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  • 简介:摘要目的探讨circBIRC6对卵巢癌细胞顺铂耐药性的影响及其分子机制。方法体外培养卵巢癌细胞株SKOV3、卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP,采用脂质体介导法将si-NC、si-circBIRC6、si-circBIRC6+anti-miR-NC、si-circBIRC6+anti-miR-367-3p转染至SKOV3和SKOV3/DDP细胞,分别记作DDP+si-NC组、DDP+si-circBIRC6组、DDP+si-circBIRC6+anti-miR-NC组和DDP+si-circBIRC6+anti-miR-367-3p组,各组细胞中分别加入2 μg/ml的顺铂处理24 h。采用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞增殖抑制率,计算顺铂半数抑制浓度(IC50)值,实时荧光定量聚合酶链反应检测circBIRC6、miR-367-3p的基因表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡率,双荧光素酶报告实验验证circBIRC6、miR-367-3p的靶向关系,Western blot法检测细胞周期蛋白1(Cyclin D1)、Bcl-2、p21、Bax蛋白的表达水平。结果SKOV3细胞中circBIRC6的表达水平为1.00±0.05,低于SKOV3/DDP细胞(3.04±0.24,P<0.001);SKOV3细胞中miR-367-3p的表达水平为1.00±0.08,高于SKOV3/DDP细胞(0.54±0.05,P<0.001)。SKOV3细胞、SKOV3/DDP细胞增殖抑制率分别为(22.47±2.04)%和(8.84±0.71)%,IC50值分别为6.65±0.94和28.18±4.91,差异均有统计学意义(均P<0.05)。DDP+si-NC组SKOV3细胞增殖抑制率和细胞凋亡率[(22.19±2.19)%和(10.98±1.12)%]低于DDP+si-circBIRC6组[(74.18±5.36)%和(32.91±3.19)%,均P<0.05];DDP+si-NC组SKOV3/DDP细胞增殖抑制率和细胞凋亡率[(8.71±0.87)%和(7.39±0.63)%]低于DDP+si-circBIRC6组[(40.85±4.07)%和(25.31±2.53)%,均P<0.05]。DDP+si-circBIRC6组SKOV3、SKOV3/DDP细胞中Cyclin D1和Bcl-2蛋白表达水平低于DDP+si-NC组,p21和Bax蛋白表达水平高于DDP+si-NC组(均P<0.05)。双荧光素酶报告实验显示,miR-367-3p为circBIRC6的靶基因,抑制miR-367-3p的表达可降低抑制circBIRC6的表达对卵巢癌细胞增殖、凋亡及顺铂耐药性的作用。结论抑制circBIRC6的表达可能通过上调miR-367-3p的表达而抑制卵巢癌顺铂耐药细胞增殖及诱导细胞凋亡,从而降低细胞对顺铂的耐药性。

  • 标签: 卵巢肿瘤 circBIRC6 miR-367-3p 顺铂 耐药性 增殖 凋亡
  • 简介:摘要目的探讨微小RNA miR-369-3p靶向调控α-辅肌动蛋白4(ACTN4)表达对肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blot法分别检测肝癌及癌旁组织中miR-369-3p、ACTN4的表达水平。采用脂质体法将miR-369-3p mimics、miR-NC、si-ACTN4、si-NC转染至肝癌MHCC97H细胞。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率,双荧光素酶报告实验验证miR-369-3p对ACTN4的靶向调控作用,Western blot法检测细胞周期蛋白1(cyclin D1)、p21、B淋巴细胞瘤2 (Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白(Bax)的表达。结果肝癌组织中miR-369-3p mRNA的表达水平为0.46±0.04,低于癌旁组织(1.00±0.08, P<0.001);ACTN4 mRNA的表达水平为3.12±0.29,高于癌旁组织(1.01±0.09, P<0.001);ACTN4蛋白的表达水平为0.61±0.06,高于癌旁组织(0.25±0.03,P<0.001)。与miR-NC组细胞比较,miR-369-3p过表达肝癌MHCC97H细胞增殖能力降低(细胞培养72 h吸光度分别为0.71±0.06和1.26±0.11,P<0.001),G1期细胞比例升高[分别为(51.56±5.23)%和(31.14±3.36)%,P<0.001],S期细胞比例降低[分别为(14.33±1.45)%和(32.44±3.56)%,P<0.001)],细胞凋亡率升高[分别为(20.16±2.11)%和(6.25±0.64)% , P<0.001],cyclin D1和Bcl-2蛋白相对表达量降低(均P<0.001),p21和Bax蛋白相对表达量升高(均P<0.001)。与si-NC组比较,抑制ACTN4的表达后,肝癌MHCC97H细胞增殖能力降低(细胞培养72 h吸光度分别为0.78±0.07和1.24±0.12,P<0.001),G1期细胞比例升高[分别为(48.69±4.21)%和(30.33±3.01)%,P<0.001],S期细胞比例降低[(分别为18.54±1.61)%和(36.21±3.42)%,P<0.001],细胞凋亡率升高[分别为(18.32±1.82)%和(6.58±0.66)%,P<0.001],cyclin D1和Bcl-2蛋白水平降低(均P<0.001),p21和Bax蛋白水平升高(均P<0.001)。与miR-369-3p+pcDNA组比较,过表达ACTN4后,肝癌MHCC97H细胞增殖能力提高(细胞培养72 h吸光度分别为1.12±0.11和0.68±0.06,P<0.001),G1期细胞比例显著降低[(38.81±3.24)%和(51.80±4.57)%,P<0.001],S期细胞比例显著升高[(31.65±3.11)%和(15.69±1.44)%,P<0.001],细胞凋亡率降低[分别为(13.86±1.37)%和(22.69±2.24)%, P<0.001],cyclin D1和Bcl-2蛋白相对表达量升高(均P<0.001),p21和Bax蛋白相对表达量降低(均P<0.001)。结论miR-369-3p可通过靶向调控ACTN4的表达使肝癌细胞周期阻滞于G1期,抑制肝癌细胞增殖,促进肝癌细胞凋亡。

  • 标签: 肝肿瘤 miR-369-3p α-辅肌动蛋白4 增殖 凋亡
  • 简介:摘要目的探讨miR-92a-3p在老年骨质疏松症(osteoporosis,OP)中的表达情况及其在髋部脆性骨折中的诊断价值。方法借助美国国家生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information,NCBI)网站检索与OP、miRNA相关的数据集并进行分析与筛选获得目标miRNA。收集2020年1月至2020年6月期间,从山西医科大学第二医院骨科纳入53例OP患者与24例健康人的血清标本,将OP患者分为发生髋部脆性骨折组(OP_F组,30例)和未发生髋部脆性骨折组(OP_WF组,23例),分析受试者的骨密度与血清中的骨代谢标志物测量:钙、磷、甲状旁腺激素、25-羟基维生素D、骨碱性磷酸酶、血清c末端肽。利用qRT-PCR检测血清标本中目标miRNA的表达水平。χ2检验、t检验、斯皮尔曼等级相关、接收者操作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC曲线)分析miR-92a-3p表达水平与患者临床特征的潜在关系。结果从NCBI网站中分析得出miR-92a-3p在OP患者中表达较健康人水平升高(t=3.41,P=0.007),miR-1304-5p表达水平降低(t=5.13,P<0.001)。qRT-PCR实验证实以上结果,并进一步发现较OP_WF组,OP_F组中miR-92a-3p表达明显升高(t=3.01,P=0.004),但miR-1304-5p在两组间无明显差异(t=0.71,P=0.480)。OP患者组与健康对照组相比,BMI(t=2.71,P=0.008)、骨密度评分(t=29.02,P<0.001)、钙(t=61.20,P<0.001)、磷(t=2.54,P=0.013)、25-羟基维生素D(t=3.01,P=0.004)、骨碱性磷酸酶(t=12.56,P<0.001)、血清c末端肽(t=7.52,P<0.001)水平差异有统计学意义。OP_F组与OP_WF组相比,骨密度评分(t=2.08,P=0.042)、钙(t=15.75,P<0.001)、骨碱性磷酸酶(t=2.02,P=0.049)、血清c末端肽(t=3.39,P=0.001)的水平差异有统计学意义。骨密度评分、骨碱性磷酸酶浓度与miR-92a-3p的表达有关且分别呈负相关(r=-0.403,P=0.027)与正相关(r=0.416,P=0.022)。ROC曲线下面积为0.723,miR-92a-3p水平对诊断髋部脆性骨折具有潜在意义(P=0.006)。结论miR-92a-3p在OP中高表达,对诊断髋部脆性骨折具有生物学意义。

  • 标签: miR-92a-3p 骨质疏松症 髋部脆性骨折 骨密度 骨碱性磷酸酶 血清c末端肽
  • 简介:AbstractBackground:Long non-coding RNA (lncRNA) actin filament-associated protein 1 antisense RNA 1 (AFAP1-AS1) functions as a competing endogenous RNA to regulate target genes expression by sponging microRNAs (miRs) to play cancer-promoting roles in cancer stem cells. However, the regulatory mechanism of AFAP1-AS1 in cervical cancer (CC) stem cells is unknown. The present study aimed to provide a new therapeutic target for the clinical treatment of CC.Methods:Hyaluronic acid receptor cluster of differentiation 44 variant exon 6 (CD44v6)(+) CC cells were isolated by flow cytometry (FCM). Small interfering RNAs of AFAP1-AS1 (siAFAP1-AS1) were transfected into the (CD44v6)(+) cells. The levels of AFAP1-AS1 were measured by quantitative real-time PCR (qRT-PCR). Sphere formation assay, cell cycle analysis, and Western blotting were used to detect the effect of siAFAP1-AS1. RNA pull-down and luciferase reporter assay were used to verify the relationship between miR-27b-3p and AFAP1-AS1 or vascular endothelial growth factor (VEGF)-C.Results:CD44v6(+) CC cells had remarkable stemness and a high level of AFAP1-AS1. However, AFAP1-AS1 knockdown with siAFAP1-AS1 suppressed the cell cycle transition of G(1)/S phase and inhibited self-renewal of CD44v6(+) CC cells, the levels of the stemness markers octamer-binding transcription factor 4 (OCT4), osteopontin (OPN), and cluster of differentiation 133 (CD133), and the epithelial-mesenchymal transition (EMT)-related proteins Twist1, matrix metalloprotease (MMP)-9, and VEGF-C. In the mechanism study, miR-27b-3p/VEGF-C signaling was demonstrated to be a key downstream of AFAP1-AS1 in the CD44v6(+) CC cells.Conclusions:LncRNA AFAP1-AS1 knockdown inhibits the CC cell stemness by upregulating miR-27b-3p to suppress VEGF-C.

  • 标签: Hyaluronic acid receptor cluster of differentiation 44 variant exon 6 Cell stemness Cervical cancer Long non-coding RNA actin filament-associated protein 1 antisense RNA 1 MicroRNA-27b-3p
  • 简介:摘要目的探讨miR-513a-3p靶向鼠双微体基因2(MDM2)对胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法采用脂质体法将miR-NC、miR-513a-3p、anti-miR-NC、anti-miR-513a-3p、si-NC、si-MDM2、miR-513a-3p+pcDNA3.1和miR-513a-3p+pcDNA3.1-MDM2转染至BGC-823细胞中,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-513a-3p的表达水平,采用Western blot检测cyclin D1、MMP-2、p21、E-cadherin和MDM2蛋白的表达水平,四甲基偶氮唑蓝法检测各组胃癌细胞BGC-823的活性,Transwell法检测各组胃癌细胞BGC-823的迁移和侵袭能力,双荧光素酶报告基因检测实验检测miR-513a-3p与MDM2的靶向关系。结果胃癌细胞BGC-823、MGC-803中miR-513a-3p的表达水平分别为0.21±0.02和0.34±0.03,与胃上皮细胞GES-1(0.76±0.08)比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。培养24、48和72 h后,miR-NC组细胞的吸光度(A)值分别为0.57±0.05、1.03±0.10和1.43±0.14,miR-513a-3p组细胞的A值分别为0.36±0.03、0.48±0.05和0.63±0.06,差异均有统计学意义(均P<0.05);miR-NC组细胞的迁移和侵袭数分别为(130±11.80)个和(117±10.60)个,miR-513a-3p组细胞分别为(58±5.64)个和(50±5.13)个,差异均有统计学意义(均P<0.05)。培养24、48和72 h后,si-NC组细胞的A值分别为0.53±0.05、0.95±0.10和1.36±0.14,si-MDM2组细胞的A值分别为0.39±0.04、0.57±0.06和0.80±0.08;si-NC组细胞的迁移和侵袭数分别为(141±12.02)个和(109±10.60)个,si-MDM2组的迁移和侵袭数分别为(66±6.67)个和(61±6.18)个,差异均有统计学意义(均P<0.05)。培养24、48和72 h后,miR-513a-3p+pcDNA3.1组细胞的A值分别为0.34±0.03、0.46±0.05和0.61±0.06,miR-513a-3p+pcDNA3.1-MDM2组细胞的A值分别为0.48±0.05、0.82±0.08和1.17±0.12,差异均有统计学意义(均P<0.05);miR-513a-3p+pcDNA3.1组细胞的迁移和侵袭数分别为(56±5.71)个和(51±5.16)个,miR-513a-3p+pcDNA3.1-MDM2组分别为(113±10.28)个和(104±10.02)个,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论miR-513a-3p可抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,其机制可能与靶向调控MDM2的表达有关,可为胃癌的预防和治疗提供新靶点。

  • 标签: 胃肿瘤 miR-513a-3p 鼠双微体基因2 增殖 迁移 侵袭
  • 简介:摘要目的探讨miR-148b-3p对胶质瘤细胞侵袭和迁移的影响及其作用机制。方法体外培养人胶质瘤U251细胞株,采用Lipofectamine 2000转染试剂将miR-148b-3p模拟物或阴性对照转染至U251细胞,分别记为miR-148b-3p组和阴性对照组,同时设置空白对照组。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测转染效果,Transwell实验检测各组U251细胞的侵袭能力,划痕实验检测各组U251细胞的迁移能力,酶联免疫吸附试验检测细胞上清液中基质金属蛋白酶2(MMP-2)和MMP-9的水平,Western blot法检测细胞中Wnt信号通路相关蛋白的表达。结果qRT-PCR显示,miR-148b-3p组U251细胞中miR-148b-3p的表达水平为2.45±0.25,高于阴性对照组(0.97±0.10)和空白对照组(1.00±0.11),差异均有统计学意义(均P<0.05)。Transwell实验显示,miR-148b-3p组侵袭细胞数为(50.62±5.36)个,与阴性对照组[(108.84±10.14)个]和空白对照组[(113.40±10.06)个]比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。划痕实验结果显示,miR-148b-3p组细胞的迁移率为(23.19±2.50)%,与阴性对照组[(51.81±5.25)%]和空白对照组[(52.06±5.33)%]比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。过表达miR-148b-3p能够抑制MMP-2和MMP-9的表达,下调Wnt1和GSK-3β蛋白的表达。结论miR-148b-3p能够通过抑制Wnt信号通路的激活抑制人胶质瘤U251细胞的侵袭和迁移能力。

  • 标签: miR-148b-3p Wnt信号通路 胶质瘤细胞 侵袭 迁移
  • 简介:摘要目的探讨miR-200c-3p对肾母细胞瘤SK-NEP-1细胞株增殖与凋亡的调控作用。方法收集2015年1月至2019年8月深圳市儿童医院收治肾母细胞瘤患儿新鲜的瘤组织和瘤旁肾组织30例。实验分为模拟物阴性对照组、miR-200c-3p组及miR-200c-3p抑制剂组。采用实时荧光定量PCR法检测30例配对的肾母细胞瘤肿瘤组织、瘤旁肾组织及肾母细胞瘤SK-NEP-1细胞和人胚肾293FT细胞系中miR-200c-3p的表达情况。采用细胞计数盒8(CCK-8)细胞增殖实验测定miR-200c-3p抑制SK-NEP-1细胞增殖的效果,流式细胞术检测miR-200c-3p对SK-NEP-1细胞周期及凋亡的影响。裸鼠原位移植实验检测miR-200c-3p过表达对体内成瘤的影响,对瘤体组织进行HE染色并病理形态的观察、免疫组织化学染色检测移植瘤组织中核增殖指数Ki-67的增殖情况;Western blot法检测3组裸鼠移植瘤组织中B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及活性半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved Caspase-3)的表达水平。结果30例患儿miR-200c-3p的表达水平在肾母细胞瘤组织(0.420±0.587)中明显低于配对的瘤旁肾组织(1.500±0.504)(t=8.613,P<0.001)。miR-200c-3p的表达水平在SK-NEP-1细胞中(0.363±0.006)与人胚肾293FT细胞(0.807±0.186)比较也显著下降(t=4.136,P<0.05)。CCK-8法表明按照组间和时间交互效应miR-200c-3p可抑制SK-NEP-1细胞体外增殖(F=16.81,P<0.001)。流式细胞术检测肾母细胞瘤细胞周期与凋亡显示,miR-200c-3p能使SK-NEP-1细胞阻滞在G0/G1期及S期(t=-7.770,P<0.01;t=11.501,P<0.001),且促进早期凋亡率增加,晚期凋亡率降低(t=-22.270,P<0.001;t=4.612,P<0.01)。裸鼠原位移植实验显示与模拟物阴性对照组比较,miR-200c-3p组肿瘤体积[(2.469±0.914) cm3比(0.419±0.16) cm3]明显缩小(t=5.407,P<0.001),而miR-200c-3p抑制剂组[(1.627±0.189) cm3]差异不明显(t=2.209,P=0.052)。Western blot实验示miR-200c-3p上调了凋亡蛋白cleaved Caspase-3和Bax的表达水平(t=-47.000、-82.730,均P<0.001),但下调了抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平(t=53.740,P<0.001)。结论miR-200c-3p能抑制SK-NEP-1细胞增殖及促进细胞凋亡,抑制裸鼠移植瘤的生长并起到抑癌基因的作用。

  • 标签: miR-200c-3p 肾母细胞瘤 增殖 凋亡
  • 简介:摘要:目的 探讨膀胱癌中miR-1-3p靶向DARS2介导MAPK通路及临床意义。方法 数据来源于TCGA数据库。预测DARS2上游miRNA,应用R语言进行miRNA-mRNA共表达分析,最终确定miR-1-3p。应用R语言分析miR-1-3P在膀胱癌与癌旁组织之间表达差异;分析DARS2与miR-1-3P相关性;分析miR-1-3P高、低表达膀胱癌患者两组之间总生存时间有无差异。应用GEPIA数据库进行DARS2与MAPK通路靶分子相关性分析。结果 通过预测及共表达分析,最终确定has-miR-1-3p;膀胱癌中miR-1-3P表达明显下调较癌旁组织;DARS2表达与miR-1-3P呈负相关,相关系数-0.17;miR-1-3p高表达膀胱癌患者组生存期明显延长。相关性分析膀胱癌组织中DARS2与MAPK通路靶因子ERK1、ERK2、JNK1、JNK2表达均成显著正相关。结论 生信分析表明膀胱癌中miR-1-3p靶向调节DARS2表达抑制膀胱癌进展可能,同时DARS2表达影响MAPK通路靶分子水平,为进一步实验验证奠定研究基础,可能成为膀胱癌治疗靶点的潜力。

  • 标签: miR-1-3p DARS2 MAPK通路 膀胱癌
  • 简介:摘要目的探讨微小RNA(miR)-128-3p在胃癌中的表达及其临床意义。方法通过qRT-PCR检测2014年1月至2016年1月126例在河南省肿瘤医院手术切除的胃癌和癌旁组织中miR-128-3p表达水平,同时检测miR-128-3p在胃癌细胞系中表达情况,在AGS和BGC823细胞中转染miR-128-3p抑制剂后观察其对胃癌细胞侵袭、迁移能力的影响,寻找miR-128-3p直接调控的下游靶基因。结果miR-128-3p在胃癌组织中的表达水平(6.30±2.39)高于癌旁组织(4.17±0.9)(P<0.05)。miR-128-3p表达水平与脉管癌栓、pN分期和pTNM分期有关(均P<0.05),miR-128-3p高表达的患者预后较差(P<0.05)。miR-128-3p在胃癌细胞系中高表达(P<0.05)。沉默miR-128-3p明显抑制AGS和BGC823细胞的迁移和侵袭。在线靶点预测工具和双荧光素酶报告基因显示CLDN18是miR-128-3p直接调控的下游靶基因,抑制CLDN18表达后细胞的侵袭和迁移能力明显增强。结论miR-128-3p高表达与胃癌患者较差的预后有关。

  • 标签: 胃肿瘤 细胞迁移分析 肿瘤侵袭
  • 简介:摘要目的探讨姜黄素调控miR-199a-3p的基因表达对前列腺癌C4-2细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法将miR-199a-3p抑制物及阴性对照转染至C4-2细胞中,并分别标记为anti-miR-199a-3p组和anti-miR-con组;将仅加入脂质体的C4-2细胞标记为对照组。运用MTT法检测通过姜黄素(0、20、40、80 μmol/L)处理的C4-2细胞的增殖情况。40 μmol/L姜黄素处理C4-2细胞后,Transwell法检测细胞的迁移和侵袭能力;qRT-PCR检测细胞的miR-199a-3p表达量。将inhibitor NC、miR-199a-3p inhibitor转染至C4-2细胞中,再用40 μmol/L姜黄素处理48 h,采用MTT法、Transwell法检测各组细胞的增殖、迁移和侵袭情况;Western blot检测各组C4-2细胞中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、β-catenin、Cyclin D1和c-Myc的蛋白表达量。结果与对照组比较,姜黄素能明显抑制C4-2细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05)。姜黄素(40 μmol/L)处理后,C4-2细胞中miR-199a-3p的表达量显著增加(P<0.05)。抑制miR-199a-3p的表达,可逆转姜黄素对C4-2细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用(P<0.05)。使用姜黄素处理miR-199a-3p低表达的C4-2细胞后,与anti-miR-con组相比,anti-miR-199a-3p组C4-2细胞的MMP-2、MMP-9的表达量显著增加(P<0.05),β-catenin、Cyclin D1和c-Myc蛋白表达量均显著增加(P<0.05)。结论姜黄素可上调miR-199a-3p的表达,从而抑制前列腺癌C4-2细胞的增殖、迁移和侵袭。

  • 标签: 前列腺肿瘤 姜黄素 miR-199a-3p 细胞增殖 细胞运动
  • 简介:目的探讨检测血清miR-1273g-3p水平诊断慢性丙型肝炎(CHC)患者肝纤维化分期的效能.方法我院诊治的57例CHC患者和同期入选的21例经体检显示为正常的健康人,采用实时荧光定量PCR法检测血清miR-1273g-3p水平.CHC患者接受长效干扰素α2b联合利巴韦林标准疗法治疗12m,并接受肝穿刺活检行组织病理学检查.结果13例肝组织呈F0期患者血清miR-1273g-3p相对水平为(1.02±0.3),20例F1-2期患者为(1.68±0.26),24例F3-4期患者为(4.21±0.42),存在肝纤维化的CHC患者血清miR-1273g-3p相对水平显著高于健康人(1.03±0.2),P〈0.05;在抗病毒治疗12m末,CHCF0期、F1-2期和F3-4期患者血清miR-1273g-3p相对水平依次变化为(1.03±0.4)、(1.43±0.22)和(3.97±0.2),均显著低于治疗前(P〈0.05);在治疗前,分别以血清miR-1273g-3p水平〉1.68和血清miR-1273g-3p水平〉4.20为截断点诊断存在肝纤维化和显著肝纤维化,其ROC曲线下面积(AUC)分别为0.830,95%CI为0.714~0.973,诊断的灵敏度为72.2%,特异度为86.4%,和0.864,95%CI为0.701~0.976,诊断的灵敏度为83.6%,特异度为78.4%;在治疗后,经肝组织病理学检查发现CHC患者F0期、F1期、F2期、F3、F4期依次为15例、9例、14例、11例、8例,血清miR-1273g-3p水平诊断存在肝纤维化和显著肝纤维化的效能仍然较好.结论血清miR-1273g-3p水平随着CHC患者肝纤维化进展而逐渐升高,在抗病毒治疗后,随着肝纤维化的缓解而降低,因而具有-定的判断肝纤维化程度的效能,值得进一步研究.

  • 标签: 慢性丙型肝炎 肝纤维化 血清miR-1273g-3p 诊断
  • 简介:摘要目的探究LncRNA ZBED3-AS1调控miR-339-5p/Notch 1在骨质疏松大鼠成骨细胞增殖分化中的作用。方法构建假手术(Sham)组和模型(Model)组大鼠模型,对大鼠的骨密度进行检查观测大鼠建模情况。分离大鼠成骨细胞,qRT-PCR检测细胞中ZBED3-AS1、miR-339-5p的表达。对Sham组和Model组大鼠成骨细胞进行分组后转染。CCK8、茜素红(AR-S)染色、碱性磷酸酶(ALP)染色检测各组细胞增殖分化能力。FISH实验测定ZBED3-AS1在细胞中的分布。双荧光素酶报告证实ZBED3-AS1与miR-339-5pmiR-339-5p和Notch 1之间的关系。Western blot检测Notch通路相关因子的表达。结果检测股骨骨密度发现,Model组大鼠骨密度明显低于Sham组大鼠(P=0.0 057)。与Sham组大鼠比较,Model组大鼠成骨细胞中ZBED3-AS1呈低表达,而miR-339-5p呈高表达(均P<0.05)。过表达ZBED3-AS1能促进成骨细胞的增殖分化;而敲减ZBED3-AS1则能抑制成骨细胞增殖分化(均P<0.05)。ZBED3-AS1作为ceRNA调控miR-339-5p(均P<0.05)。过表达miR-339-5p能抑制成骨细胞的增殖分化能力,而该作用可被ZBED3-AS1过表达部分挽救。Notch 1被证实为miR-339-5p的作用靶点,且干预ZBED3-AS1/miR-339-5p的表达能影响Notch 1的蛋白表达,ZBED3-AS1/miR-339-5p对成骨细胞的调控可能是通过Notch通路实现的。结论ZBED3-AS1能作为ceRNA调控miR-339-5p,进而影响骨质疏松大鼠成骨细胞增殖分化。

  • 标签: ZBED3-AS1 miR-339-5p 骨质疏松 成骨细胞 增殖 分化
  • 简介:摘要目的探讨微小RNA-338-3p(miR-338-3p)对脉络膜微血管内皮细胞增生和凋亡的影响及其调控机制。方法体外培养人脉络膜微血管内皮细胞,将培养的细胞分为血管内皮生长因子(VEGF)组和正常对照组,正常对照组细胞常规培养,VEGF组细胞应用VEGF处理24 h;将VEGF组培养的细胞分为4个亚组,分别将阴性对照(miR-NC)、miR-338-3p拟似物、miR-338-3p拟似物+pcDNA、miR-338-3p拟似物+pcDNA-TCF4转染至脉络膜微血管内皮细胞后用VEGF处理24 h。采用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测细胞中miR-338-3p和TCF4相对表达量;采用MTT法检测细胞增生率以评估细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率;行双荧光素酶报告实验验证miR-338-3p与TCF4的靶向关系;采用Western blot法检测细胞中增生标记蛋白细胞增生核抗原-67(Ki-67)、增生细胞核抗原(PCNA)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(bax)、B淋巴细胞瘤-2(bcl-2)蛋白相对表达量。结果与正常对照组比较,VEGF组细胞中miR-338-3p mRNA表达水平显著降低,TCF4 mRNA表达水平显著升高,细胞增生率显著升高,细胞凋亡率显著降低,细胞中Ki-67、PCNA、bcl-2蛋白表达水平显著升高,bax蛋白水平显著降低,差异均有统计学意义(均P<0.05);与VEGF+miR-NC组比较,VEGF+miR-338-3p组细胞增生率显著降低,细胞凋亡率显著升高,细胞中Ki-67、PCNA、bcl-2蛋白表达水平显著降低,bax蛋白表达水平显著升高,差异均有统计学意义(均P<0.05);双荧光素酶报告实验证实miR-338-3p可靶向结合TCF4;与VEGF+miR-338-3p+pcDNA组比较,VEGF+miR-338-3p+pcDNA-TCF4组细胞增生率显著升高[(56.48±13.20)% vs.(96.24±16.24)%],细胞凋亡率显著降低[(30.59±3.57)% vs.(12.36±1.29)%],细胞中Ki-67、PCNA、bcl-2蛋白表达水平显著升高(0.41±0.11 vs. 0.96±0.19;0.44±0.10 vs. 0.97±0.20;0.55±0.12 vs. 0.98±0.15),bax蛋白表达水平显著降低(0.87±0.13 vs. 0.42±0.11),差异均有统计学意义(t=5.700、14.408、7.516、7.111、6.715、7.927,均P<0.01)。结论miR-338-3p过表达可负向调控TCF4在细胞中的表达量,从而抑制脉络膜微血管内皮细胞的增生及诱导细胞凋亡。

  • 标签: miR-338-3p T细胞生长因子4 脉络膜微血管内皮细胞 增生 凋亡
  • 简介:Inthispaper,itisprovedthat,given3controlpointsA,BandC,ifthecamera'sopticalcenterOliesononeofthethreeplanesperpendiculartotheplaneABCandgoingthroughoneofthethreealtitudesofthetriangleABC,andadditionallyitsprojectionontheplaneABCiswithinthecircumscribedcircleofthetriangle,thatis,Oiswithintheso-called'dangercylinder',thenthecorrespondingP3Pproblem{O,(ABC)}musthave4positivesolutions.Thisresultispurelygeometrical,andmoreinstructive.Itcanbringsomenewinsightintoabetterunderstandingofmultiple-solutionprobleminthePnPproblem,andcouldbeusedassometheoreticalguidetoarrangecontrolpointsinrealapplications.

  • 标签: 计算机图象 P3P问题 多重解 空间控制 线性传输
  • 简介:摘要目的探讨微小RNA-21(miR-21)和miR-17-5p在乳腺癌患者血浆外泌体中的表达水平及其诊断价值。方法选取2017年6月至2018年3月于成都市第七人民医院就诊的86例乳腺癌患者为乳腺癌组,选取同期体检健康女性45例为对照组。采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-21、miR-17-5p在两组血浆外泌体中的表达水平。根据qRT-PCR检测结果将乳腺癌患者分为miR-17-5p高表达组及低表达组,miR-21高表达组及低表达组,比较分析其与乳腺癌患者临床病理参数的关系。采用受试者工作特征曲线(ROC)分析血浆外泌体miR-21、miR-17-5p对乳腺癌的诊断价值。结果乳腺癌组患者血浆外泌体miR-17-5p表达水平显著低于对照组(P<0.05),而miR-21表达水平显著高于对照组(P<0.05);miR-17-5p单独检测时曲线下面积(AUC)为0.677,敏感度为58.14%,特异度为75.56%,截断值为0.72;miR-21单独检测时AUC为0.694,敏感度为59.30%,特异度为77.78%,截断值为1.68;联合检测时敏感度为96.51%,特异度为95.56%,准确性为96.18%;联合检测诊断乳腺癌的敏感度、特异度及准确性均显著高于单项检测(P<0.05)。血浆外泌体miR-17-5pmiR-21表达水平均与TNM分期、分化程度、淋巴结转移、cerbB-2及Ki-67有关(P<0.05)。结论血浆外泌体低表达的miR-17-5p与高表达的miR-21均可作为诊断乳腺癌的潜在生物学标志物。

  • 标签: 血浆 外泌体 乳腺肿瘤 微小RNA-17-5p 微小RNA-21 诊断
  • 简介:摘要目的观察微小RNA(miRNA,miR)-1277-5p过表达对卵巢癌SKOV-3细胞增殖和凋亡的影响并探讨其机制。方法将对数生长期的SKOV-3细胞分为NC组和miR-1277-5p组,分别转染对照模拟物和miR-1277-5p模拟物。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组SKOV-3细胞miR-1277-5p表达水平。集落形成实验检测各组SKOV-3细胞增殖。流式细胞术检测SKOV-3细胞凋亡变化。RNAhybrid预测miR-1277-5p的靶基因。qRT-PCR和蛋白质印迹(Western blot)检测靶基因mRNA和蛋白的表达。结果NC组和miR-1277-5p组SKOV-3细胞中miR-1277-5p的表达分别为(1.22±0.42)和(13.22±1.42),NC组明显少于miR-1277-5p组(P<0.01)。与NC组比较,miR-1277-5p组集落的数量较少(P<0.01),细胞凋亡率明显较高(P<0.01)。miR-1277-5p的靶基因可能是PHD锌指蛋白8(PHF8)。与NC组比较,miR-1277-5p组SKOV-3细胞中PHF8基因表达明显降低(P<0.01)。结论miR-1277-5p可能通过抑制PHF8基因表达,降低卵巢癌SKOV-3细胞的增殖并促进其凋亡。

  • 标签: 卵巢癌 miR-1277-5p PHF8 增殖 凋亡
  • 简介:摘要目的探讨circ-PRKDC对肺癌细胞增殖、凋亡和放射敏感性的影响及分子机制。方法培养正常肺上皮细胞BEAS-2B和肺癌细胞系NCI-H1299、NCI-H2170、NCI-H1975。将NCI-H1299细胞分为si-NC、si-PRKDC、pcDNA-NC、pcDNA-PRKDC、miR-NC、miR-505-3p、anti-miR-NC、anti-miR-505-3p、si-PRKDC+anti-miR-NC、si-PRKDC+anti-miR-505-3p组。RT-qPCR检测circ-PRKDC和miR-505-3p的表达水平;蛋白质印迹法检测蛋白表达;MTT检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;平板克隆形成实验检测细胞放射敏感性;双荧光素酶报告实验检测circ-PRKDC和miR-505-3p的靶向关系。结果与BEAS-2B细胞相比,NCI-H1299、NCI-H2170、NCI-H1975细胞circ-PRKDC表达水平升高(3.65、3.10、2.67∶1.00,P<0.05),miR-505-3p表达水平降低(0.42、0.50、0.54∶1.02,P<0.05)。低表达circ-PRKDC后CyclinD1表达水平降低(0.42∶0.81,P<0.05),Cleaved-caspase-3和γ-H2AX表达水平升高[(0.71∶0.33,P<0.05)和(0.89∶0.465),P<0.05];细胞A值降低(0.413∶0.839,P<0.05);细胞凋亡率升高(20.35∶6.21,P<0.05);细胞存活分数降低(P<0.05);β-catenin表达水平降低(0.35∶0.73,P<0.05)。miR-505-3p高表达后CyclinD1表达水平降低(0.34∶0.83,P<0.05),Cleaved-caspase-3(0.65∶0.32,P<0.05)和γ-H2AX (0.96∶0.45,P<0.05)表达水平升高,细胞A值降低(0.386∶0.851,P<0.05),细胞凋亡率升高(16.38∶6.20,P<0.05),细胞存活分数降低(P<0.05)。与miR-NC比较,miR-505-3p组转染circ-PRKDC野生型报告质粒的细胞荧光素酶活性降低(0.44∶1.00,P<0.05)。下调miR-505-3p能逆转circ-PRKDC低表达对NCI-H1299细胞增殖、凋亡和放射敏感性以及β-catenin表达的影响。结论低表达circ-PRKDC可能通过上调miR-505-3p抑制肺癌细胞增殖,促进凋亡以及增强细胞的放射敏感性,且其可能与Wnt/β-catenin信号通路有关。

  • 标签: circ-PRKDC基因 miR-505-3p基因 细胞增殖 细胞凋亡 放射敏感性 肺癌细胞系
  • 简介:摘要目的探讨吡格列酮在减轻脓毒症小鼠炎症反应及脾脏损伤中的作用机制。方法选取6~8周龄、SPF级健康雄性BALB/c小鼠60只,按随机数字表法分为对照组、脓毒症模型组(lipopolysaccharide group, LPS组)和吡格列酮干预组(吡格列酮+LPS组),每组20只。采用腹腔注射LPS 10 mg/kg制备脓毒症小鼠模型,对照组注射等量生理盐水,吡格列酮干预组为连续吡格列酮60 mg/kg灌胃3 d后腹腔注射LPS,再连续吡格列酮灌胃2 d。分别于6 h、12 h、24 h、48 h取各组小鼠眼眶血,采用酶联免疫吸附试验检测白细胞介素(interleukin, IL)-6、IL-10、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α, TNF-α)和高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1, HMGB1)的水平。取血后处死小鼠取脾脏组织,采用苏木素-伊红染色评估脾脏病理损伤;用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应检测miR-142-3p和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptor γ, PPARγ)mRNA的表达水平。多组间的差异比较采用单因素方差分析,两组间的比较采用LSD-t检验,相关性分析采用Pearson相关性分析。结果与对照组相比,LPS组在6 h、12 h、24 h、48 h血清中的IL-6、IL-10、TNF-α及HMGB1均明显升高(均P<0.01),应用吡格列酮干预组促炎因子IL-6和TNF-α在6 h、12 h、24 h、48 h较LPS组下降(均P<0.01),促炎因子HMGB1在12 h、24 h、48 h较LPS组下降(均P<0.01),抑炎因子IL-10在12 h、24 h及48 h较LPS组升高(均P<0.01)。LPS组脾脏脾小结内细胞排列疏松,脾小结结构散乱,可见大量细胞坏死及炎性细胞浸润;吡格列酮干预组细胞坏死及炎性细胞浸润有所减少。与LPS组相比,吡格列酮干预组在6 h、12 h、24 h和48 h脾脏中miR-142-3p和PPARγ均较LPS组升高(均P<0.001),脾脏中miR-142-3p和PPARγ存在正相关(r=0.916,P<0.001),而miR-142-3p和HMGB1存在负相关(r=-0.884,P<0.001)。结论吡格列酮可能通过miR-142-3p来靶向调节HMGB1的表达来减轻脓毒症小鼠的炎症反应及脾脏损伤。

  • 标签: 脓毒症 吡格列酮 过氧化物酶体增殖物激活受体γ 微小RNA-142-3p 脾脏
  • 简介:摘要目的探讨微小RNA(miR)-5590-3p对转化生长因子βⅡ型受体(TGFBR2)基因表达的抑制作用及对胃癌细胞HS-746T侵袭和增殖的影响。方法体外培养胃癌细胞系,实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测胃癌组织和细胞系中miR-5590-3p的表达。采用脂质体转染法分别转染miR-NC和miR-5590-3p模拟物至胃癌细胞HS-746T中,分别命名为miR-5590-3p组和miR-NC组。qRT-PCR检测转染效果。Transwell实验和CCK-8实验检测转染后胃癌细胞HS-746T侵袭和增殖能力。生物信息学软件预测和双荧光素酶报告基因系统验证miR-5590-3p的靶基因。qRT-PCR和Western blot检测转染后细胞中TGFBR2及下游蛋白的表达。结果miR-5590-3p在胃癌组织的表达明显低于癌旁组织(P<0.01)。miR-5590-3p在胃癌细胞系的表达明显低于正常胃黏膜上皮细胞(P<0.05),在HS-746T细胞中表达最低(P<0.01)。转染后miR-5590-3pmiR-5590-3p的表达(11.76±0.21)明显高于miR-NC组(1.06±0.21),差异有统计学意义(P<0.01)。miR-NC组和miR-5590-3p组侵袭细胞数量分别为(101.20±15.47)个和(26.53±6.53)个,miR-5590-3p组细胞侵袭能力明显下降(P<0.01)。与miR-NC组比较,miR-5590-3p组细胞增殖能力明显降低(P<0.05)。生物信息学软件显示miR-5590-3p的靶基因是TGFBR2。双荧光素酶报告基因系统证实miR-5590-3p可靶向结合TGFBR2基因(P<0.01)。Western blot结果显示,与miR-NC组比较,miR-5590-3p组HS-746T细胞中TGFBR2的表达明显降低(P<0.01)。肿瘤侵袭相关蛋白ZEB-1、ZEB-2表达降低,细胞周期相关蛋白CDK1和Cyclin B表达降低。结论miR-5590-3p可通过靶向结合并调控TGFBR2基因的表达,抑制胃癌细胞HS-746T的侵袭和增殖能力。

  • 标签: 微RNAs 胃肿瘤 细胞系,肿瘤 受体,转化生长因子β2 细胞增殖
  • 简介:摘要目的探讨Circ_002770调控微小RNA(miR)-331-3p对黑色素瘤上皮-间充质转化(EMT)和侵袭的影响。方法选取32例黑色素瘤患者的癌组织及癌旁组织,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测黑色素瘤组织和细胞中Circ_002770和miR-331-3p的表达水平;双荧光素酶报告实验检测miR-331-3p与Circ_002770之间的靶向关系;采用蛋白质印迹法(Western blot)检测EMT程度;Transwell小室法检测细胞侵袭。组间差异采用单因素方差分析进行统计分析。结果黑色素瘤组织(3.01±0.21)中Circ_00277的表达显著高于癌旁组织(1.00±0.06),差异有统计学意义(t=72.113,P<0.05);MM细胞中Circ_00277的表达显著高于正常皮肤上皮细胞,差异有统计学意义(t=98.021,P<0.05)。黑色素瘤组织(0.41±0.16)中miR-331-3p的表达显著低于癌旁组织(1.00±0.05),差异有统计学意义(t=36.892,P<0.05);MM细胞中miR-331-3p的表达显著低于正常皮肤上皮细胞,差异有统计学意义(t=187.239,P<0.05)。Circ_002770发挥分子海绵的作用抑制miR-331-3p表达;miR-331-3p与circ_002770野生型荧光载体共转染后A357细胞活性(0.46±0.21)显著低于对照组(1.00±0.23),差异有统计学意义(t=23.823,P<0.05)。而miR-331-3p与circ_002770突变型荧光载体共转染后A357细胞活性无明显变化(1.01±0.40比1.05±0.31)。低表达Circ_002770或过表达miR-331-3p均抑制黑色素瘤细胞的侵袭与EMT(P<0.05)。结论Circ_002770可吸附miR-331-3p促进黑色素瘤细胞的EMT和侵袭,进而影响黑色素瘤的进展。

  • 标签: 微小RNA 黑色素瘤 上皮-间充质转化 侵袭