广泛。采用该技术可检测出甘薯组织中含量极低的病毒RNA,具有灵敏度高、特异性强等优点。在本研究中根据NCBIGenBank中收录的SPCSV病毒外壳蛋白（CP）基因核苷酸序列的保守区域设计了3对特异性引物,使用天根生化科技（北京）有限公司生产的QuantOneStepRT-PCRkit试剂盒,针对影响扩增产物的影响因素退火温度进行优化,建立了甘薯退绿矮化病毒的RT-PCR检测方法。该方法使RT-PCR在一管内完成,大大降低了外源物质的污染及RNA降解的几率,可作为甘薯SPCSV病毒的快速检测方法。

简介：犬细小病毒病感染是由犬细小病毒（cPv）引起犬只死亡的最重要传染病之一，目前诊断该病的方法主要是胶体金快速检测试板法，虽然检测方法较简便快速，但其敏感性较差。通过对NCBI网站GenBank发表的CPV-2基因组序列的分析，选择该病毒VP2基因保守序列设计引物，通过对阳性病料扩增及扩增产物测序，与NCBI发表的相关基因对比，同源性在99．8％-100％，成功建立了特异性、灵敏度高的PCR方法，最低只需2．5PgDNA模板。在对28例可疑CPV病例检测中，本方法检出25例阳性、3例阴性，阳性率为89．28％；胶体金检测板检测出20例阳性、8例阴性，阳性率为71．42％，证实PCR方法比胶体金检测更敏感。

简介：为建立暴马丁香ISSR-PCR最佳反应体系,本研究以暴马丁香基因组DNA为模板,首先通过单因子试验设计筛选出各影响因子比较适宜的浓度范围,再利用正交试验,对暴马丁香ISSR-PCR反应有影响的模板DNA、dNTPs、Mg2＋、TaqDNA聚合酶和引物浓度等5种因素4个水平进行了优化试验。暴马丁香的ISSR-PCR最佳反应体系最终确定为：在25μL的反应体系中,DNA模板是40ng,Mg2＋浓度为2.0mmol/L,引物浓度为0.4μmol/L,TaqDNA聚合酶用量为1.5U,dNTPs浓度为0.2mmol/L。利用该体系从60条ISSR引物中筛选出了扩增条带清晰、多态性好的10条引物。这一体系的建立及多态性引物的筛选为以后利用ISSR分子标记技术进行暴马丁香的有关研究提供了科学依据。

简介：了解菜心光能利用效率的规律性,可为具优良光合性状菜心品种的选育提供参考。据此,本研究选用在二份耐热性强和二份耐热性弱的菜心品种作为研究对象,探讨了这些品种的叶绿素荧光参数的日变化规律。结果表明：随着光强和温度的上升和下降的日变化,四份菜心材料的初始荧光（Fo）、相对可变荧光（VJ）和单位反应中心热耗散能量（DIo/RC）出现先升后降的趋势,而最大荧光（Fm）、光能转化效率（Fv/Fm）、光化学性能指数（PIABS）则出现先降后升的情况;除Fo的最大峰值在四份材料中均在13：00时外,耐热性强的材料其余参数的最大或最小峰值出现在光照强度最大的13：00时且变化幅度较小,而在耐热性弱的材料中这些值的变化幅度大且出现在日最高温度的14：00。另外,随着光强和温度的降低,各荧光参数又逐渐向初始水平恢复,但耐热性强的菜心品种的恢复速率高于耐热性弱的菜心品种。这一结果表明叶绿素荧光参数可考虑作为评价菜心材料耐热性强弱的一个参考指标。

简介：原子荧光光谱分析是20世纪60年代中期提出并发展起来的新型光谱分析技术，是利用原子荧光光谱线的波长和强度进行物质的定性与定量分析的方法。具有原子吸收和原子发射光谱两种技术的优势，灵敏度高、光谱干扰少、线性范围宽，可多元素同时分析等特点，已被广泛运用。通过实验我们掌握了充分利用IF—T模拟监视曲线来调整仪器工作条件参数，在短时间内达到检测稳定性、准确性高的方法——即让所进样品的元素荧光信号全部采集。希望能与同行共同学习。

简介：本研究利用Me2Em4正反向引物组合对影响梾木属SRAP-PCR反应体系的Mg2＋、Taq聚合酶、dNTP和引物浓度4个因素进行L9（34）正交试验,采用正交设计直观分析及方差分析对影响SRAP反应的4个因素进行分析,并对模板DNA浓度进行了单因素试验分析。结果表明,梾木属SRAP-PCR20μL反应体系的最佳组合为：Taq聚合酶2.0U、Mg2＋浓度1.5mmol/L、dNTP浓度0.15mmol/L、Primer浓度0.30mmol/L、模板DNA浓度5.5mg/L以及含有2μL不含Mg2＋的10倍稀释缓冲液。各因素对梾木SRAP-PCR反应的影响大小依次为：dNTP、Taq聚合酶、Mg2＋和Primer。最后运用优化体系从100对SRAP引物组合中筛选出26个多态性SRAP标记,可用于梾木属不同种间亲缘关系、系统进化和遗传多样性等方面的研究。

简介：模板DNA的质量直接影响PCR扩增的结果,而不同提取方法及其缓冲液的成份与浓度对提取DNA的质量有重要影响.本文以5个栽培大豆品种的叶片为材料,比较分析了SDS与CTAB两种提取方法以及不同浓度CTAB提取缓冲液对所提取的DNA质量的影响,并通过PCR进行检验.实验结果表明:用1%(W/V)、2%(W/V)浓度的CTAB提取缓冲液和1.25%(W/V)SDS提取缓冲液所提取的大豆叶片DNA的质量较好,均能满足PCR扩增模板的需求,其中以1.25%(W/V)SDS提取得到的大豆叶片DNA质量最好,以其为模板扩增的效果最佳,而4%浓度的CTAB不适宜提取大豆叶片DNA.

简介：为有效利用SSR-PCR技术分析国家一级重点保护植物银缕梅的遗传多样性,采用正交试验设计L16（43）,即3因素4水平,对影响SSR-PCR扩增结果的因素（引物,模板DNA浓度和循环数）进行优化筛选,并在此基础上对聚丙烯酰胺凝胶上样量进行优化,建立了适合银缕梅的最佳SSR-PCR反应体系：10μL2×PCRMix、40ng模板DNA、10μmol/L引物,其余用ddH_2O补齐至20μL。PCR扩增程序为：95℃预变性15min,95℃变性30s,57.5℃退火1.5min,72℃延伸1min,30个循环,循环结束后,60℃延伸30min,扩增产物4℃保存。聚丙烯酰胺凝胶电泳上样量以1.5~2.0μL为最佳。利用优化后体系进行引物筛选,从18对引物中筛选出11对具有多态性引物,说明该反应体系具有良好的稳定性。该体系的建立可以为今后利用SSR标记对银缕梅遗传多样性分析、系统发育研究、遗传图谱构建、基因定位和分子标记辅助育种等研究提供基础。

简介：将绿色荧光蛋白（GFP）基因导入家蚕蛹（G0）的睾丸,利用荧光显微镜技术检测到绿色荧光蛋白基因在家蚕卵（G1）表达的荧光图像。

简介：棕榈藤作为热带、亚热带植物中重要的森林资源,优质的藤材是重要的加工利用材料,具有重要的经济价值。叶片光合能力对藤材的形成具有重要影响,利用叶绿素荧光仪测定黄藤（Daemonoropsjenkinsiana）、大白藤（Calamusfaberii）、小白藤（C.balansaeanus）的叶绿素荧光参数,为研究逆境条件下棕榈藤的光合能力和选择适宜的栽培条件提供参考。结果表明,在实验室条件下3种棕榈藤的光系统Ⅰ（PSⅠ）实际光量子效率Y（Ⅰ）为小白藤〉大白藤〉黄藤,光系统Ⅱ（PSⅡ）的Y（Ⅱ）为大白藤〉黄藤〉小白藤;非光化学猝灭系数qN由高到低依次为大白藤、黄藤和小白藤;而光化学猝灭系数q_P则是小白藤最高,黄藤次之,大白藤最低;PSⅠ的电子传递效率ETR（Ⅰ）是小白藤〉大白藤〉黄藤,而PSⅡ的ETR（Ⅱ）值则是小白藤〉黄藤〉大白藤;PSⅡ最大光量子产量F_v/F_m维持在0.78~0.8范围内,且大白藤显著高于黄藤和小白藤（P〈0.05）。由此可见,在实验室条件下小白藤的光合效率在这3种藤中最高,其次为黄藤,大白藤最低;且光保护能力为大白藤最高,黄藤次之,小白藤最低。

简介：通过荧光分光光度计测定了不同采集时间的大飞扬草整株、叶、茎、根水提物的三维荧光光谱图,得出了可以用于鉴定的共有峰位置。绘制了峰位置分布图,直观地展现了各个荧光物质存在的部位。结合文献,指出了部分荧光峰的归属,未归属的荧光峰可能是属于新成分。

简介：本文介绍了一种用于PCR的植物基因组DNA的快速制备方法。该方法只需将少量（4～6mg）植物叶片、适量（200μL）TE缓冲液、和一粒钨合金珠放入1个2mL离心管，在多功能组织细胞研磨器中振动5min破碎组织后，直接取1μLDNA溶液作为PCR的模板。本方法具有简单快速、操作效率高、成本低、扩增效果好等优点，特别适合于大量样品的基因型检测。

简介：为通过ISSR分子标记研究桃儿七遗传多样性,建立并优化桃儿七的ISSR-PCR反应体系。使用正交设计辅以单因素试验,对桃儿七ISSR-PCR反应体系中的5种主要因素（模板DNA,Mg-（2＋）,TaqDNA酶,dNTPs及ISSR引物）进行筛选优化,选取甘肃碌曲县西仓神山山顶桃儿七居群样本验证该反应体系。正交试验各因素显著性为引物〉TaqDNA酶〉DNA浓度〉dNTPs〉Mg-（2＋）,桃儿七ISSR-PCR反应的最佳体系为（25μL）：2.5mmol/LMg-（2＋）,0.2mol/LdNTP,0.4μmol/L引物,0.5UTaqDNA酶,40ngDNA,2.5μL10×Buffer。该体系具有高稳定性,多态性丰富的特点,为野生桃儿七遗传多样性及保护策略研究提供了技术支持。

简介：本研究建立了检测与诊断猪圆环病毒的PCR方法，并对该方法进行了标准化研究。该方法快速、敏感、特异性强，可扩增10ng的阳性质粒的DNA．可以从30μL病料组织悬液或全血中扩增检测PCV，并且该方法可以区分PCV1和PCV-2，对其它病原微生物如PPV、PRRSV、SIV以及许多细菌不能检出。应用此方法对6省市的12个猪场的225份病料进行了检测，对阳性病料进行了病毒分离，对分离的病毒进行了电镜观察与序列测定，结果证实分离的病毒为PCV-2。

简介：甘蔗是重要的糖料作物,也是重要的能源作物。由于复杂的遗传背景、较低的可育性和缺乏优异种质资源等因素给甘蔗品种改良带来了很大的困难,通过转基因技术为甘蔗品种改良提供了有效的途径。而转基因植物的遗传稳定性是植物转基因育种过程中一项重要的研究课题。本研究通过一次多基因遗传转化,同时将四个目的基因导入甘蔗品种新台糖22号中。通过PCR检测,对转基因甘蔗T_0、T_1和T_2代的遗传稳定性进行分析;通过外源蛋白快速试纸条检测,对转基因植株四个外源基因中的基因（bar抗除草剂基因和cry1Ab抗虫基因）蛋白表达进行检测。证明一次四基因遗传转化的甘蔗转基因株系,在T_0代出现了部分基因丢失的现象,且T_0代甘蔗的主茎和分蘖可能为不同的转基因事件。但如果是四个基因均能完整整合到基因组中的株系,则四个基因可以在T_0、T_1和T_2代中得到稳定遗传,也可以稳定的检测得到外源基因蛋白的表达。

简介：PCR-DGGE技术已经发展成为研究微生物的群落结构和遗传多样性的有效工具。在世界水产养殖业的养殖系统微生态学、肠道细菌微生态学和益生菌研究中都取得了一系列的应用成果，而在我国冷水鱼的研究中应用还较少。本文介绍了PCR-DGGE技术的特性及其在世界水产养殖业研究中的应用，分析了其在我国冷水鱼微生态学研究中的应用前景。

简介：以感染病毒病的辣椒叶片为材料，分别用改进的Trizol试剂提取法、异硫氰酸胍提取法、改进的酚一SDS提取法提取总RNA，经过RT—PCR，利用CMV和TMV的病毒外壳蛋白设计特异引物检测。结果表明：改进的Trizol试剂提取法能获得较高质量和产量的总RNA，可以单人大批次提取，并在辣椒病毒病检测中能稳定而准确地进行规模化RT—PCR检测。

简介：魏捷等(1998)对不同海拔地区珠芽蓼激发荧光F736F689比值的研究结果表明,F736F689比值随着海拔的升高而降低,说明光能随海拔升高更有利于向PSII分配。但对叶绿体超微结构的观测发现,随着海拔的升高,叶绿体基粒片层逐渐减少,基质片层逐渐增多。PSII随着海拔升高而减少,PSI却相反。较少的PSII和LHC-II分配较多的激发能,可能在于基质中存在较多的游离的LHC-II和LHC-I,它们有利于状态II向状态I的转换,使激发能有利于向PSII分配,从而使两个光系统间的光能分配达到平衡,维持最大的光合效率和光化活性

简介：本试验以无芒雀麦、垂穗披碱草、老芒麦、细茎冰草为试验材料,研究了干旱胁迫处理下不同禾本科牧草的叶绿素荧光参数、叶片电导率和脯氨酸（Pro）含量变化的对比。结果表明：随着干旱胁迫程度的加剧,4种禾草初始荧光（Fo）和非光化学淬灭系数（qN）呈现逐渐上升趋势,而最大荧光（Fm）,潜在光化学效率（Fv/Fo）,最大光化学效率（Fv/Fm）和光化学淬灭系数（qP）呈现逐渐下降趋势。上述参数的变化幅度因材料抗旱性强弱而异,这种差异可作为简便评价禾草抗旱性强弱的鉴定指标,因此,运用隶属函数对不同禾草抗旱性进行评价分析,得出抗旱性强弱次序为：垂穗披碱草〉无芒雀麦〉细茎冰草〉老芒麦。

简介：荧光原位杂交fluorescenceinsituhybridization，FISH）技术是一种简单而有效的染色体上物理定位DNA序列的技术。本文介绍了荧光原位杂交技术的基本原理以及实验流程，综述了近年来FISH技术在鱼类基因定位方面的应用，如来源于细菌人工染色体（bacterialartificialchromosome，BAC）文库的单拷贝基因的定位、核糖体基因和组蛋白基因等中度重复序列的定位、着丝粒特异序列和性别特异序列等高度重复序列的定位以及其他重复序列的定位等，用于研究特定基因定位、性染色体鉴定及种间杂交等遗传学问题，并展望了此技术在定位鱼类经济性状相关标记或基因、性别相关标记或基因及种特异染色体标记中的应用前景。