芪黄胶囊中多糖提取工艺筛选

【摘要】 　　目的确定芪黄胶囊中提取多糖的最佳工艺。方法采用正交设计法以加水量（A），提取时间（B）和提取次数（C）作为因素。结果C因素对多糖含量的影响具有显著意义，A和B因素的影响不大。结论最佳提取工艺A2B2C3，即提取3次，加10倍量水，煎煮1.5 h。

【关键词】 芪黄胶囊 多糖 正交实验 提取工艺　　

　　Abstract:ObjectiveTo optimize the extraction technology of polysaccharides in QiHuang Capsule. MethodsThe orthogonal design was used and water totalling(A) , refluxing time(B)and extraction time(C) were defined as factors of the design. ResultsC factor had notable influence on the content of polysaccharides.ConclusionOptimum extraction technology was defined as follows: A2B2C3.

　　Key words:QiHuang Capsule； Polysaccharides； Orthogonal experiment； Extracting craft

　　芪黄胶囊是在传统中医药理论指导下，结合现代药理实验研究组方并采用现代提取及制剂技术研制而成的中药复方制剂，由黄芪、玉竹、知母等7味药组成，具有益气养阴，清热和肺之功效，主治由于阴虚燥热伤及肺脾肾之糖尿病。为了发挥较为明显的降血糖作用，提取并富集方中有效成分尤显重要，通过查阅文献及预试验结果表明，方中诸药所含多糖是本方降血糖的主要有效成分，故确定以多糖组分的提取率及含量作为优化本品提取工艺的考察指标，本文采用正交实验设计对芪黄胶囊多糖提取工艺进行了研究，以苯酚－硫酸法［1～4］对多糖含量进行了测定，为芪黄胶囊现代化研究中提取多糖部位奠定了坚实的基础。

　　1 仪器与试药

　　UV721紫外可见分光光度计（上海第三分析仪器厂）；BP211D电子天平；电热三用水箱（北京医疗设备厂）；药材饮片（购于本院药房）；苯酚，化学纯；所用其它试剂均为分析纯。

　　2 方法与结果

　　2.1 影响芪黄胶囊多糖提取率的因素多糖成分大多为水溶性成分，故确定以水为溶剂对多糖进行提取，影响水提取的因素主要有加水量（A）、提取时间（B）、提取次数（C）。对3因素采用3因素3水平正交法确定多糖提取条件，因素水平表见表1。表1 因素水平（略）

　　2.2 粗多糖的提取按本品处方配量称取净药材饮片47.5 g，加水，加热回流，按L9（34）正交安排实验（见表2），合并提取液，滤过，滤液浓缩至50 ml，离心，上清液至容量瓶中备用。　2.3 多糖的含量测定

　　2.3.1 对照品溶液的制备称取105 ℃干燥至恒重的葡萄糖标准品25 mg，精密称定，置250 ml量瓶中，用蒸馏水溶解并稀释至刻度，作为对照品溶液。

　　2.3.2 供试品溶液的制备精密量取“2.2”项中滤液10 ml，加乙醇至含醇量为80％，放置24 h，倾出上清液，沉淀再加80％热乙醇洗涤2次，每次10 ml，滤过，滤渣连同滤纸置烧杯中，加水溶解（可适当加热），趁热过滤，用少量水洗涤滤器，合并滤液及洗液，放冷，置50 ml容量瓶中用水稀释至刻度，摇匀精密取2 ml置50 ml容量瓶中，再精密吸取1 ml，置10 ml具塞试管中，加水1.0 ml，各精密加入5％苯酚溶液1 ml，摇匀，迅速精密加入硫酸5 ml，摇匀，放置10 min，置40℃水浴中保温15 min，取出后迅速冷却至室温，作为供试品溶液。

　　2.3.3 标准曲线的制备精密量取对照品溶液0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 ml，分别置10 ml具塞试管中，分别加水至2.0 ml，各精密加入苯酚溶液1 ml, 摇匀，迅速精密加入硫酸5 ml，摇匀，放置10 min，置40℃水浴中保温15 min，取出后迅速冷却至室温，以相应的试剂为空白，照紫外―可见分光光度法，在490 nm处测定吸光度，以浓度（C）为横坐标，吸光度（A）为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为Y = 6 0617X － 0.012 5，r= 0.997 8(n= 6 )。实验结果表明，多糖含量以葡萄糖计，在19.5～97.3 μg范围内与吸光度呈良好的线性关系。

　　2.3.4 多糖的含量测定取“2.3.2”项下的供试品溶液，于490 nm处测定吸光度，计算含量，结果见表2，对结果进行方差分析，结果见表3。表2 多糖提取正交试验结果（略）表3 多糖含量测定结果的方差分析（略）

　　3 讨论

　　由表2的R值可以看出，各因素对多糖提取工艺的影响大小顺序是C>B>A。表3方差分析结果表明，C因素对多糖含量的影响具有显著意义，A和B因素对其影响不大。直观分析可知：A1和A2，B2和B3之间的差异均无统计学意义，考虑生产实际，确定A2和B2，C因素选C3。

　　由实验确定多糖提取的最佳条件是A2B2C3，即加10倍量水，提取3次，1.5 h/次。

　　4 结语

　　随着我国社会经济的迅速增长，人民生活水平的提高，生活方式的改变，城市化和老龄化进程的加快，糖尿病已迅速成为危害人民健康的主要疾病之一。但目前世界对于糖尿病治疗仍缺少有效方法，多数化学药品在治疗的同时，产生的毒副作用又给病人增添了新的痛苦与危险，如引起高血压病、冠心病、下肢坏死、肾脏功能衰竭等慢性并发症造成残废甚至过早死亡［5］。近年来中药多糖成分如黄芪多糖、知母多糖等由于其降血糖作用明显、毒副作用小、来源广泛等优点已深受医学家和药学家的重视［6］，芪黄胶囊为纯中药制剂，且均为普通常见药材，其降血糖作用温和持久，安全无害，为预防和治疗糖尿病提供了一个新的选择。本实验确定了芪黄胶囊多糖提取的最佳工艺，为进一步开发芪黄胶囊的临床应用提供了依据，为其现代化研究奠定了坚实的基础。

【参考文献】
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　　［5］刘丽平,黄 键,陈必链. 天然产物降血糖成分的研究进展［J］.海峡药学,2004,16(5):4.

　　［6］徐梓辉,周世文. 植物多糖及其降血糖作用的研究进展［J］.华西药学杂志,2001,16(5):365.