摘要
摘要目的探讨DKK1(Dickkopf1)通过Wnt/β-catenin信号通路对人晶状体上皮细胞(LECs)增生的影响及其可能的作用机制，为晶状体后囊膜混浊(PCO)的临床治疗提供新靶点。方法将人LECs系(SRA 01/04细胞)分为Wnt3a过表达组、DKK1组和对照组。Wnt3a过表达组采用脂质体介导转染技术将Wnt3a cDNA表达载体瞬时转染入人SRA 01/04细胞构建PCO模型。DKK1组转染Wnt3a cDNA表达载体后48 h在培养基中加入100 μg/ml DKK1进行干预，对照组细胞转染pcDNA3-HA表达载体。采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测各组细胞生存率；采用免疫细胞化学法检测各组细胞增生细胞核抗原(PCNA)蛋白的表达；采用Western blot法检各组细胞中Wnt3a、CyclinD1和C-Myc蛋白的表达；采用免疫荧光技术法检测并定位各组细胞中β-catenin的表达。结果Western blot检测发现，Wnt3a过表达组Wnt3a蛋白的相对表达量为0.84±0.06，高于对照组的0.49±0.07，差异有统计学意义(t＝3.704，P<0.05)。CCK-8试验显示，不同时间点各组细胞生存率总体比较差异均有统计学意义(F分组＝10.910，P<0.05；F时间＝6.041，P<0.05)，其中Wnt3a过表达组细胞生存率明显高于对照组，DKK1组细胞生存率明显低于Wnt3a过表达组，差异均有统计学意义(均P<0.05)。对照组、Wnt3a过表达组和DKK1组细胞中PCNA阳性表达率分别为(9.4±1.4)%、(43.4±5.4)%和(14.2±2.3)%，总体比较差异有统计学意义(F＝28.250，P<0.05)，其中DKK1组和对照组细胞中PCNA阳性表达率均低于Wnt3a过表达组，差异均有统计学意义(均P<0.05)。免疫荧光技术检测发现，Wnt3a过表达组β-catenin蛋白主要表达于细胞质和细胞核，对照组β-catenin蛋白仅分布于细胞质，DKK1组β-catenin蛋白分布于细胞质，少量分布于细胞核。Western blot法检测显示，对照组、Wnt3a过表达组和DKK1组C-Myc相对表达量分别为0.59±0.05、0.93±0.02和0.47±0.08，CyclinD1的相对表达量分别为0.64±0.07、0.84±0.03和0.55±0.10，总体比较差异均有统计学意义(F＝20.580、5.040，均P<0.05)；其中Wnt3a过表达组C-Myc和CyclinD1相对表达量高于对照组和DKK1组，差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论DKK1抑制SRA01/04细胞中Wnt3a过表达诱导的Wnt/β-catenin信号通路活化，下游靶蛋白CyclinD1和C-Myc表达下调，可能是DKK1抑制人LECs增生的生物学机制。
出版日期
2020年08月10日（中国期刊网平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
