简介:CTLA4Ig是人CTLA4胞外区与人免疫球蛋白铰链区、CH2区、CH3区组成的融合蛋白,可以与B7结合,通过阻断B7与CD28的结合,从而阻断B7介导的T细胞活化必需的共刺激信号,可作为免疫抑制剂用于器官移植。将CTLA4Ig融合分子克隆到真核表达载体pCI-dhfr,并用脂质体方法转染到COS7和CHO-dhfr-细胞中,用氨甲喋呤筛选转染的CHO-dhfr-细胞。用RT-PCR、ELISA、细胞免疫荧光染色和Western-blot鉴定重组蛋白的表达。采用A蛋白纯化重组蛋白。
简介:Interleukin-4isacytokineproducedbyactivatedTcells,mastcells,andbasophilsthatelicitsmanyimportantbiologicalresponses[1](seeTab1).TheseresponsesrangefromtheregulationofhelperTcelldifferentiation[2]andtheproductionofIgE[3]totheregulationoftheadhesivepropertiesofendothelialcellsviaVCAM-1[4],Inkeepingwiththesediversebiologicaleffects,high-affinitybindingsitesforIL-4(Kd20to300pM)havebeendetectedonmanyhematopoieticandnon-hematopoieticcelltypesatlevelsrangingfrom50to5000sitespercell[5].ThisreviewwillfocusonthediscretesignaltransductionpathwaysactivatedbytheIL-4recxeptorandthecoordinationoftheseindividualpathwaysintheregulationofafinalbiologicaloutcome.
简介:目的:建立一种高效的末端限制性片段长度多态性(T-RFLP)方法,检测工程土壤细菌。方法:以深圳和香港两地不同土层(0.5,10,20和30m)的工程土壤为研究对象,提取并纯化总DNA,利用细菌16SrDNA基因通用引物8f-FAM/1492r进行PCR扩增,扩增产物分别用HhaⅠ、HaeⅢ和MspⅠ限制性内切酶酶切,酶切产物经毛细管电泳测序,序列上传至数据库进行分析。结果:经过比对分析,香港段土壤中大约存在细菌141属,235种;深圳段大约存在132属,206种;32个细菌种属只在香港土壤中有分布,3个细菌种属只在深圳土壤中有分布;植物病原细菌有14个种属。结论:建立的T-RFLP方法能够高效、快速地分析工程土壤细菌。
简介:我们分析了表示的基因(transcriptomes)和翻译的蛋白质(专业版--teomes)在肌肉纸巾和激活的CD4+和五种类型的CD8+T淋巴细胞(T房间),2糖尿病(T2DM)用Affymetrix微数组和集体spectrometry使遭到,并且把他们与匹配的非糖尿病的控制作比较。胰岛素受体(INSR)的基因表达,维生素D受体,胰岛素降级酶,Akt,胰岛素受体substrate-1(IRS-1),IRS-2,葡萄糖transporter4(GLUT4),并且glycolytic小径的酶被减少至少50%在T2DM比在控制。然而,有比在血浆房间glycoprotein-1的规定上面的双重的基因大,肿瘤坏死因素(在T2DM的TNF,和gluconeogenic酶比在控制。为INSR或TNF的基因silencing分别地导致了GLUT4的抑制或刺激。相应于上述翻译transcriptomes的分子的重量的Proteome侧面显示出在T2DM和控制之间的变化的不同模式。同时,在在肌肉和T2DM的激活的T房间之间的transcriptomes和proteomes的变化是可比较的。激活的T房间,类似于肌肉房间,表示胰岛素发信号和葡萄糖新陈代谢基因和基因产品。在结论,在T2DM的T房间和肌肉相对非糖尿病的控制在某些基因和基因产品的表示展出了差别。在transcriptomes的这些改变和在T2DM的proteomes可以涉及胰岛素抵抗。
简介:在相同的种植和管理条件下,对普通枇杷、栎叶枇杷、大瑶山枇杷和南亚枇杷等4个种210份种质资源的8个花序性状多样性进行鉴定,旨在为进一步的分类鉴定、利用研究提供参考依据。结果表明:(1)枇杷属种质资源的花序支轴姿态、花序支轴密度、花序支轴数、花序形状、花序长度、花序宽度、花瓣颜色、花冠直径Shannon-Weaver多样性指数1.352~2.951,存在丰富的多样性。(2)不同来源地的种质资源花序性状多样性水平差异较大,多样性指数最高的为云南(2.108),其次是贵州(1.962)、四川(1.953)、福建(1.900),美国的最低(1.137)。(3)云南、贵州的枇杷种质资源花序长度、宽度显著或极显著地大于其他地区;野生资源的花序长度、花序宽度和花冠直径均极显著地大于地方品种、选育品种。
简介:类Bscavenger受体(SR-Bs)是在vivo涉及各种各样的生理的进程的房间表面glycoproteins,包括xenobiotics的类脂化合物,绑定和吞噬作用的运输和新陈代谢,并且发信号。但是很少信息都不关于蚕SR-Bs是可得到的;为揭示他们的功能学习这些SR-Bs是必要的。在这研究,我们克隆BmSCRBQ4的全身的编码顺序,从蚕BombyxmoriL的SR-B基因。我们发现BmSCRBQ4基因由九exons和八introns组成,与编码456氨基酸的1371bp的一个开的读物框架。基因表示研究决定BmSCRBQ4送信人RNA(mRNA)在未受精的鸡蛋被表示,在胚胎的开发期间并且在整个幼虫的时期的多数。mRNA的表示在中间的内脏,中间的丝绸腺,以后的丝绸腺,头,integumentum,胖身体,睾丸和幼虫的B的卵巢被检测。moriDazao紧张,以及在蚕,房间衬里BmN和BmE。蛋白质表示研究发现BmSCRBQ4蛋白质仅仅在睾丸,胖身体和幼虫的中间的丝绸腺,以及在蚕房间行BmN和BmE被表示。BmSCRBQ4蛋白质在不同纸巾和房间在banding模式看了可变性什么时候由西方的弄污分析了。染色的Immunohistochemical证明BmSCRBQ4蛋白质本地化到组成的膜或这些纸巾的细胞的膜。这些结果显示那BmSCRBQ4基因可以在每纸巾在房间表面起一些生理地相关的作用。
简介:P16ink4是CDK抑制蛋白,参与调控细胞G1期至S期的转换。目前发现P16`(ink4)基因损伤与多种肿瘤的发生、发展有关,可能是功能上非常重要的抑癌基因。为了研究该基因的功能,以及突变对该基因功能的影响,本文应用RT-PCR方法,从Hela细胞中克隆了P16ink4cDNA。扩增得到556bp片段(包括引物两端酶切位点的16bp)克隆于M13载体,测定了其DNA序列。该序列包括了P16ink4cDNA编码区全部471bp,以及3’端69bp序列。表明P16ink4cDNA已成功地得到克隆。
简介:与一级的CD8约会主要组织亲和性抗原极大地提高T房间激活,但是这怎么被完成,不是清楚的。我们探讨CD8的调停抗体的结扎是否独自导致在T房间克隆改变的transcriptional的问题,用基因表示的连续分析。尽管它没能导致公开phenotypic变化,我们发现CD8结扎深刻地在T房间克隆改变抄写,在比得上由CD3的调停抗体的结扎导致了那的规模。然而,产生变化的特性与是实质地禁止的CD8结扎的网效果是不同的。我们推测那绑扎的CD8导致弱,T房间受体(TCR)调停了TCR对手的效果暗示的禁止的信号。我们的结果暗示CD8结扎独自不能因为它没能充分导致NFAT依赖的抄写,激活T房间克隆。
简介:ExperimentalautoimmuneencephalomyelitiscanbeinitiatedspontaneouslyanddevelopedprogressivelyinTCRtransgenicmicespecificformyelinbasicproteinwhenexposedtonon-sterileenvironment,thusmorecloselymimickinghumanmultiplesclerosis.Byintravenousadministrationofmyelinbasicprotein,wesucceededinrapidlyreversingtheclinicalandpathologicalsignsofprogressivespontaneousdiseaseinthesemice.ThemajorityoftransgenicTcellsofMBP-injectedmicewasdeleted,withdramaticallyincreasednumbersofapoptoticcells,inlymphnodesandspleen,butnotinthymus.Proliferativeresponsesofsingle
简介:[目的]建立具有潮霉素B(hygromycinB)抗性的3T3细胞系,用于转染目的基因(pTRE2-human-Ins)的ES阳性细胞克隆筛选的饲养层。[方法]通过脂质体转染的方法,将含有潮霉素B磷酸转移酶基因(hyg)的质粒pHyg导入NIH3T3细胞中,利用潮霉素B的药物选择特性,对转染细胞进行压力筛选,并对其进行PCR和southernblot鉴定。[结果]经300ug/ml的潮霉素B压力筛选后,获得了抗性细胞克隆。抗性NIH3T3细胞的形态和生长速度与正常NIH3T3细胞没有差异,特异性核苷酸引物检测抗性细胞基因组DNA,可以扩增出相应的核苷酸片段,Southernblot鉴定结果表明潮霉素基因片段已整合入潮霉素抗性NIH3T3细胞。[结论]本实验通过脂质体介导的方法成功地培育了潮霉素B抗性的NIH3T3细胞,为进行目的基因(pTRE2-human-Ins)转染ES细胞的阳性细胞克隆筛选打下了基础。
简介:在脂肪和肌肉房间,刺激胰岛素的葡萄糖举起被葡萄糖transporter主要调停4(GLUT4),哪个到响应胰岛素刺激的房间表面的从细胞内部的分隔空间的translocates。AS160是Akt的底层之一并且在调整胰岛素的GLUT4translocation起重要作用。在这研究,(RUVBL2)象RuvB一样蛋白质2用与集体spectrometry相结合的哺乳动物的双人脚踏车亲密关系纯化(龙头)作为新AS160有约束力的蛋白质被识别。在3T3-L1adipocytes,RUVBL2高度被表示并且在cytosol主要是分布式的。在adipocytes的RUVBL2的弄空通过减少刺激胰岛素的AS160phosphorylation禁止刺激胰岛素的GLUT4translocation和葡萄糖举起。然而,人的RUVBL2的介绍能颠倒这禁止的效果。这些数据建议RUVBL2通过它和AS160的相互作用在刺激胰岛素的GLUT4translocation起一个重要作用。
简介:POU抄写因素OCT4不仅在维持pluripotent和房间而且幕作为通过基因剂量的一个房间命运决定因素完成的胚胎的茎(ES)的自我更新的状态起一个必要作用。然而,控制细胞内部的OCT4蛋白质水平的分子的机制留下逃犯。这里,我们报导那人的WWP2,E3ubiquitin(Ub)蛋白质ligase,通过它的WW领域明确地与OCT4交往并且在vitro并且在vivo提高OCT4的Ub修正。我们首先证明在人的ES房间的内长的OCT4能被Ubpost-translationally修改。而且,我们发现WWP2以一种剂量依赖者方式,和WWP2的活跃地点半胱氨酸残余通过26Sproteasome支持了OCT4的降级在OCT4上为它的酶的活动和解朊的效果被要求。显著地,我们当WWP2表示是由特定的RNA干扰(RNAi)的downregulated时,内长的OCT4蛋白质水平显著地被提高的数据表演,建议那WWP2是为在人的ES房间维持合适的OCT4蛋白质水平的一个重要管理者。而且,北污点分析证明WWP2抄本在多样的人的织物/器官是广泛地在场的并且高度在无差别的人的ES房间表示了。然而,它的表示水平快速在区分的人的ES房间以后被减少,显示WWP2表示力量发展地被调整。我们的调查结果证明WWP2是在人的ES房间的OCT4蛋白质水平的一个重要管理者。